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1、制备自家苗预防仔猪大肠杆菌病制备自家苗预防仔猪大肠杆菌病仔猪黄白痢是养猪场“ 广泛存在的常见病，不仅给养猪业带来大量药物开支，也直接影响了仔猪的生长发育。引起仔猪黄白痢的大肠杆菌菌群多、抗原结构复杂(O 抗原、H 抗原、K 抗原)，且流行菌群有地方差异，因此控制难度较大。l 材料 11 病料广西武鸣县两家发生仔猪黄、白痢的病猪肠内容物及肠粘膜刮取物 4 份。 12 培养基麦康凯、马丁肉汤、三糖铁、普通琼脂、厌氧肉肝汤、血液琼脂斜面。 13 试验动物及其它体重 1822 g 左右的小白鼠 18只；甲醛溶液、氢氧化铝溶液。2 方法与结果 21 分离与鉴定 211 分离与形态鉴定：将上述 4 份病料
2、分别用灭菌生理盐水稀释后接种麦康凯平板培养基，经 37“C 恒温培养箱培养 1618 h，挑取可疑红色菌落进行革兰氏染色。经镜检见有多量中等大小的红色杆菌即可初步认定为大肠杆菌。 212 毒力鉴定：为了确定所分离细菌的毒力，取上述新鲜马丁肉汤纯培养物接种血液琼脂斜面培养基后置 37“C 恒温箱培养，同时用适量灭菌生理盐水稀释后接种小白鼠(每份病料接种 2 只)，05 ml只。结果发现血液琼脂斜面培养物中有溶血现象；观察小白鼠接种后的状态，发现接种 3 h 后即有 2 只小白鼠死亡，24 h 后共死亡 6 只；另 2 只仅表现出一定的抑郁状态后逐渐恢复正常。 213 生化鉴定：将死亡小白鼠解剖后
3、无菌采取其心血，经镜检后分别接种于马丁肉汤和三糖铁培养基置温箱培养，可见马丁肉汤液变混；三糖铁培养基完全变黄，同时沿穿刺线周围形成许多气泡，表明被检菌能够分解糖类产酸产气。经镜检和稀释后再次接种麦康凯平板培养基培养证实，马丁肉汤和血斜培养物均未污染其它杂菌，将两种培养物均置 4“C 冰箱内保存。 22 制苗与检验 221 制苗与纯检：取上述保存的培养物接种新鲜血斜培养基复壮，用无菌生理盐水或马丁肉汤洗下菌层检验培养物纯度。经检验合格后即可转人 5O ml 大试管马丁肉汤中培养。将培养 12 h以上的马丁肉汤培养物经纯检后分别接种于多个直径 18 em 的普通琼脂平板中均匀散开(每个约 05 m
4、1)，同时另取部分肉汤培养物经稀释后接种于普通琼脂平板进行活菌计数。当培养物覆满整个平板后逐个检查上面是否存在杂菌污染现象。剔除被污染的平板，并将其余平板全部转人低温空调房间，使琼脂受冷变硬后便于刮取菌苔。 222 配苗与分装：在无菌条件下于每个平板中加人约 1O ml 马丁肉汤浸泡，用灭菌止血钳挟住经 75酒精浸泡消毒的载玻片(用时再经酒精灯灼烧)至平板内刮取菌液。每个平板约共用 5O ml 马丁肉汤冲洗 3 次即可。将洗下的菌液全部注人 500 ml 的灭菌盐水瓶中，取菌液接种血液斜面、马丁肉汤和厌氧肉肝汤中培养未发现异常杂菌，另取少量菌液于灭菌青霉素瓶中以备活菌计数，其余按菌液总量 05
5、的比例加人甲醛溶液(37 4O)，置 37 温箱中灭活 48 h (期间充分摇匀 46 次)。根据活菌计数结果，将收集的灭活菌液以 1O 的比例加人无菌氢氧化铝浓缩，使所制备的菌苗中大肠杆菌数目在 100 亿以上；同时取样置普通琼脂和马丁肉汤中进行灭活检验。经检验合格的疫苗用 100 ml 疫苗瓶分装后贴上标签，置于室温下保存备用。 223 安全与效力检验：将试制的菌苗接种 5 只小白鼠未见不良反应(05 ml只)，安全率 100 。15 d 后用所分离的强毒活菌液攻毒，对照组5 只全部于 36 h 内死亡；试验鼠 5 只，死亡 1 只，保护率达 8O 。 224 免疫接种：将所制备的菌苗托运
6、至两家原发病猪场，建议先对部分临产前1O20 d 的母猪进行试用(1 ml头)。从场方随后反馈的信息得知，2 头试验母猪注苗后未见精神和食欲异常，分娩所产仔猪在本病发病阶段未发生明显的腹泻现象，表明本次制备的大肠杆菌自家苗能较好地控制原发病猪场仔猪大肠杆菌的发生，成效明显优予过去所使用的商品型疫苗，达到了如期效果。3 讨论 仔猪黄白痢是由致病性大肠杆菌引起的较常见肠道感染疾病。由于引起黄白痢的大肠杆菌血清型较多，每个猪场的血清型均不一致，在防治上应用商品苗或抗生素较难取得理想效果(进口疫苗效果较好，但费用较高)。因此根据发病的实际情况，选用与本场血清型相一致的疫苗或制备自家苗对产前母猪实施免疫是预防仔猪大肠杆菌病的有力措施。虽然仔猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌感染所致，但本病的发生也与仔猪的抵抗力、环境条件及饲养管理措施密切相关。因此，除采用合适的疫苗及时进行免疫接种外，还应注意加强日常的卫生与饲养管理工作，减少环境诱因和应激反应；注意母猪临产时的猪体清冼和消毒及空产床的消毒工作；做好母猪产前补硒和仔猪产后补铁与补硒工作；确保保育舍内一定的保温和干燥效果；对已发病的猪应及时做好隔离消毒，及选用敏感的药物进行治疗等，达到综合防治的目的。
