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1、1丹心舒胶囊中三七和丹参的有效成分含 量测定【摘要】 目的 建立丹心舒胶囊中三七和丹参有效成分的含量测定方法。方法 采用 HPLC 法测定本品中三七中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、三七皂苷 R1 及丹参中丹参酮A 的含量。结果 人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、三七皂苷 R1 线性范围分别依次为 0.9249.24 g、0.7367.36 g、0.212.10 g；平均回收率分别为100.19、100.55、100.21，RSD 分别为 1.67、1.29、1.55；丹参酮A 线性范围为 0.040.40 g,平均回收率为 100.79，RSD 为 1.40。结论 本方法简便可靠，结果
2、稳定，可用于丹心舒胶囊中三七和丹参的有效成分的含量测定。 【关键词】 丹心舒胶囊 人参皂苷 Rg1 Rb1 三七皂苷 R1 丹参酮A 含量测定Analysis of the active compounds of Panax notoginseng and Salviae miltiorrhizae in Danxinshu capsulesAbstract:Objective To analyze the active compounds of Panax notoginseng and Salviae miltiorrhizae in Danxinshu capsules. Methods
3、 HPLC was used to analyze the contents of ginsenoside Rg1 and Rb1, notoginsenoside R1 and tanshinoneA in Danxinshu capsules. Results The linear ranges of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, notoginsenoside R1 and tanshinone A were 0.9249.24, 0.7367.36, 0.212.10 and 0.040.40 g with average recoveries o
4、f 100.19 (RSD=1.67) , 100.55 (RSD=1.29), 100.21 (RSD=1.55) and 100.79 (RSD=1.40) , respectively. Conclusion The method is simple, reliable and stable, which could be used for the quality control of Danxinshu capsules.Key words: Danxinshu capsule；ginsenoside Rg1; ginsenoside Rb1；notoginsenoside R1; t
5、anshinoneA丹心舒胶囊由三七、丹参、桃仁等十一味药组成，本方为活血化瘀、通窍止痛类药物,并能扩张血管，增加冠状动脉血流量，用于冠心病、心绞痛等症。2三七和丹参为方中主药，三七中的主要有效成分是人参皂苷 Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷 R1，已有文献报道采用 HPLC 法测定以上成分的含量来控制制剂的质量1-7。孙树周7和廖华卫8等报道采用 HPLC 法对丹参中丹参酮A进行含量测定。本文采用 HPLC 法，同时对丹心舒胶囊中的三七总皂苷和丹参酮A 进行了含量测定，可用于控制丹心舒胶囊的质量，同时也可作为丹心舒胶囊的质控标准。1 仪器与试药Waters2695 型高效液相色谱仪(美国 W
6、aters 公司)；PDA 检测器（Waters 2996）；Diamonsil C18 柱（5 m，250 mm4.6 mm，迪马公司）；KQ 100 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。人参皂苷 Rg1（批号：110703-200425）、人参皂苷 Rb1（批号：110704-200420）、三七皂苷 R1（批号：110745-200415）、丹参酮A（批号：l1043-200504）对照品均购自中国药品生物制品检定所；甲醇（天津市四友生物医学技术有限公司，色谱纯）；乙腈（迪马公司，色谱纯）；屈臣氏蒸馏水。丹心舒胶囊（自制，批号为050806、050807、050808）。2 人参中
7、有效成分含量测定2.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18 柱（5 m，250 mm4.6 mm）；以乙腈为流动相 A，水为流动相 B，进行二元梯度洗脱，洗脱程序：0120 min 流动相 A 19%36%，流动相 B 81%64%；流速： 1.0 mLmin-1；柱温：30 ；检测波长：203 nm。32.2 对照品溶液制备精密称取经五氧化二磷减压干燥的人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 及三七皂苷R1 对照品适量，分别加甲醇制成：人参皂苷 Rg1 质量浓度为 0.462 mg/mL、人参皂苷 Rb1 质量浓度为 0.368 mg/mL，三七皂苷 R1 质量浓度为 0.105 mg/
8、mL 的溶液，将三者混合作为对照品溶液。2.3 供试品溶液制备取样品适量，研细，混匀，取约 1.0 g，精密称定，置 50 mL 量瓶中，加甲醇适量，超声 30 min，使三七总皂苷溶解后，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得。2.4 阴性溶液制备按处方比例依法配制除三七以外的阴性样品，按“2.3”项方法制备三七阴性溶液。取以上样品进行测定，结果显示阴性对照色谱中，人参皂苷 Rg1、人参皂苷Rb1 和三七皂苷 R1 峰附近无其他峰影响。结果见图 1。A.对照品溶液 B.供试品溶液 C.阴性溶液图 1 三七总皂苷的 HPLC 图谱（略）Fig.1 HPLC of Panax Notoginseny
9、 Saponins2.5 线性关系的考察4分别精密吸取人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R1 对照品溶液2、4、8、12、16、20 L，按上述的 HPLC 条件分析，以峰面积（A）对进样量(m) 进行线性回归，得回归方程分别为：人参皂苷 Rg1 线性方程为 A=483.241m-18.529，r=0.9996，线性范围为 0.9249.24 g；人参皂苷 Rb1 线性方程为A=205.681m+7.387，r=0.9999，线性范围为 0.7367.36 g；三七皂苷 R1 线性方程为 A=106.579m-11.492，r=0.9995，线性范围为 0.212.10 g。2.
10、6 精密度试验分别精密吸取人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R1 对照品溶液，于测定条件下进样 10 L，分别重复进样 5 次。以 3 种组分峰面积分别计算，结果人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R1 的 RSD 分别为 1.68%、1.08%、1.23%，结果表明仪器精密度良好。2.7 重现性试验精密称取丹心舒胶囊内容物(批号 050806)共 5 份，按“2.3”项制备供试品溶液，取供试品溶液 20 L，按“2.1”项色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品含量。结果样品中测得人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R1 平均含量分别为267、2.01、0
11、.608 mg/g，人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R1 的 RSD 分别为 1.77，2.13、1.28。测定结果表明，本方法重现性符合要求。2.8 稳定性试验精密称取丹心舒胶囊内容物(批号 050806)，分别按“2.3”项制备供试品溶液，分别在 0、2、4、8、10、24 h 进样，结果人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R15的 RSD 分别为 1.23%、1.45%、2.01%。表明供试品溶液在 24 h 内稳定。2.9 回收率试验精密称取已知含量的丹心舒胶囊样品 6 份(批号 050806)，分别精密加入人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 和三七皂苷 R
12、1 对照品适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液并在上述色谱条件下测定，计算回收率，结果见表 13。2.10 样品测定取 3 批丹心舒胶囊内容物，分别按“2.3”项下方法进行处理样品及测定，结果批号为 050806、050807、050808 的样品测得的三七总皂苷含量分别为 1.205 9、1.184 2、1.096 1 mg/粒。 表 1 人参皂苷 Rg1 加样回收率试验（略）Tab.1 Recovery test of ginsenoside Rg1表 2 人参皂苷 Rb1 加样回收率试验（略）Tab.2 The recovery test of ginsenoside Rb1表 3
13、三七皂苷 R1 加样回收率试验（略）Tab.3 Recovery test of notoginsenoside R13 丹参中有效成分丹参酮的含量测定3.1 色谱条件9色谱柱：Diamonsil C18 柱（5 m，250 mm4.6 mm）；流动相：甲醇 水(体积比7525) ；流速：1.0 mLmin-1；柱温：30 ；检测波长：270 nm。63.2 对照品溶液制备精密称取丹参酮A 对照品 5.00 mg，置 50 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取 2 mL，置 10 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每 1 mL含丹参酮A 20 g）。3.3 供试品溶液制备取
14、样品适量，研细，取 1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 50 mL，密塞，称定重量，加热回流提取 1 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.4 阴性溶液制备按处方比例依法配制除丹参以外的阴性样品，按“3.3“项方法制备丹参阴性溶液。结果显示阴性对照色谱中丹参酮A 峰附近无其他峰影响。结果见图 2。3.5 线性关系的考察精密吸取丹参酮A 对照品溶液 2、4、8、12、16、20 L，按上述的 HPLC 条件分析，以峰面积（A）对进样量(m) 进行线性回归，得丹参酮A 回归方程为A=350.614m3.956，r=0.9992，线性范围为 0.040.40
15、g。3.6 精密度试验精密吸取丹参酮A 对照品溶液，于测定条件下进样 10 L，分别重复进样 57次。以丹参酮A 峰面积计算，其 RSD 为 1.89%；结果表明仪器精密度良好。3.7 重现性试验精密称取丹心舒胶囊内容物(批号 050806)共 5 份，按“3.3”项方法制备供试品溶液，取供试品溶液 20 L，按“3.1”项色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品含量。结果样品中测得丹参中丹参酮A 平均含量为 0.153 mg/g， RSD 为1.54。测定结果表明，本方法重现性符合要求。A 丹参酮A 对照品 B 供试品溶液 C 阴性溶液图 2 丹参酮A 的 HPLC 图谱（略）Fig.2 HP
16、LC of TanshinoneA3.8 稳定性试验精密称取丹心舒胶囊内容物(批号 050806)，分别按“3.3”项制备供试品溶液，分别在 0、2、4、8、10、24 h 进样，结果丹参酮A 的 RSD 为 0.98%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。3.9 回收率试验精密称取已知含量的丹心舒胶囊样品 6 份(批号 050806)，分别精密加入丹参酮A 对照品适量，按“3.3”项下方法制备供试品溶液并在上述色谱条件下测定，计算回收率，结果见表 4。8310 样品测定取 3 批丹心舒胶囊内容物，分别按“3.3”项下方法进行处理样品及测定，结果批号为 050806、050807、050808 的样品测得的丹参酮A 含量分别为0.0349、0.0346、0.0317 mg/粒。表 4 丹参酮A 加样回收率试验（略）Tab.4 Recovery test of tanshinon
