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1、固相萃取反相高效液相色谱法 测定猪肉中种氟喹诺酮类药物的残留量林玲杨春亮王明月刘丽丽（ 中国热带农业科学院农产品加工研究所 ，湛江 ）摘 要 ：建立了一种同时测定猪肉中 种氟喹诺酮类药物残留量的固相萃取 反相高效液相色谱法。 样品经 磷酸缓冲液提取两次 ，离心合并上清液 。用 固相萃取柱净化 ，流动相洗脱定容 ，高效液相色谱荧光检 测器测定， 外标法定量。结果表 明 ，环 丙 沙 星 、恩 诺 沙 星 、沙 拉 沙 星 、达氟沙星的最低检出限分别为 、 、 、 ，方法相对标准偏差为 。平均回收率为 。关键词 ：高 效液相色谱 ；固 相萃取 猪肉 ；环 丙沙星 ；达 氟沙星 ；恩 诺沙星 ；沙
2、拉沙星 ： ， ， ， （ ， ， ， ） ： ， ， ， ， ， ， ： ； ； ； ； ； ； 氟喹诺酮类 药 物 （ ） 是最 近 多 年 来 迅 速 发展起来的 继 磺 胺 类 药 物 之 后 人类在合成抗菌药 方面最重要的发现。 此类药物具有抗菌谱广、 抗 菌 作用强、 毒副作用 小等 特点， 已 被广泛用于医疗、 畜禽和水产养殖业中。 随着人们生活水平的提高， 食品安全 问 题 越 来 越 受 到 关 注。 尤其是动物性食 品， 兽药残留是 一个不能回避的问题。 由于氟喹诺 酮类药物在动物体内的残留消除缓慢 ， 过量的药物 残留会危 害 人 体 健 康。 所以 该类药物的兽药残留
3、问题比较严重， 做好此类药物的检 测势在必行。 目 前， 对氟喹 诺 酮 类 药 物 残 留 检 测 方 法 的 报 道 较 多， 有毛细管电泳法、 酶 联免疫法、 薄 层色谱法、 气 相色谱质谱 法、 液 相 色 谱质 谱 法、 液 相 色 谱 荧 光 法 和液相色谱紫外法 等。 毛细 管 电 泳 法、 酶 联 免 疫法和 薄 层 色 谱 法 操 作 步 骤 比 较 繁 琐 、 准 确 度 不 高； 气相色谱质 谱法和液相色谱质 谱 法 对 于 该 药物的痕量残留具有准确的定性作用 ， 但是因为仪 器价格昂贵及在实际应用中难于普及 ， 所以很少用 它们来检 测 此 类 药 物。 目 前 应
4、用 最 广 泛 的 方 法 是 高效液相色谱法。 因其具有操作简易、 检 测准确性 好等特点。 关 于 用 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 该 类 药 物 残留量的报 道 主 要 在 鸡 肉 、 鸡蛋、 鱼 虾 等 畜 禽 产 品 中 。而关于 猪 肉 中 氟 喹 诺 酮 类 药 物 的 测 定 方 法尚未见报道， 测 定样品不同前处理和色谱条件也作者简介：林玲 ， 女， 硕士 ， 助理研究员 ， ： 。通讯作者 ： 杨春亮 ， 男， 研究员 ， ： 。 分 析 仪 器 年第期会有所不同， 本文 通过实验， 建 立起一种操作简易、 灵敏度高、 重现性好 的可同时测定猪肉中 种氟喹 诺酮类药
5、 物 残 留 量 的 固 相 萃 取反相高效液相色 谱法。 实验部分 仪器设备与色谱条件 仪器设备 型高效液相色谱仪（ 配有 型 荧光检测 器、 自 动 进 样 器、 四 元 泵、 真 空 在 线 脱 气 机、 工作站） 、 组织匀 浆机、 旋 涡混合器、 离 心机、 固相萃取装置。 色谱条件色谱 柱： （ ，） 。 流动相： 乙腈 磷 酸三 乙胺溶液 （ 体积 比 ： ） ， 用 前经 滤膜过滤。 柱温： 。 流 速： 。 进 样 量 ， 激 发 波 长 为 ， 发射波长 。 试剂与溶液 试剂乙腈（ 色 谱 纯 ） 、 甲 醇、 三 乙 胺、 磷 酸 二 氢 钾、 氢 氧化钠、 磷酸。 溶液
6、的配制 磷 酸三 乙 胺 溶 液 的 配 制： 取 浓 磷 酸 ， 用水稀释至 ， 用 三乙胺调节 至 。 溶 液： 取 饱 和 溶 液 ， 加水稀释至 。 溶 液： 取 溶液 ， 加水稀释至 。磷酸盐缓冲 溶 液： 取 磷 酸 二 氢 钾 ， 加水 溶 解并稀释至 ， 用 溶液调节 至 。标准储备液： 精 密称取环丙沙星、 恩 诺沙星、 沙 拉 沙 星 各 ，达 氟 沙 星 ，用 溶液溶解并稀释成浓度为 （ 环丙沙 星、 恩诺沙星、 沙拉沙星） 和 （ 达 氟沙星） 的标准储 备 液。 置 于 冰 箱 中 存 放， 有 效 期 两 个月。标准混合 工 作 液： 准 确 量 取 适 量 标 准
7、 储 备 液， 用流动相 稀 释 成 适 当 浓 度 的 标 准 混 合 工 作 液。 置 于 冰箱中存放， 有效期两周。 实验方法 样品处理 将样品切成小块打浆 ， 称取 样品于 离心管中， 加入 磷酸盐缓冲溶液， 在旋涡混合 器上振荡 混 合 ， 再 用 超 声 波 超 声 ， 离 心 ， 取上清 液， 离 心 管 中 残 渣 再 提 取 一 次 ， 合并 上清液再离心 。取上清液作为试样。 样品净化将 固相萃取柱依次用 甲醇、 磷酸盐 缓冲溶液进行活化， 取上清液 过柱， 用 水 淋洗， 挤干。用 流动相进行洗脱， 收集洗脱液， 经 微孔滤膜过滤后供 测定。 结果与讨论 样品前处理溶剂的
8、选择氟喹诺酮类药物在分子结构上比较相似 ， 都含 有羧基酸性基团和哌嗪基碱性基团 ， 属于酸碱两性 化合物。由于氟喹诺酮类药物是水溶性药物 ， 所以 本实验选择 乙 腈、 甲 醇、 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液 作 提 取 液 进行比较实验， 结果发现， 甲醇和乙腈提取 药物 时， 样品的 溶 解 度 较 大， 上 清 液 很 清 亮， 杂 质 较 少， 但是这两种溶剂的毒性较大 ， 价格也比较昂贵 。 而 用磷酸盐缓冲溶液提取 药物， 离 心速度大点和 时间长些效 果 会 比 较 好 ， 上清 液 也 比 较 清 澈， 回 收 率高。故本法选用磷酸盐缓冲溶液作为提取液。 样品净化条件的选择样品提取 完 之 后 ， 由于 猪 肉 里 的 基 质 较 复 杂，需要进一步的净化处理 ， 把干扰目标物的其它杂质 除去， 从而有效 地提高样品的准确度和回收率。 净 化的关键是根据样品与固相萃取 小 柱 之 间 相 似 相 溶的原理选 择 适 当 的 小 柱 ， 而且 通 过 做 实 验 发 现， 柱子的规格和牌子也很重要 ， 不同牌子的柱子过柱 的效果是不一样的 ， 有些能很好的把样品中的杂质 去除， 有些却把 目标物和杂质同时带走。 同一
