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1、1产后康膏的质量标准研究【摘要】 目的建立产后康膏的质量标准。方法采用薄层色谱法对处方中陈皮、黄芪、甘草进行鉴别；用高效液相法测定制剂中芍药苷的含量，采用 Lichrospher-C18 色谱柱（4.6 mm200 mm，5 m），流动相为水乙腈（8713），流速 1.0 ml/ min；柱温 30；检测波长 230 nm；进样量 10l。结果薄层色谱专属性强；芍药苷的线性范围为 0.5362.144g，r=0.999 5，平均加样回收率为 97.96%，RSD 为1.71%（n=6）。结论该方法简便、准确，重复性好，可作为产后康膏的质量控制标准。【关键词】 产后康膏 芍药苷 陈皮 黄芪 甘草
2、 质量标准Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard for Chanhoukang Paste.MethodsRericarpium Citri Reticulatae, Radix Astragali,Radix et Rhizoma Salviae and Radix Glycyrrhizae in this prescription were identified by TLC.The content of paeoniflorin was determined by HPLC. The column of Lichrosph
3、er-AQ- C18（4.6 mm200 mm，5m）was used. The mobile phase was Acetonitrile- Water(13:87),at the flow of 1.0 mlmin-1. The column temperature was 30,and peaks were detected at 230 nm.ResultsThe study on the quality control showed that the characteristic of identification by TLC was distinct and highly spe
4、cific.The linear range of naringin was 0.5362.144 g，r=0.9995,the average recovery was 97.96%,RSD=1.71%(n=6).ConclusionThe method is easy, accurate and reproducible.It can be used effectively for the quality control of this preparation.Key words：Chanhoukang paste; Paeoniflorin; HPLC; TLC; Quality sta
5、ndard产后康膏处方来源于原部颁标准，由黄芪、陈皮、甘草等多味中药组成，具有益气养血、滋肾柔肝、安神敛汗、健脾和胃的功效，适用于产后贫血、恶露不净、头晕目眩、心悸多汗、失眠神疲、食欲不振等证。笔者按照中药新药研究规范，根据以上药物的理化性质1对黄芪、甘草、陈皮进行了鉴别，同时使用 HPLC 法测定了制剂中芍药苷的含量，以期建立可靠、准确、专属性强的质量控制方法。21 仪器与材料日本岛津 LC-10ADVP 高效液相色谱仪，岛津 SPD-10AVP 紫外检测器，HW色谱工作站。药材购于南京市药材公司，由南京中医药大学王春根教授进行品种和质量鉴定；芍药苷对照品（批号 0736-200219）、黄
6、芪甲苷对照品（批号 0781-200210）及陈皮、甘草对照药材均购自中国药品生物制品检定所。所有试剂均为色谱纯或分析纯。2 方法与结果2.1 定性鉴别2.1.1 黄芪 TLC 鉴别对照品溶液制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备：取本品 20 g，加水 30 ml 使溶解，用水饱和的正丁醇提取3 次，30 ml/次，合并正丁醇液，加氨试液提取 3 次，30 ml/次，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇 1 ml 使溶解，作为供试品溶液。阴性对照液制备：取除黄芪以外的其它 19 味药材按处方比例制得的阴性样品20 g，按上“供试品溶液的制备”项
7、下的方法制备阴性样品溶液。吸取上述对照品溶液 4 l，供试品溶液和阴性对照液各 10l，分别点于同一硅3胶 G 薄层板上，以三氯甲烷甲醇水（1372）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照液无此斑点。见图1。2.1.2 陈皮 TLC 鉴别2对照药材溶液的制备：取陈皮对照药材 5 g，加乙醇 40 ml，回流提取 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水 20 ml 使溶解，用乙醚提取 2 次，20 ml/次，弃去乙醚液，水层再用水饱和的正丁醇提取 3 次，20 ml/次，
8、合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇 1 ml 使溶解，作为对照药材溶液。供试品溶液的制备：取本品 20 g，加乙醇 70 ml，用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。阴性对照液的制备：取除陈皮以外的其它 19 味药材按处方比例制得的阴性样品 20 g，按上“供试品溶液的制备”项下的方法制备阴性样品溶液。吸取上述 3 种溶液各 10 l，分别点于同一用 0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G 薄层板上，以醋酸乙酯甲醇水（1001713）为展开剂，展至 8 cm，取出，晾干，再以甲苯醋酸乙酯甲酸水（201011）的上层溶液为展开剂，展至 12 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm
9、）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照液无此斑点，见图 2。2.1.3 甘草 TLC 鉴别34对照药材溶液的制备：取甘草对照药材 5 g，加盐酸 1 ml 及石油醚（6090）25 ml，加热回流 1 h，滤过，滤液挥干，残渣加石油醚（6090）1 ml 使溶解，作为对照药材溶液。供试品溶液的制备：取本品 15 g，加盐酸 2 ml 及石油醚（6090）40 ml，用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。阴性对照液的制备：取除甘草以外的其 19 味药材按处方比例制得的阴性样品15 g，按上“供试品溶液的制备”项下的方法制得阴性对照液。吸取上述
10、3 种溶液各 10 l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚（6090）甲苯醋酸乙酯冰乙酸（102070.5）为展开剂，展开，取出晾干，喷以 5%的磷钼酸乙醇溶液，在 105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照液无此斑点，见图 3。 2.2 含量测定2.2.1 色谱条件本方中白芍为毛茛科植物，含有芍药苷，且芍药苷的化学性质稳定，测定方法较简便，故在含量测定时选择制剂中的芍药苷为指标4。Lichrospher-AQ-C18 色谱柱（4.6 mm200 mm，5 m），流动相：乙腈-水（1387）进行洗脱，检测波长为 230 nm，柱温 3
11、0，流速 1 ml/min。2.2.2 对照品溶液制备 5精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的芍药苷对照品 26.8 mg，加甲醇溶解，并定容至 50 ml，制成每毫升含 0.536 mg 的溶液。精密吸取此液 1.2 ml，用甲醇稀释至 10 ml，制成每毫升含 0.064 32 mg 的溶液，即得。2.2.3 供试品溶液制备取 3 个批号的产后康膏，每批取 2 份，每份约 10 g，精密称定，加甲醇 50 ml使溶解，滤过，用少量甲醇洗涤沉淀及容器，并入滤液中，滤液蒸干，残渣加水 20 ml 使溶解，用水饱和的正丁醇提取 4 次，20 ml/次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并
12、转移至 25 ml 的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.2.4 系统适应性考察分别精密吸取芍药苷对照液和供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，理论塔板数以芍药苷峰计，不低于 3500，此时，芍药苷峰与其它相邻峰基线分离，R1.5，保留时间约为 16 min。2.2.5 线性关系考察精密吸取浓度为 0.536 mg/ml 的对照品溶液 1，1.5，2，3，4 ml，加甲醇稀释至10 ml，摇匀，制成 53.6，80.4，107.2，160.8，214.4 g /ml 的系列溶液。精密吸取 5 个不同浓度的对照液各 10 l，注入液相色谱仪，各进 2 针。以浓度 C（g/ml）为横坐标，以芍药
13、苷平均峰面积 Y 为纵坐标进行线性回归，得回归方程，C=810-4A-2.1097。r=0.999 5，线性范围是 0.5362.144 g。62.2.6 精密度实验精密吸取浓度为 0.064 32 mg/ml 的对照品溶液 10l，连续进样 5 次，测得芍药苷峰面积值的 RSD 为 1.24%。2.2.7 稳定性实验精密吸取批号为 051012 的第 1 个供试液 10l，每间隔 3 h 进一针，连续考察15 h，结果芍药苷峰面积值的 RSD 为 1.83%，表明在 15 h 内基本稳定。2.2.8 重复性实验取批号为 050915 的产后康膏约 10 g,共 6 份，精密称定。分别用与“2
14、.2.3”项下相同的方法制得供试液，并用与“2.2.10”项下相同的方法测得样品中指标成分芍药苷的含量，RSD=3.74%，结果表明重复性良好。2.2.9 加样回收率实验取批号为 050915 的产后康膏约 10 g，共 6 份，精密称定，分别置三角烧瓶中，各精密加入浓度为 0.536 mg/ml 的芍药苷母液对照液 4.2 ml，用与“2.2.3”项下相同的方法制得供试液。并用与“2.2.10”项下相同的方法测得样品中指标成分芍药苷的含量。结果见表 1。表 1 加样回收率实验（略）2.2.10 样品测定精密吸取各供试液 10 l，注入液相色谱仪，分别进 2 针。采用标准曲线法定量，根据取样量
15、和稀释度，计算含量。结果见表 2。 表 2 样品含量测定结果（略）7由实验结果可知，仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好，符合定量要求。根据测定结果,暂定每 1 g 产后康膏中含白芍以芍药苷（C23H28O11）计，不得少于 0.18 mg。3 讨论实验证明，本方中黄芪、陈皮、当归的鉴别专属性强，重复性好，操作简便，故正式纳入产后康膏质量标准中；而益母草的鉴别，无论是用化学对照品，还是用对照药材，在可能的取样量下，样品中均找不到特征性斑点，故暂未建立益母草的鉴别方法。本方中白芍为毛茛科植物，含有芍药苷，且芍药苷的化学性质稳定，测定方法较简便，故在含量测定时选择制剂中的芍药苷为指标。【参考文献】1肖崇厚，杨松松，洪筱坤.中药化学M.上海：上海科学技术出版社，1997：237.2李津海，陈双璐.HPLC 法测定产后康中芍药苷J.中草药，2005,36(8)：1178.3黄燕芬， 洪杭球.复方乳腺康颗粒剂中柴胡皂苷陈皮苷的薄层鉴别J. 浙江中医学院学报，2003，5（27）:78.4康廷国.中成药薄层色谱鉴别M.北京：人民卫生出版社，1995：622.
