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1、1清肝片的质量标准研究【关键词】 ,清肝片；,甘草酸；,薄层色谱；,高效液相色谱摘要：目的建立清肝片的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别板蓝根、茵陈和甘草;采用高效液相色谱法测定样品中甘草酸的含量,高效液相的色谱条件为：Agilent Eclipse XDB-C18 柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相为甲醇-0.2 molL-1 醋酸铵溶液-冰醋酸（67331）。结果薄层鉴别专属性强，高效液相色谱法甘草酸铵在 0.361.80 g 范围内呈良好的线性关系，平均回收率98.33%，RSD 为 1.24%。结论该方法可更好地控制清肝片的质量。关键词： 清肝片； 甘草酸； 薄层色谱； 高效
2、液相色谱Quality Standard of Qinggan TabletAbstract：ObjectiveTo establish the quality standard of Qinggan Tablet.MethodsTLC was used to identify Radix Isatidis, Herba Artemisiae Scopariae and Radix Glycyrrhizae; and HPLC was used to determine the content of Glycyrrhiziate acid. Agilent Eclipse XDB-C18 co
3、lumn（4.6 mm250 mm，5 m）with mobile phase of methanol-0.2 molL-1 ammonium acetate solution-glacial acetic acid(67331) was used for the determination of puerarin. ResultsThe TLC for identification was special and the linear range of puerarin was 0.361.80 g and recovery rate was 98.33%, RSD was 1.24%,re
4、spectively. ConclusionThis method can be used to control the quality of Qinggan Tablet better.Key words：Qinggan Tablet； Glycyrrhiziate acid； TLC； HPLC清肝片是由板蓝根、茵陈、甘草 3 味中药组成，具有清热解毒、疏肝退黄的功效，用于急、慢性肝炎1。为了有效控制该产品的质量，对方中板蓝根、茵陈、甘草进行了定性鉴别，采用 HPLC 法测定甘草中主要活性成分甘草酸的含量，结果方法简便，准确，重现性好，可适用于该制剂的质量控制。21 仪器与试药1.1 仪器
5、 Agilent1100 系列高效液相色谱仪, Agilent1100 化学工作站；CQX25-06 超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。1.2 试药清肝片(广西玉林制药有限责任公司生产);甘草酸铵对照品（供含测用,批号:110731-200510），靛玉红与靛蓝对照品，板蓝根、茵陈、甘草对照药材均由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。2 定性鉴别2.1 茵陈取本品 6 片，除去糖衣，研细，加甲醇 10 ml 浸渍 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1 ml 溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材 1 g，按供试品溶液提取方法制备成每毫升含 0.5 g 的
6、对照药材溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺茵陈的阴性样品，然后按供试品溶液提取方法制备成阴性对照液。照薄层色谱法（中国药典2005 年版部附录 VIB）实验，吸取上述溶液各 10l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚（6090）-醋酸乙酯-丙酮（532）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓氨水，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同蓝色的荧光斑点（阴性对照无干扰）。见图 1。2.2 甘草取本品 15 片，除去糖衣，研细，称取 2 g，加乙醇 25 ml，超声提取 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1ml 溶解作为供试品溶液。另取甘草对照药
7、材1 g，按供试品溶液提取方法制备成每毫升含 0.5 g 的对照药材溶液，再按标准处方比例和制备方法制备缺甘草的阴性样品，然后按供试品溶液提取方法制备成阴性对照液。照薄层色谱法（中国药典2005 年版部附录 VIB）实验，吸取上述 33种溶液各 5 l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-无水乙醇-氨试液（5121）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇液，在 105加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同橙黄色的斑点（阴性对照无干扰）。见图 2。2.3 板蓝根取本品 10 片，除去糖衣，研细，用三氯甲烷 20 ml 超声处理 30 min，提取
8、液置蒸发皿中蒸干，残渣加三氯甲烷 2 ml 溶解，作为供试品溶液。另取板蓝根对照药材 1 g，按供试品溶液提取方法制备成每毫升含 0.5 g 的对照药材溶液，再分别取靛玉红与靛蓝对照品适量，加乙醚制成每毫升含靛玉红 0.5 mg、靛蓝 0.6 mg 的溶液，作为对照品溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺板蓝根的阴性样品，然后按供试品溶液提取方法制备成阴性对照液。照薄层色谱法（中国药典2005 年版部附录 VIB）实验，吸取上述溶液各 10 l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，石油醚(6090)-醋酸乙酯-丙酮 (70.52.5)2，3为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材、对
9、照品相应的位置上，分别显相同颜色的斑点（阴性对照无干扰），见图 3。3 甘草酸的含量测定3.1 色谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18 柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相：甲醇-0.2molL-1 醋酸铵溶液-冰醋酸（67331），流速：1.0 mlmin-1；检测波长：250 nm；柱温：28；进样量：10 l。理论塔板数按甘草酸铵计算应不低于 3 000。3.2 对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品 18 mg，置 100 ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每毫升含 0.180 mg 的对照品贮备液(相当于每毫4升含甘草酸 0.176 3 mg)。
10、精密吸取该贮备液 3.0 ml，置 5 ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成每 1ml 含 0.108 mg 的对照品溶液。 3.3 供试品溶液的制备取本品 24 片，除去糖衣，研细，称取约 1.2 g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入流动相 30 ml，密塞,称定重量,浸泡 1 h，超声处理 30 min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量,摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液经 0.45 m 滤膜滤过，作为供试品溶液。图 1 茵陈 TLC（略） 图 2 甘草 TLC（略） 图 3 板蓝根 TLC（略） 3.4 空白实验按处方及制备工艺制备不含甘草药材的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法
11、制备阴性对照溶液。按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各 10 l，分别注入液相色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照在此保留时间无干扰（见图 46）。因此可在此系统条件下对甘草酸进行定量分析。图 4 对照品色谱图（略） 图 5 供试品色谱图（略） 图 6 阴性对照色谱图（略） 3.5 线性关系考察精密吸取 3.2 项的对照品贮备液 2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml，5分别置于 10 ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取 10 l，注入液相色谱仪,记录峰面积,以对照品进样量(g)为横
12、坐标,峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 Y=1.302 8103X - 5.866 8;r=0.999 9，甘草酸铵在 0.361.80 g 范围内呈良好的线性关系。3.6 精密度实验精密吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，重复进样 6 次,结果峰面积均值为 850.94， RSD=0.98。3.7 重复性实验平行制备清肝片(批号为 541003)的供试品溶液 6 份,照 3.1 项下的色谱条件进行测定，结果平均含量 0.453 8 mg/片, RSD=1.25。3.8 稳定性考察精密吸取供试品溶液 10 l，分别在 0，2，4，6，8，10，12 h 进样一次，测定峰面积，
13、 RSD=1.05%。表明供试品溶液在 12 h 内稳定。3.9 加样回收率实验称取已知含量为 0.445 1 mg/片的清肝片除包衣药粉 0.6 g,精密称定,分别精密加入浓度为 0.180 mgml-1 的对照品贮备液3.5，3.5，5.0，5.0，6.5，6.5 ml，照 3.3 项下制备供试液，依法测定，计算回收率。结果见表 1。表 1 甘草酸加样回收率计算结果（略） 3.10 样品测定按 3.2 和 3.3 项方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件，精密吸取 10 l，注入色谱仪，测定。结果见表 2。表 2 样品测定结果（略） 64 讨论4.1 本标准对制剂中的板蓝根、茵
14、陈、甘草进行了薄层鉴别，结果与对照品或对照药材斑点一致，效果较好。其中在板蓝根薄层鉴别中选用甲醇为溶媒,靛蓝斑点不明显,而选用三氯甲烷为溶媒时, 靛玉红靛蓝斑点清晰；鉴别茵陈时,选用 5%的氢氧化钾为显色剂,阴性有轻微干扰,经多次试验发现是甘草干扰，当选浓氨水作为显色剂时,阴性干扰消失；在甘草薄层鉴别中,曾参考文献4，5中的展开剂，但效果都不理想，经摸索用醋酸乙酯-丙酮-无水乙醇-氨试液（5121）比较好，氨试液要求临用新配。4.2 在提取过程中，曾用甲醇、流动相、稀乙醇三种不同的溶剂提取清肝片，结果用流动相作为提取溶剂时，得到的色谱峰峰形较好，能达到基线分离。同时比较了浸泡与不浸泡的提取，结
15、果先浸泡一个小时再超声处理，提取得到的甘草酸含量更高。4.3 采用甘草酸铵作为对照品，因为在流动相含有醋酸的条件下，甘草酸铵和甘草酸的保留时间是一致的，在计算含量时，需将甘草酸铵的量折算成甘草酸的量，因此不影响测定结果。参考文献：1 国家药典委员会.中国药典，部S北京：化学工业出版社，2005：59.2 宗玉英,党合群,杨风梅.薄层扫描法的测定复方板蓝根胶囊中靛玉红含量J.青海医药杂志,2000,30(3):52.3 张玉蛾,李献州.薄层-紫外法测定咽炎合剂中齐墩果酸、靛蓝、靛玉红的含7量J.中成药,1999,21(4):205.4 陈 平，戴 忠，高咏莉，等.糖尿灵片的质量标准研究J.中成药，2005，27（8）：903.5 孙守景，高剑峰，李兰忠，等.加味酸枣仁合剂质量控制方法的研究J.中国中医药信息杂志，2005，12（6）：44.
