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1、抗核小体抗体测定在系统性红斑狼疮 诊断中的意义苏茵 ? 韩蕾? 栗占国 ? 陈书萍 ? 贾汝琳? ? ?摘? 要? ? 目的? 评价抗核小体抗体(AnuA) 对系统性红斑狼疮( SLE) 诊断的敏感性和特异性,并了解其与 SLE 活动性的关系及与其他自身抗体的关系。方法? 用酶联免疫吸附( ELISA)测定方法检测 SLE 患者、 疾病对照组( 包括原发性干燥综合征、 多发性肌炎、 皮肌炎、 系统性硬化症) 和正常对照组血清中的 AnuA, 并记录 SLE 患者的各种临床表现及实验室指标, 分析其与 AnuA 的关系。结果? 103 例 SLE 患者中 69?9% 血清 AnuA 阳性, 66
2、 例疾病对照组仅 3?0% 阳性, 30 名正常对照组全部阴性; SLE 组患者 AnuA 阳性率显著高于疾病对照组和正常对照组( P 0?05)。AnuA 滴度的高低与SLE 患者的 SLEDAI 评分有明显相关性( r= 0?282, P 0?05) . T he incidences of AnuA in SLE with negative ant- i dsDNA, Sm, ant- i deoxyribonucleoprotein antibody ( DNP) and ant- i histone antibody (AHA) were 65?6% , 68?0% , 63?9%
3、and 64?1% , respectively. Conclusion ? AnuA is one of the most valuable marker in diagnosis of SLE; AnuA has a close relationship with the activity of SLE; AnuA is valu - able in diagnosis of SLE with negative ant- i dsDNA, Sm, DNP and AHA antibodies. ?Key words? ? Nucleosomes; Lupus erythematosus,
4、systemic; Enzyme -linked immunosorbent assay? ? 系统性红斑狼疮( systemic lupus erythematosus,SLE) 是一种全身性自身免疫病, 除 T 细胞参与外, 本病的病理过程中伴有明显的 B 淋巴细胞的活化。作者单位: 100044 北京大学人民医院风湿免疫科( 苏茵、 韩蕾、栗占国、 贾汝琳) ; 山西省阳城县人民医院内科( 陈书萍)患者血清中可出现多种自身抗体, 并因此导致组织和器官的损伤。目前已知的特异性自身抗体如抗Sm 抗体、 抗 dsDNA 抗体等对 SLE 的诊断有重要意义。但是, 这些抗体的敏感性均较低。临床上
5、亟需 一种对 SLE 诊断的特异性和敏感性均较好的血清学标记抗体, 从而有利于 SLE 患者的诊断。核小体?474?中华风湿病学杂志 2003 年 8 月第 7 卷第 8 期? Chin J Rheumatol, August 2003, Vol 7, No. 8( nucleosome) 是细胞凋亡过程中染色质核内裂解所释放的染色质成分, 它是由两个 DNA 分子以特殊的方式环绕以组蛋白 H2A、 H2B、 H3 和 H4 组成的四聚体的核心而构成。抗核小体抗体( ant- i nucleo - some antibody, AnuA) 主要是由 B 细胞产生的抗核小体分子的自身抗体 1。本
6、文应用酶联免疫吸附( enzyme -linked immunosorbent assay, ELISA) 测定 方法检测 SLE 患者、 疾病对照组及正常人血清中的AnuA 水平, 探讨该抗体在 SLE 诊断中的敏感性和特异性, 同时探讨其与疾病活动期及其他自身抗体的关系。 ? ? ? 1? 资料与方法1?1? 研究对象选取自 2000 年 3 月至 2002 年 12 月在我科住 院的 SLE 患者 103 例, 其中女性 95 例, 男性 8 例;年龄 17 68 岁, 平均( 35 ? 13) 岁; 病程 1 个月 28年, 平均病程 2 年, 诊断均符合 1997 年美国风湿病学会修
7、订的 SLE 分类诊断标准2。疾病对照组为 其他风湿性疾病, 共 66例, 男性 9 例, 女性 57 例, 年龄19 76 岁, 平均( 51 ? 14) 岁, 病程 2 个月 30年, 平均病程 4 年; 包括原发性干燥综合征( pSS) 22 例, 多发性肌炎( PM) 12 例, 皮肌炎( DM) 8 例, 系统性硬化症( SSc) 8 例, 未分化结缔组织病( UCT D)6例, 类风湿关节炎( RA) 10 例, 诊断均符合各自的国际诊断标准。正常对照组 30 名选自我院的健康 查体者, 男性 14 名, 女性 16 名, 年龄 18 52 岁, 平均( 26? 6) 岁。1?2?
8、 实验方法1?2?1? AnuA 检测: 由德国 Imtec 公司提供的AnuA 检测试剂盒, 应用 ELISA 方法检测患者及正常对照者血清中的 AnuA。方法及步骤如下: 已包被核小体的微孔板中加入 1?100稀释的血清 100 ? l 室温孵 育 1 h, 冲洗 3 次后, 加入 100 ?l 抗人 IgG 室温孵育30 min, 再冲洗 3 次后加入 100 ? l 底物显色剂, 室温、 避光孵育 5 10 min, 每孔加入 100 ? l 终止液,在 30 min 内用 505 型酶标仪以 450 nm 测 A 值。 1?2?2? 其他抗体检测: 金标法检测抗双链 DNA(dsDN
9、A) 抗体; 乳胶凝 集法检测 快速狼疮因 子(DNP) ; ELISA 方法检测抗组蛋白抗体( AHA) ; Western -blot 方法检测抗 Smith 抗体( Sm) 。1?2?3? 疾病活动性评分: 记录 SLE 患者的临床表现, 包括发热、 皮疹、 口腔溃疡、 光过敏、 脱发、 关节疼痛、 神经系统损害, 心、 肺、 肝等内脏器官受累情况,同时检测患者的血、 尿、 便常规, 血沉( ESR) , C 反应蛋白( CRP) ; 血清补体( C3、 C4) 、 免疫球蛋白( IgA、IgM、 IgG) 、 免疫复合物( CIC) 。采用 SLEDAI( sys -temic lup
10、us erythematosus disease activity index ) 记分 3对 SLE 的疾病活动性做总体评估。1?3? 统计学处理采用 SPSS 11?0 统计软件包做统计学分析, 所有计量资料采用 ? x ? s 或中位数表示, 组间比较采 用 t 检验, 计数资料采用 ?2检验, 相关性分析采用Spearman 相关数据分析软件进行。 2? 结? ? 果2?1? AnuA 在 SLE 的敏感性和特异性103例 SLE 患者中有 72 例AnuA 阳性, 阳性率为 69?9% 。在 66 例其他风湿性疾病组仅 2 例阳性, 阳性率为 3?0%, 其中 1 例为 PM 继发干
11、燥综合征, 另 1 例为 RA 继发干燥综合征。30 名正常对照组中AnuA 均阴性。AnuA 阳性率在 SLE 组与疾病对照组、 正常对照组比较差异均具有显著性( ?2值分别为 73?082、 45?723; P 0?05) ( 见表2) 。?475?中华风湿病学杂志 2003 年 8 月第 7 卷第 8 期? Chin J Rheumatol, August 2003, Vol 7, No. 8表 2? AnuA 与其他自身抗体的敏感性和特异性比较自身抗体阳性例数敏感性( % )特异性( % )AnuA7269?9*97?9* *dsDNA4240?8?96?9? ?Sm2827?2?10
12、0?0? ?DNP3130?1?81?6? ?AHA3735?9?64?9? ? ? 注:*AnuA 的敏感性均明显高于其他抗体 P 0?052?2?2? AnuA 在其他抗体阴性的 SLE 患者诊断中的意义: 在抗 dsDNA、 DNP、 Sm、 AHA 抗体阴性的 SLE 患者中 64% 68% 出现AnuA( 见表 3) 。AnuA在 SLE 的诊断中有重要意义。表 3? AnuA 在其他抗体阴性的 SLE 患者中的阳性率抗体例数AnuA 阳性例数%dsDNA 阴性614066DNP 阴性724664Sm 阴性755168AHA 阴性6441642?3? AnuA 与各种临床及实验室指标
13、的比较 2?3?1? AnuA 与年龄、 性别及病程的关系: AnuA 阳性的 SLE 患者 72 例与 AnuA 阴性的 SLE 患者 31例在年龄、 性别、 病程上比较, 差异无显著性( P 0?05) 。2?3?2? AnuA 与临床表现的关系: 72 例 AnuA 阳性 SLE 患者的皮肤损害及脱发的发生率明显高于 31例AnuA 阴性的 SLE 患者, 统计学上差异有显著性 ( ?2值分别为 7?692、 5?189; P 0?05) ( 见表 4) 。 2?3?3? AnuA 与实验室指标的关系: AnuA 阳性组患者的 ESR ( 44 ? 28) mm/ 1 h、 CRP (
14、12 ? 16) mg/ L 明 显 高 于 AnuA 阴 性 组 患 者, 分 别 为( 23? 20) mm/ 1h、 ( 4 ? 3) mg/ L, 差异有显著性( P0?05)( 见表 5) 。表 4? AnuA 与临床表现的关系临床指标AnuA 阳性组( 72 例)例数%AnuA 阴性组( 31 例)例数%发热? ?4258?1548皮疹? ?5171*1032脱发? ?3650*723光过敏?1014?723口腔溃疡2231?1135关节痛?5374?2065浆膜炎?811?619? ? 注:*两组比较 P 0?05表 5? AnuA 与实验室指标的关系实验指标AnuA 阳性组(
15、72 例)例数%AnuA 阴性组( 31 例)例数%WBC?3042?1239PLT ?1926?929ESR?5881*1961CRP ?2636*413C3?6894*1961C4?6185*1652IgG?2433?723IgA?1622?310IgM ?46?00CIC?4157?1858尿蛋白?4461*929? ? 注:*两组比较 P 0?052?4? AnuA 与 SLE 疾病活动性关系 应用 Spearman 相关分析软件分析结果显示:AnuA 的滴度与 SLE 患者的 SLEDAI 记分的高低呈 明显的正相关( r = 0?282, P= 0?037) 。3? 讨? ? 论核
16、小体是真核生物细胞染色的基本单位, 当细 胞受到致病因素作用时, 细胞发生线粒体肿胀, 细胞膜破裂并导致核小体的释放。已有资料表明核小体 是 SLE 的发病过程中一种主要的自身抗原, 它可以刺激 T 细胞的增生活化, 从而激活 B 细胞, 产生抗体( 即抗核小体抗体、 抗 dsDNA 抗体) , 并形成抗原 抗体复合物参与 SLE 的发病4。本研究结果表明, AnuA 在 SLE 的诊断中具有 重要意义, 它的敏感性高于目前已知的自身抗体, 而特异性与其他抗体类似。在其他风湿性疾病组仅有 2 例患者出现抗核小体抗体阳性, 分别为 RA 和 PM的患者, 进一步分析发现这 2 例患者的血清抗核抗体均为阳性, 且滴度较高, 分别为 1: 160 和 1: 320,?476?中华风湿病学杂志 2003 年 8 月第 7 卷第 8 期? Chin J Rheumatol, August 2003, Vol 7, No. 8其中 1 例患者的抗 SSA 抗体阳性, 2 例患者眼科和口腔科检查均支持 sSS 的诊断。目前尚不符合 SLE的诊断, 我们正在
