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1、1不同产地翼首草中总皂苷的含量比较作者：杨荣平，向春艳，张小梅，秦伟瀚，励娜【摘要】 目的比较不同产地翼首草中总皂苷的含量。方法采用紫外分光光度法，以齐墩果酸为对照品，香草醛冰醋酸和硫酸溶液为显色剂，测定波长为 535 nm。结果在 25.3545.63 g 范围内，齐墩果酸的吸光度与含量线性关系良好,相关系数r=0.999 9。平均回收率为 91.94%，RSD 为 0.87%(n=9)。结论不同产地翼首草中总皂苷含量差异不大，但根中总皂苷的含量可能比全草中高。 【关键词】 翼首草; 总皂苷; 紫外分光光度法; 含量测定翼首草为川续断科植物匙叶翼首草 Pterocephalus hooker
2、i (C. B. Clarke) Hoeck的干燥全草，是藏医常用植物药，主产于西藏、青海、甘肃、四川等地。具有解毒除瘟，清热止痢，祛风通痹的功效。其主要成分为熊果酸(又名乌索酸，ursolic acid)、齐墩果酸(oleanolic acid)等三萜皂苷类化合物1，此外还含有生物碱、多糖等化学成分。本实验采用紫外分光光度法，详细考察了影响总皂苷提取的 6 个主要因素，确定了最佳制备方法，并对 13 批不同主产地和不同药用部位的翼首草中的总皂苷含量进行了比较。1 仪器与试药UV-1601 紫外-可见分光光度仪(日本岛津);BS 224S 电子天平(十万分之一，德国赛多利斯);AEG-45SM
3、 电子分析天平(日本岛津);HH-S 型水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)。熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110742-200516);2齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110709-200505)，其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每毫升含齐墩果酸 0.845 mg 的溶液，作为对照品溶液。2.2 供试品溶液制备方法的考察2.2.1 提取溶媒和水解方式的考察2取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇 30 ml，甲醇 30 ml，再加浓盐酸 3 ml，于 80水浴回
4、流 2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水 10 ml 超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取 4 次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至 10 ml 量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，得供试品溶液 A，B。取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇 30 ml，甲醇 30 ml，于 80回流 2 h，滤过，滤液蒸干，残渣分别加 HCl(310)10 ml 水解 2 h,按供试品溶液 A 制备，从“用醋酸乙酯”起依法操作，得供试品溶液 C，D。精密吸取供试品溶液 A、B、C、D 各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为
5、6.07%，5.38%，1.47%，1.69%。结果表明，提取溶媒为无水乙醇，加 3ml 浓盐酸，回流提取和水解同步进行时，所得总皂苷含量最高。2.2.2 无水乙醇用量的考察取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇 10，20，30，40 ml，浓盐酸 3 ml，于 80回流 2h，按“2.2.1”项下供试品3溶液 A 制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.69%，5.83%，6.06%，5.48%。结果表明，无水乙醇用量为 30 ml 时，所得总皂苷含量最高。2.2.3 提
6、取温度的考察取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g，精密称定，加无水乙醇 30 ml，浓盐酸 3 ml，分别于 80，90，100水浴回流 2h，按“2.2.1”项下供试品溶液 A 制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为6.07%，6.31%，6.20%。结果表明，提取温度为 90时，所得总皂苷含量最高。2.2.4 水解时间的考察取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g，精密称定，加无水乙醇 30 ml，浓盐酸 3 ml，于 90分别回流 1，2，3，4 h，按“2.2.1”项下供试品溶液 A制备，从
7、“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.84%，6.30%，6.59%，6.41%。结果表明，水解时间为 3h 时，所得总皂苷含量最高。2.2.5 萃取次数的考察取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g，精密称定，加无水乙醇 30 ml，浓盐酸 3 ml，于 90水浴回流 3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水 10 ml 超声溶解，分别用醋酸乙酯振摇提取 2，3，4，5 次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至 10ml 量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，即得。精密吸取上述供试品溶液
8、各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为 5.85%，6.26%，6.60%，6.63%。结果表明，振摇提取 4 次和 5 次所得总皂苷含量相差不大，因此选择振摇提取 4 次。42.2.6 药材粉碎度的考察 取翼首草粉末(分别过 2，3，4，5 号筛)约 0.1 g，精密称定，加无水乙醇 30 ml，浓盐酸 3 ml，于 90水浴回流 3h，按“2.2.1”项下供试品溶液 A 制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量为6.59%，6.37%，6.31%，6.30%。结果表明，药材粉碎过
9、 2 号筛所得总皂苷含量最高。总结供试品溶液制备方法：取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g，精密称定，加无水乙醇 30 ml，浓盐酸 3 ml，于 90水浴回流 3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水10 ml 超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取 4 次，每次 10 ml，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至 10 ml 量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，即得。2.3 标准曲线的制备精密吸取“2.1”项下齐墩果酸对照品溶液30，36，42，48，54 l 于具塞试管中，水浴蒸干，分别精密加入 5%香草醛冰醋酸溶液 0.6 ml，70%硫酸溶液 5 ml，摇匀，于 70水浴加热 40
10、min，取出，冰水浴冷却 1 h，室温放置 1 h，以相应试剂为空白，于 535nm 处测定吸光度。以齐墩果酸的含量(g)为横坐标(X)、齐墩果酸吸光度(A)为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算得直线回归方程为：Y=0.014 1X+0.042 0(r=0.999 9)。结果表明，齐墩果酸在 25.3545.63 g范围内，线性关系良好。 2.4 精密度考察 取同一对照品溶液，按“2.3”项下方法重复测定吸光度 6 次，计算得 RSD 为 0.097%。结果表明，仪器精密度良好。2.5 稳定性考察 精密吸取“2.1”项下齐墩果酸对照品溶液 30l， “2.2.6”项下过2 号筛供试品溶液 60
11、l 于具塞试管中，按“2.3”项下方法显色。计时测定，隔 30 min 测定一次吸光度值，共测定 3 h，计算得 RSD 分别为 0.92%和 0.75%。结果表5明,对照品溶液及供试品溶液在显色操作完成后 3 h 内稳定。2.6 重复性实验 取翼首草粉末(过 2 号筛)约 0.1 g(6 份)，精密称定，按拟定的供试品溶液制备方法操作，精密吸取所得供试品溶液各 60 l，再按“2.3”项下方法测定吸光度，计算得平均含量为 6.58%，RSD 为 1.21%。结果表明，此方法重复性良好。2.7 加样回收实验精密称取已知总皂苷含量(6.58%)的样品 9 份，分别按样品中总皂苷含量的 80%，1
12、00%和 120%精密加入对照品，每个梯度 3 份。按拟定的供试品溶液制备方法和“2.3”项下测定方法操作，计算回收率。结果见表 1。表 1 回收率考察(s)样品号药材称样量 m/mg 样品中总皂苷含量 m/mg 加入齐墩果酸量m/mg 测得量 m/mg 回收率(%)平均回收率%由上表可见，由于样品前处理较复杂，回收率在 90%94%之间，符合药典规定。2.8 样品含量测定取不同产地及不同药用部位的翼首草 13 批药材粉末(过 2号筛)各 0.1 g，精密称定，按拟定的供试品溶液制备方法操作，精密吸取各批供试品溶液 5060 l，再按“2.3”项下方法测定各批次总皂苷含量。结果见表 2。表 2
13、 样品含量测定产地药用部位批次数平均含量(%) 四川带根全草 66.04 甘肃带根全草 35.66 青海带根全草 15.53 西藏根 38.13从表 2 可以看出，不同产地的带根全草翼首草总皂苷的含量差异不大，但四川产的翼首草总皂苷的含量略高。而西藏所采的 3 批翼首草根总皂苷的含量却又明显高于其他产地的带根全草。63 讨论从线性、精密度、稳定性、重复性及加样回收率等实验结果可以看出，用紫外分光光度法测定翼首草中总皂苷的含量准确、稳定、灵敏。本法可作为药材含量测定标准之一。显色时，所用显色试剂均须临用新配，否则反应不完全，测得的含量降低;测定前应避免暴露于强光之下和剧烈晃动，因为不利于硫酸稳定
14、，影响吸光值的准确性。本实验首次详细考察了影响翼首草总皂苷提取的 6 个主要因素，分别是提取溶媒和水解方式、溶媒用量、提取温度、水解时间、萃取次数、药材粉碎度。确定了最佳制备方法，其中提取溶媒和水解方式对总皂苷提取的影响最大。从 13 批不同产地和不同部位总皂苷的含量分析，以西藏所采的 3 批翼首草根的总皂苷含量明显高于其他产地翼首草带根全草的含量，提示根中总皂苷的含量有可能高于全草，还需要对同一产地，同一批次不同部位总皂苷的含量进行比较来进一步的证实。【参考文献】1 田 军，吴凤锷，丘明华，等.匙叶翼首花的化学成分J.天然药物研究与开发，2000，12(1)：35.2 何正友，张 艺，张 旭.分光光度法测定藏药翼首草中总皂苷的含量J.华西药学杂志，2002，17(1)：43
