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1、1HPLCELSD 法测定注射用硫酸异帕米星 含量【摘要】 目的 建立高效液相色谱 蒸发光散射检测(HPLC ELSD)法测定注射用硫酸异帕米星含量的方法。方法 色谱柱为 Zorbax SB C18 色谱柱(250 mm4.6 mm,5 m),流动相为 1%三氟醋酸水溶液 甲醇(体积比 955),流速:0.5 mL/min; 蒸发光散射检测器,漂移管温度 45 ,载气压力 368 Pa。结果 异帕米星在 0.10.8 mg/mL 的范围内呈较好的线性关系(r=0.9995),平均回收率 101.0%,RSD=0.32%;系统精密度 RSD=0.34%。结论 本方法操作简便、快速，方法的精密度、
2、准确性、重现性均较好地满足质量控制的要求，可用于注射用硫酸异帕米星的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法; 蒸发光散射检测器; 硫酸异帕米星Abstract:Objective To establish an HPLC ELSD method for the quantification of isepamicin sulfate in the injection. Methods The analysis was performed on a column of Zorbax SB C18 (250 mm4.6 mm, 5 m ). The mobile phase consisted o
3、f 1% tifluoroacetic methanol (955)and the flow rate was 0. 5 mLmin-1. The drift tube temperature was 45 ， ELSD was used as the detector with pressure of nebulizing gas of 368 Pa. Results The calibration curve was linear in the range of 0.10.7 mg/mL (r=0. 9995). The average recovery was 101. 0% with
4、RSD 0.32%. Conclusion This method is simple, rapid, accurate and reproducible for the quality control of the injection of isepamicin sulfate.Key words:HPLC; evaporative light-scattering detection; isepamicin sulfate硫酸异帕米星为氨基糖甙类抗生素,由庆大霉素 B 半合成而来，目前仅在日本抗生素基准解说（简称“日抗基”）中收载。 “日抗基”中采用抗生素微生物检定法测定硫酸异帕米星的含量
5、,操作烦琐、测定误差较大。由于氨基糖甙类抗生素无紫外吸收,无法采用紫外检测器，因此,通常采用衍生化的方法进行测定12，但该法操作烦琐、费时,而且反应过程中可能会产生副产物,干扰有关物质的测定。蒸发光散2射检测器（ELSD）是一种通用型质量检测器,其响应不依赖物质的光学特征,对无紫外或紫外末端吸收的有机化合物的检测显示出极大的优越性。有文献报道用蒸发光散射检测器进行氨基糖甙类抗生素的质量分析3。本研究建立了在酸性条件下 HPLC ELSD 法测定注射用硫酸异帕米星含量的方法,测定结果与“日抗基”中收载的微生物检定法的测定结果基本一致。1 材料与方法1.1 仪器与试剂岛津高效液相色谱系统 2010
6、CHT 型和 SEDEX 75 型蒸发光散射检测器;Zorbax SB C18 色谱柱(250 mm4.6 mm,5 m)。三氟醋酸为 TEDIA COMPANY INC 产品,分析纯;水为自制双蒸水。硫酸异帕米星标准品（规格：684 mg/g,批号：050701）及注射用硫酸异帕米星由海南长安国际制药有限公司提供。1.2 色谱条件采用 1%三氟醋酸水溶液 甲醇(体积比 955)为流动相,流速为0.5 mL/min;ELSD 检测器漂移管温度为 45 , 载气压力 368 Pa;进样量 20 L。1.3 溶液的配制1.3.1 标准品溶液的配制 取硫酸异帕米星标准品,精密称定,用水溶解,分别制成
7、浓度为 0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mg/mL 的标准溶液,每个浓度平行配制 2 份。1.3.2 供试品溶液的配制 取供试品注射用硫酸异帕米星,精密称定,用水溶解,制成浓度为 0.5 mg/mL 的溶液,平行配制 6 份。1.4 方法学考察1.4.1 线性关系 精密称取异帕米星对照品适量,加水制成含注射用硫酸异帕米星 0.1、0.2、0.4、0.6 及 0.8 mg/mL 的溶液, 分别进样 20 L, 以浓度的常用对数3（X）为横坐标,以峰面积的常用对数（Y）为纵坐标作图,计算得回归方程：Y=1.249 6X+5.663，r=0 999 5。结果表明异帕米星在 0.10.8 mg
8、/mL 的范围内呈较好的线性关系。1.4.2 精密度试验 取对照品溶液,连续进样 6 针,以主峰峰面积计算 RSD 为0.34%。 143 稳定性试验 取供试品（批号 051101）溶液,分别于0、1、2、4、6、8 h 取 20 L,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果 RSD 为 0.78%。144 重复性试验 取同一批供试品（批号 051101），配制成 6 份溶液，分别进样分析，含量测定结果的 RSD 为 0.6%(n=6)。1.5 回收率试验精密称取已知含量的注射用硫酸异帕米星适量（高、中、低各3 份）和与之相对应量（按注射用硫酸异帕米星处方比例）的硫酸异帕米星标准品9 份，分别置于 1
9、00 mL 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取 20 L 注入液相色谱仪进行测定,计算回收率，测得回收率分别为 100.8%、100.9%和 101.4%，平均回收率为 101.0%，RSD 为 0.32%,表明回收率良好。2 含量测定结果采用本法测定 3 批注射用硫酸异帕米星的含量；按企业申报的质量标准测定方法，采用微生物检定二剂量法测定注射用硫酸异帕米星的含量，结果见表 1。结果表明两种方法的含量测定结果非常接近。硫酸异帕米星供试品溶液的色图谱见图 1。3 讨论3.1 本文所建立的 HPLC ELSD 方法与目前中国药典采用的效价方法及英、4美等国家采用的衍生化方法比较，具有以下优点:
10、不需要进行衍生化，减少了样品前处理所带来的误差，提高了分析的精度。表 1 3 批样品 HPLC ELSD 法与微生物检定法测定结果（略）Tab.1 Content of isepamicin sulfate detected by HPLC ELSD and antibiotics microbial assays, separately1.硫酸根; 2.异帕米星图 1 硫酸异帕米星测定 HPLC 色谱图（略）Fig.1 HPLC chromatigram of isepamicin sulfate3.2 已有文献报道采用 0.05 mol/L 五氟丙酸溶液 甲醇系统为流动相测定硫酸异帕米星原
11、料的含量34，未见对注射用异帕米星的含量进行测定的文献报道，本文参照硫酸小诺霉素注射液的小诺霉素组分测定方法5建立了测定注射用异帕米星含量的 HPLC ELSD 法，结果表明本法可靠、可行。【参考文献】1 JILL A M. High performance liquid chromatographic determi nation of isepamicin in plasma, urine and dialysate J.J Chromatogr,1990,526:487-488.2 MAYUMI S, KOICHIRO K, EIKO Y,et al. Column liquid chro matographic determination of isepamicin in navity using gauzeJ.J Chromatogr,1990,529:473-475.3 王明娟,成双红,张斗胜，等.HPLC ELSD 法测定异帕米星含量J.中国抗生素杂志，2003，28（1）：20-21.4 王建,洪利娅,倪坤仪,等.高效液相色谱 蒸发光散射检测法测定硫酸异帕米星及其有关物质的含量J.分析化学,2006（1）:19-22.55 国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部M.北京：化学工业出版社，2005:719.
