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1、1HPLC 法测定阿莫西林舒巴坦酯片人体血 药浓度【摘要】 目的 建立阿莫西林舒巴坦酯片中阿莫西林和舒巴坦的血药浓度测定方法。方法 以色谱柱为 Spberiserb ODS(3.9mm200mm,5m)；流动相为乙腈-0.068mol/L KH2PO4(4.5：95.5)；流速为 0.8ml/min;检测浓度为 225nm;柱温为（250.1）方法测定人体内阿莫西林血药浓度。以色谱柱为 Hypersil C18(4.6mm200mm，5m)；流动相为乙腈-0.068mol/L KH2PO4(4.5：95.5);流速为 1.2ml/min;检测波长为 210nm;柱温为（250.1）方法测定人体
2、内舒巴坦血药浓度。结果 阿莫西林和舒巴坦在选定的色谱分离条件下，与血浆中杂质峰分离良好，分离度大于 1.5。阿莫西林血浆药物浓度在 0.12510g/ml 范围内线性良好，r=0.9998;舒巴坦血浆药物浓度在 0.1010g/ml 范围内线性良好，r=0.9999。阿莫西林和舒巴坦的平均回收率分别为 96.25%、102.3%。两种成分的日内、日间RSD10%。结论 HPLC 法测定方人体内阿莫西林和舒巴坦血药浓度方法准确度精度和灵敏度均较高，符合血浆中药物测定要求。【关键词】 阿莫西林舒巴坦酯片；高效液相色谱法；血药浓度 To detect human blood concentratio
3、n of amoxicillin and sulbactam with HPLC 【Abstract】 Objective To set up the detection method of human blood concentration of amoxicillin and sulbactam. Methods The chromatographic column was Spberiserb 2ODS(3.9mm200mm.5m ),and the mobile phase was acetonitrile- 0.068mol/L KH2PO4(4.5:95.5),the flow r
4、ate was 0.8ml/min,the detection wavelength was 225nm,and the column temperature was 250.1 .We detected the human blood concentration of amoxicillin,the chromatographic colum was Hypersil C18(4.6mm200mm 5m),the mobile phase was acetonitrile-0.068mol/L KH2po4(4.5:95.5),the flow rate was 1.2ml/min,the
5、detection wavelength was 210nm, and the column temperature was 250.1 .We detected the human blood concentration of sulbactam. Results We found that amoxicillin and sulbactam were under the condition of selected chromatographic separation, the resolution of amoxicillin and sulblactam and the impurity
6、 in the blood plasma was favorable.The resolution was 1.5,the human blood concentration of amoxicillin was 0.12510g/ml, and the linear regrossion was favorable,r=0.9998.The human blood concentration of sulbactam was 0.1010g/ml,and the linear regrossion was favorable,r=0.9999.The average recovery of
7、amoxicillin and sulbactam were 96.25%and 102.3%.The two kinds of components were RSD10%in a day or next.Conclusion The study shows that we can detect the human blood concentration of amoxicillin and sulbactam with HPLC,and the method has very good accuracy,precision and sensitivity.It is accord with
8、 demands of drug detection.【Key words】 amoxicillin and sulbactam;liquid chromatography;blood concentration阿莫西林舒巴坦酯是由阿莫西林和舒巴坦以共价键结合形成的化合物，阿莫西林为广谱的 -内酰胺类青霉素，舒巴坦是 -内酰胺酶抑制剂，无抑菌活性，能够抑制细菌产生的型型 -内酰胺酶，使阿莫西林免受酶的水解灭活，从而增加阿莫 西林对细菌的敏感性。该药口服后在胃肠上壁被非 特异酯酶分解为阿莫西林和舒巴坦，并吸收进入人体血液循环1。临床上主要用于治疗上、下呼吸道感染和皮肤、软组织感染及性病等2。本文
9、研究阿莫西林舒巴坦片口服后血浆中阿莫西林和舒巴坦药物浓度测定方法，为该制剂的人体药代动力学和生物学等效性研究及临床用药提供参考。31 材料与方法1.1 药品与试剂 阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，含量 86.2%、批号0409-9706）；舒巴坦对照品（中国药品生物制品检定所，含量 99.8%、批号 0430-9501）；阿莫西林舒巴坦酯片（珠海联邦制药有限公司中山分厂生产，每片含阿莫西林 250mg、舒巴坦 250mg，批号 030418）；乙腈为色谱纯；乙醚、磷酸二氢钾、盐酸高氯酸为分析纯；水为超纯水。1.2 仪器 waters 高效液相色谱分析系统（包括 717 自动进样器、51
10、0 低压梯度泵、996PDA 二极管检测器，2010 色谱管理系统），waters 高效液相色谱分析系统（包括 717 自动进样器、600 低压梯度泵、996PDA 二极管检测器，2010 色谱管理系统）；液体快速混合仪（北京长安仪器厂）；普通离心机（北京医用离心机厂）。1.3 色谱条件1.3.1 阿莫西林色谱条件 Spberserb ODS(3.9mm200mm,5m),C18 预柱；流动相：乙腈-0.068mol/L KH2PO4(4.5:95.5);流速：0.8ml/min;检测波长：225nm；柱温：（250.1）;灵敏度 1.0AUFS。1.3.2 舒巴坦色谱条件 Hyperisil
11、 C18 (4.6mm200mm,5m)，C18 预柱；流动相：4乙腈-0.068mol/L KH2PO4(4.5:95.5);流速：1.2ml/min;检测波长：210nm；柱温：（250.1）;灵敏度 0.5AUFS。1.4 受试对象与实验设计 健康男性自愿受试者 20 人，汉族，年龄 2325 岁，体重 6070kg,身高 168175cm。经心电、血压、血尿常规及肝肾功能检查均正常并无青霉素过敏史，签署知情同意书者入选，实验前 2 周禁服任何药物。实验前空腹 12h，于早 8：00 时用 250ml 温开水送服药物。服药后 4h 统一食低蛋白低脂肪午餐，观察病房准备危急情况的抢救措施。
12、受试者口服阿莫西林舒巴坦酯片 2 片（含阿莫西林和舒巴坦均为 500mg），于服药前（0h）与服药后10、20、30、45、60、90、120、180、240、420min 采静脉血 3ml，肝素抗凝，离心取血浆，置于-20冰箱中备用。1.5 血浆样品处理与测定1.5.1 阿莫西林血浆样品处理与测定 精密量取上述储备血浆样本 0.5ml，加入0.5mol/L 高氯酸溶液 0.5ml 沉淀蛋白，旋涡震荡 30s,9000r/min 离心 5min,取上清液 50l,按“1.3.1”项下色谱条件分离，记录色谱图。1.5.2 舒巴坦血浆样品处理与测定 精密量取上述储备血浆样本 0.5ml，加入0.5
13、mol/L HCl 溶液 0.5ml，旋涡震荡 30s,然后加入 3ml 乙醚提取 2 次，每次旋涡震荡 60s，3000r/min 离心 5min,吸取乙醚 2.5ml。合并两次提取液，40水浴蒸干乙5醚，残留物加 200l 流动相充分溶解，40l 进样，按“1.3.2”项下色谱条件分离，记录色谱图。1.6 血浆样本测定方法学考查1.6.1 专一性考查 （1）取阿莫西林对照品溶液进样，按“1.3.1”项下方法进行色谱分离，得阿莫西林对照品色谱峰。另分别取空白血浆、阿莫西林血浆样本和舒巴坦血浆样本，按“1.5.1”项下方法操作，按“1.3.1”项下色谱条件进行色谱分离，记录色谱图。 （2）取舒
14、巴坦对照品溶液，进样，按“1.3.2”项下方法进行色谱分离，得舒巴坦对照品色谱峰。另分别取空白血浆、舒巴坦血浆样本和阿莫西林血浆样本，按“1.5.2”项下方法操作，按“1.3.2”项下方法进行色谱分离，记录色谱图。1.6.2 标准曲线的制备 （1）阿莫西林标准曲线的制备，精密吸取空白血浆 0.5ml，准确加入阿莫西林对照品溶液配制阿莫西林血浆系列浓度（C）为0.125、0.25、1、4、10g/ml，按“1.5.1”项下方法操作，按“1.3.1”项下方法进行色谱分离，记录色谱峰，得峰面积为（A），以 A 对 C 回归，得回归方程。 （2）舒巴坦标准曲线的制备，精密吸取空白血浆 0.5ml，准确
15、加入舒巴坦对照品溶液配制舒巴坦血浆系列浓度（C）为 0.1、0.4、1、4、10g/ml，按“1.5.2”项下方法操作，按“1.3.2”项下方法进行色谱分离，记录色谱峰，得峰面积为（A），以 A 对 C 回归，得回归方程。1.6.3 回收率测定 取高、中、低 3 种浓度的阿莫西林血浆样本 5 份，按“1.5.1”项6下方法操作，按“1.3.1”项下色谱条件进行色谱分离，记录色谱图。得峰面积为（A），将 A 代入标准曲线方程，计算测得浓度（C），计算阿莫西林血浆样本回收率。另配制高、中、低 3 种浓度的舒巴坦血浆样本 5 份，按“1.5.2”项下方法操作，按“1.3.2”项下色谱条件进行色谱分离
16、，记录色谱图。得峰面积为（A），以上述同样方法计算舒巴坦血浆样本回收率。1.6.4 精密度测定 按“1.6.3”方法配制阿莫西林和舒巴坦高、中、低 3 种浓度的血浆样本，照前述方法分别处理阿莫西林和舒巴坦血浆样品及色谱分离，得色谱图峰（A）分别于 1 日内测定 5 次和 5 日内测定 5 次，计算日内和日间测得浓度（C），求出日内和日间 RSD。1.6.5 受试者血浆样品测定 （1）阿莫西林血浆样本测定，取“1.4”项下储备的血浆样本，按“1.5.1”和“1.3.1”项下方法操作，得色谱峰面积（A），代入阿莫西林标准线，得阿莫西林血浆样本浓度。 （2）舒巴坦血浆样本测定，取“1.4”项下储备的血浆样本，按“1.5.2”和“1.3.2”项下方法操作，得色谱峰面积（A），代入舒巴坦标准曲线，得舒巴坦血浆样本浓度。2 结果2.1 色谱行为72.1.1 阿莫西林的色谱图 见图 1。由图 1 可见血浆中阿莫西林的保留时间为5.58min,与血浆中
