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1、1HPLC 法测定大黄微波提取物中大黄酸和 番泻苷 A 的含量【摘要】 目的 建立大黄微波提取物中大黄酸、番泻苷 A 两种泻下成分的含量测定方法。方法 采用 HPLC 法，色谱柱：Phenomenex Gemini C18 柱（250 mm4.6 mm，5m），流动相：甲醇 0.1%磷酸（体积比 8020），流速：1.0 mL/min，检测波长：254 nm，柱温：25 。结果 测定 3 批提取物，大黄酸和番泻苷 A 平均质量分数分别为 7.24 mg/g 和 10.28 mg/g。结论 本法简单快捷，结果可靠，可作为大黄提取物中大黄酸和番泻苷 A 的含量测定方法。 【关键词】 HPLC 法；
2、大黄提取物；大黄酸；番泻苷 AAbstract:Objective To determine the contents of rhein and sennoside A in extracts of rhubarb prepared with microwave extraction Methods Samples were analyzed on a Phenomenex Gemini C18(250 mm4.6 mm，5 m) column using methyl alcohol 0.1%H3PO4 (8020) as mobile phaseThe flow rate was 1.0
3、mL/min and UV detection wavelength was 254 nmThe column temperature was 25 Results Contents of rhein and sennoside A in the extracts of rhubarb were 7.24 mg/g and 10.28 mg/g, repectivelyConclusion The method is simple and reproducible，which could be used for the analysis of rhein and sennoside A in
4、rhubarb extractsKey words:HPLC；rhubarb extracts；rhein；sennoside A大黄的泻下成分为蒽醌类，以番泻苷 A（sennoside A）的泻下作用最强，大黄酸（rhein）亦有一定泻下作用。本文在参照文献1-3的基础上，建立了测定大黄微波提取物中的大黄酸和番泻苷 A 这两种泻下成分含量的 HPLC 法，为研究大黄不同提取工艺提取物、不同大黄品种、大黄不同部位泻下作用大小奠定了成分分析方面的基础。1 仪器与试药2岛津 LC 10A 泵、SPD 10A 检测器、KQ 250 型超声波清洗器（250 W，40 kHz，昆山市超声仪器有限公司）、
5、电热套（山东鄄城光明仪器有限公司）。大黄酸（批号：110757 200206）购自中国药品生物制品检定所；番泻苷 A(批号：1126070 15204229)购自 SIGMA 公司；大黄药材购自陕西省宝鸡市药材公司，经本院药用植物与中药鉴定学教研室严寒静副教授鉴定为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L)；大黄提取物（自制）。甲醇为色谱纯（Merk 公司），超纯水为自制，其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Phenomenex Gemini C18 柱（250 mm4.6 mm，5 m），流动相：甲醇 0.1%磷酸（体积比 8020），流速：1.0 mL/mi
6、n，检测波长：254 nm，柱温：25 ，进样量：20 L。理论塔板数以番泻苷 A 计算应不低于 11 000。2.2 对照品溶液的制备精密称取大黄酸对照品 1.0 mg、番泻苷 A 对照品 10 mg，分别置 50 mL 棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别得到大黄酸对照品贮备液和番泻苷 A 对照品贮备液。进样前用 0.45 m 微孔滤膜滤过。精密吸取两种对照品贮备液各 3 mL，置同一个 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀,按“2.1”项下色谱条件进样，得对照品溶液色谱图，见图 1。32.3 供试品溶液的制备HPLC 法测定大黄微波提取物中大黄酸和番泻苷 A 的含量精密称取大黄微波
7、提取物适量(约含生药 0.5 g)，置具塞锥形瓶中，加入甲醇 20 mL，超声提取 30 min，滤过。滤渣重新置具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷 20 mL，超声再提取 30 min，滤过。滤渣加 2.5 molL H2SO4 15 mL，电热套加热 1 h，冷却至室温，加入三氯甲烷 15 mL 回流 30 min，冷却后置分液漏斗中，分出三氯甲烷液，重复萃取 3 次，合并三氯甲烷液，蒸馏水洗至中性，与水解前三氯甲烷提取液合并，回收三氯甲烷至干。残渣与甲醇提取液合并，加甲醇定容至 100 mL，得供试品溶液 I，备用。进样前用 0.45 m 微孔滤膜滤过。精密量取上述供试品溶液 10 mL，定容至
8、 50 mL，得供试品溶液。按“2.1”项下色谱条件，分别将供试品溶液和供试品溶液进样，结果见图 2。 2.4 线性关系考察精密吸取“2.2”项下两种对照品贮备液各 1、2、3、4、5 mL，依次置于 5 个 10 mL容量瓶，两对照品贮备液混合，加甲醇至刻度，摇匀。分别进样测定，以峰面积(A)对质量浓度()进行线性回归，得大黄酸的回归方程 A=51132-28610，r=0.999 9，线性范围 2.0410.20 mg/L；番泻苷 A 的回归方程 A=170.29-29.691，r=0.999 7，线性范围 20.2101.1 mg/L。2.5 精密度试验取同一浓度的对照品溶液，连续进样
9、6 次，测定峰面积，计算 RSD 值，得到大黄酸的 RSD=0.03%，番泻苷 A 的 RSD=0.43%。2.6 重复性试验4取供试品溶液和供试品溶液，各连续进样 6 次，分别测定大黄酸和番泻苷A 的峰面积，计算 RSD 值，得到大黄酸的 RSD=0.03%，番泻苷 A 的 RSD=0.54%。2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、12 h 进样，分别测定大黄酸和番泻苷A 的峰面积，计算 RSD 值，结果得到大黄酸的 RSD=0.9%，番泻苷 A 的 RSD=2.0%。表明样品溶液在 12 h 内基本稳定。2.8 加样回收率试验取已知浓度的大黄微波提取物适量，精密称
10、定，精确加入对照品，余同“2.3”项下操作，测定大黄酸和番泻苷 A 的峰面积，计算大黄酸和番泻苷 A 加样回收率，结果见表 1。表 1 大黄酸和番泻苷 A 加样回收率（略）2.9 样品测定取大黄微波提取工艺提取物 3 批，按“2.3”项下制备供试品溶液，依法测定。结果见表 2。表 2 大黄提取物中大黄酸和番泻苷 A 含量（略）3 讨论3.1 大黄中泻下作用最强的成分是番泻苷 A，大黄酸的泻下作用相对较弱4。本文只研究了大黄酸和番泻苷 A 的含量的测定方法，如果考虑把其他泻下组分的含量包括进来，按照各组分对泻下作用的贡献的大小，加上权重，则更能反映大黄泻下作用的强弱。53.2 由稳定性试验可知，样品中大黄酸比番泻苷 A 稳定性更好。进一步试验表明，样品若在 4 冰箱中放置一个月，进样测定大黄酸峰面积的 RSD 在 2.0之内。【参考文献】1国家药典委员会中华人民共和国药典M北京：化学工业出版社，2005：172张红霞，金艺，许海燕，等HPLC 法测定胃力片中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量J沈阳药科大学学报，2007，24(7)：417-420.3郑志华，祝晨蔯HPLC 测定大黄提取工艺产物番泻苷 A 的含量J中药材，2004，27(12) ：950-951.4郑占虎，董泽宏，佘靖中药现代研究与应用：第一卷M北京：学苑出版社，1997：389-390.
