《提取质粒--碱裂解法打印版》由会员分享，可在线阅读，更多相关《提取质粒--碱裂解法打印版（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、碱裂解法碱裂解液 1 组分浓度：25mM Tris-HCl(pH8.0),10mM EDTA,50mM glucose 配制量：1L 配制方法：1、量取下列溶液，置于 1L 烧杯中1M Tris-HCl(pH8.0) 25ml0.5M EDTA(pH8.0) 20ml20% glucose(1.11M) 45mlaH2O 910ml2、高温高压灭菌后，4保存3、使用前每 50ml 的碱裂解液 1 中加入 2mlRNase A(20 ug/ml)1M Tris-HCl(pH8.0)配制量：1L 配制方法：1、称量 121.1g Tris 置于 1L 烧杯中2、加入约 800ml 的去离子水，充分
2、搅拌溶解3、加入浓盐酸调节所需 pH 值pH 8.0 约 42ml4、定容至 1L5、灭菌，室温保存 注意：应使溶液冷却了再调 pH 值0.5M EDTA(pH8.0)配制量：1L 配制方法：1、称取 186.1gNa2EDTA.2H2O 于 1L 烧杯中2、加入约 800ml 的去离子水，充分搅拌3、用 NaOH 调节 pH 至 8.0（约 20gNaOH）注意：pH 至碱裂解液 2组分浓度：200 mMNaOH,1%(w/v)SDS配制量：500 ml配制方法：1、量取下列溶液，置于 500ml 烧杯中 50ml10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2、加灭菌水定容至 500ml
3、，充分混匀3、室温保存，此溶液保存时间最好不要超过 1 个月注意：SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌碱裂解液 3组分浓度：3M KOAc,5M CH3COOH配制量：500ml配制方法：1、称量下列试剂，置于 500ml 烧杯中KOAc 147gCH3COOH 57.5 ml2、加入 300ml 去离子水后搅拌溶解3、加去离子水将溶液定容至 500ml4、高温高压灭菌后，4保存1M Tris-HCl(pH 8.0)配制量：1L配制方法：1、称量 121.1gTris 置于 1L 烧杯中2、加入约 800ml 的去离子水，充分搅拌溶解3、加入浓盐酸调节所需的 pH 值 Ph 8.0 约 42ml4
4、、定容至 1L5、灭菌，室温保存应使溶液冷却了再调 PH 值0.5M EDTA(PH 8.0)配制量：1L配制方法：1、称取 186.1gNa2EDTA.2H2O 于 1L 烧杯中2、加入约 800ml 的去离子水，充分搅拌3、用 NaOH 调节 pH 至 8.0（约 20g NaOH）PH 至 8.0 时，EDTA 才能完全溶解4、加入去离子水，定容至 1L5、适量分成小份，高温灭菌6、室温保存20%（w/v）glucose配制量：100ml方法：1、称取 20g glucose 置于 100200ml 烧杯中，加入约 80ml 去离子水，搅拌溶解2、加去离子水定容至 100ml3、灭菌，4
5、保存2N NaOH配量：100ml方法：1、量取 80ml 去离子水于 100-200ml 塑料烧杯中2、称取 8gNaOH 小心加入烧杯中，边加边搅拌3、待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液定至 100ml4、室温保存10% SDS（PH7.2）配制 100ml方法：1、称取 10gSDS 于 100-200ml 烧杯中，加入约 80ml 去离子水，68加热溶解2、滴加浓 HCl 调至 7.23、定容 100ml，室温保存提取质粒注意事项：1、 将菌种接种到 LB 培养基上（3ml） ，含适当培养基2、 在离心管中加入 1.5ml 培养液，离心 2min(12000 改为 15000r
6、pm)3、 倒去上清，重复 2 次，用枪吸去上清4、 将菌沉淀重悬于 100ul 冰预冷的溶液，再涡旋搅拌剧烈振荡，室温放置 5min5、 加入 200ul 溶液，盖紧管口快速颠倒（勿振荡）ep 管 5 次，充分混合后，充分混合内容物后，放在冰上 4min6、 加入 150ul 冰预冷溶液，盖紧管口，倒置振荡 10s，将溶液分散均匀后，置于冰上3-5min，离心 5min，12000rpm，取上清7、 加入等量酚：氯仿：异戊醇 25:24:1,12000rpm 离心 2min，取上清8、 加入 2 倍体积冰无水乙醇，1/10NaOAc，冰箱放置 30min（-20 2 小时以上，-80 20-30min）以沉淀 DNA9、 4,12000rpm，5min 离心（改为 15000,8min）10、小心吸取上清，将离心管倒放在纸巾上，以使所有液体流出，并将附于管壁上的液滴除尽11、用 1ml70%乙醇在 4离心 5min(12000rpm)，去上清12、干燥 30min(空气中)，加入 20ug（2ul）10mg/mlRNA 酶和 50ulTE，37反应 1-3h，-20保存
