《抗性激素抑制异位内膜间质细胞体外增殖诱导凋亡和治疗子宫腺肌病的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗性激素抑制异位内膜间质细胞体外增殖诱导凋亡和治疗子宫腺肌病的研究（122页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：扭日期：弘塑- 兰：2 - 0关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权I l J 东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段
2、保存论文和汇编本学位论文。( 保密论文在解密后应遵守此规定) 敝作者签毒盟至! 狮签名丝j期：卯；、妒印i j j 畚大学博士学位论文抗性激素抑制舁位内膜间质细胞体外增殖诱导满亡翔治疗子窖艨觏瘸豹磷交博士研究生：李嗡江薅士生嚣爨：李继羧黢袋子窝斑骥雾霞痰是捃秘常恩痰瀛，其蓑瘸搴逐年秀离荨| 入注嚣。予察内壤雾篷藏翡羹秣彝辫艨疆究爨虹稀嚣戋疆隧学镶域静瀵点漾趱。麸2 0 壤纪确年代开始，谗多学者威用宓验性子寓内膜异位瘸动物模型和体外培养的异能子宫内膜腺体和间质细鼹秀痰菠摸漤递嚣蒸戆磅究，磬载褥巨大懿滋矮。瓣 疑瑟8 0 年我，疆藿生楚蠹分泌学窝努予蕊溪学疑避鼹，藐蕊激豢憩据撬鹾激素三苯辍胺和抗孕
3、激素米非司酮弹始试用予予窝内麟异位癍，菇取得悫的效果，但其详缫豹黪溪壤涮豢不十分臻了。溺建，遴一渗磁瓷捷犍激素潼疗予鑫肉貘异整症旋作用机制，肖助于阐明子宫内膜异位症的病阑幂日发瘸机制，弗为抗孕激絷治疗妇科性激素谈赖髓痰病霾瓣瘗援供安验依瓣。该矮系戮辑究，以薄舞培葵靛羚位子富蠹袋淹壤绻戆耧抗往激素浚疗瓣子富藤瓢病组织标本为子宫内膜异位癌绷胞和组织模型，观察抗性激索米非司酮和_ 三三苯氧胺对异搜麓臻缨溅落舞增疆、绥熬穰亡涎洼秘绥藏鞭子袋遗影确，蔽一个键瑟麓嗳予富巍蒺舅艇痰熬发生穗割，惫拣馁激素赡罄藤瘦鼷提爨实验滚撼。谈项研究为山东省自然科学研究基金资助顼瓣( Y 2 0 0 2 e 1 6 )山蓉
4、大学谴士学位论文谂文I巾文臻甏撬攀激素非司酮秘翱洛司嘏抑制弊位子富内膜阐袋缨脆体外增殖的研究潜士辑究垒：李嘴江媾士生嚣薅：李继俊教授鸳聚：予室内貘雾绽瘫是翅秘鬻霓疾瘸，菠设牲侵继缝堂长鼓寄怒瞧瓣渣载缀织瘸理粒赫凑酶廷。予褰痨壤舅位瘘鹣基礁灏瞧藤磷究蹩虹释翻雯麓爨学矮域豹重赢谍戆。力兆，双2 0 瞧缴秘牮代开始，诲多攀嚣簸爝实验蕊子窝肉簇异袋癍动物模黧秘体外熔耱麓异位予富内艨腺体和闯艨纲胞为痰瘸模型，进行予塞内膜异像痣基磷研究，并彀缮匿夫黪逶溪。2 0 搬鳃鞠笨栽，涎羲生蘧灌努泌掌攀瑟分子麓璇学熬遴麓，拣蛙激豢镁牾撬瓣激索三笨鬣胺翻拭孕激索米非司酮应用于渗疗予窝内膜异位癌，弗取褥一定救效果，毽其
5、详缨瓣 絮题搬裁爨不十分鹎了。濒魏，遂一黪麓定撬蛙激素渗疗子寒悫溪器寝瘛鹣作用帆制，有助于翅髓予赛内膜爨 妻症的瘸困朝缴瘸规制，势为挽孕澈豢潼疗妇秘蠼激豢僚赖性疾病和脾瘸提供实验馕搌。髫瀚：强俸乡 培养麓辩位子蜜巍膜蓠鼷缨臌为磷究鹫黎，逶遗捡测不圈浓度嚣抗孕激豢米非司酮和剥涤司黼对辩位子富内膜间骠缁胞P C N A 、N F k a p p aBm R N AP 6 5 、N F - k a p p aB 、G M - - C S F 、V E G F 、E G F 淡达翁影响，谬徐抗孕激豢j 圣器链子塞内膜潮袋缨照傣岁 增臻豹作潮。方法：l ，辩德子摩蠹袋辩震臻臆的钵辨培养；瘟躅酶淤忧法，分
6、离、传代嬉葵媛常兹子窝内膜、卵巢子富内膜囊肿异位子富内膜，盛爝组织块培莽法培养予富腺肌瘸异能内膜细服。2山东大学博士学位论文2 髀位子寓内膜同质细胞体外生长的检测：应用M T T 法检测不同浓度米非司酮鞠蕈滔司麴( O ，l 1 0 - 7 1 x 1 0 4 t o o l L ) 彝不嗣传翅露阉( 1 2 1 2 0 小薅) 对舅锭子离内膜问质细胞体外生长的影响。3 、缁脆生长霞子表达静捡测：应丽缁麓飞片免疫缀绫纯学法检测舅位闯霞缩庭P C N A ，N F - - k a p p aB 表达。应用细胞飞片原位杂交法捡测N F - - k a p p aBm R N AP 6 5的表达。应
7、用E L I S A 法检测间质细胞培养基上清液中G M - - C S F 、V E G F 、E G F 浓度。应用R T - - P C R 方法检测异整矧矮细胞G M - - C S F 、V E G F 豹表达。结果：1 难常帮彝位子富内袋上皮细胞帮阔质细胞分离臻养和传代成稳，餐子富淼虢病异位内膜组织块培养米获成功。2 M 盯检测表明，米非司酮和利洛司酮以时间一剂量依赖性方式鹾著抑制弹位子富内骥闻覆缨怒抟体终增殖。3 P C N A 及N F - - k a p p a B 表达，米非司酮组高于利洛司酮缎，1 0 “m o l L 组高于1 0 。m o l L 缝窥对照组。N F
8、- - k a p p aBm R N A 表迭，对牒缝高予1 0 6 m o l L 蕴黧1 0 5 m o l L 缀，米非司酮组高于利洛司酮组。4 、G M - - C S F 、V E G F 、E G F 表达，对照组简于1 0 “m o l L 和1 0 q m o l L 缀，米菲司酮缌蹇于剥洛司酮组。结论：l 。辩位内膜、漆谴内貘阏震缩藤分嵩培养成功，雾位子富肉膜闻矮缁脆哥作为体外研究子宫内膜异位癍的实验模型。2 、米非司酮及利洛司酮以时间- N 量依赖健方式最著抑制辩位子离内膜间质细胞款髂鲣增殖，茭终用与终调缨戆生长因子G M - C S F 、V E G F 鞫E G F
9、表达，舞调P C N A 、N F - k a p p aBm R N A 和N F k a p p aB 的表达相关。3 、嚣洛司粼对异位蠹簇闰矮缨麓静季牵制终掰高于米菲霹酮。关键词：予离内膜辩位症辩位问质细胞抗孕激素增殖细胞因子山东火学博士学位论文论文I I抗孕激素米非司酮和利洛司酮诱导异位子宫内膜问质细胞凋亡的研究博士研究生：博士生导师：李明江李继俊教授背景子宫内膜异位症慢性侵蚀性生长与异位子宫内膜细胞过度增殖和凋亡活性降低相关。凋亡( a p o p t o s i s ) 是生命细胞在多基因调控的程序化死亡过程。许多研究证实， ：F 宫内膜异位症的异位子宫内膜细胞凋亡率明显低于正常子
10、宫内膜和原位子宫内膜。目前所有治疗子宫内膜异位症的药物( 丹那唑、内美通、三苯氧胺、米非司酮和G n R H a ) ，均通过促进细胞凋亡而发挥治疗作用。2 0 世纪8 0 年代以来，抗性激素，包括抗雌激素三苯氧胺和抗孕激素米非司酮、利洛司酮开始用于治疗子宫内膜异位症，并取得一定的临床效果，其作用与诱导细胞凋二相关。因此，从分子生物学、基因调控、细胞病理和超微结构方面研究观察抗性激素治疗子宫内膜异位症的作用机制，具有重要的学术理论和临床实用价值。目的：观察抗孕激素米非司酮和利洛司酮，在不同浓度和作用时问下，对异位子宫内膜间质细胞凋亡、凋亡蛋白表达和细胞形态学的影响。方法：体外传代培养的第4 5
11、 代异位子宫内膜间质细胞，在不同浓度( O 、1 0 一7 m o l L 、1 0 6 m o l L 、1 0 m o l L 、1 0 “m o l L ) 的米非司酮和利洛司酮培养下，观察不同作用时I I 白J ( 2 4 h s 、4 8 h s 、7 2 h s ) 的细胞凋亡活性、凋亡相关蛋白表达和细胞形态学变化。应用E L I S A 法检测培养基上清液中F a s 蛋白浓度。以末端标记( T U N E L ) 分析异位阳J 质细胞凋亡率。应用流式细胞仪检测A n n e x i nV 阳性细胞率。结果：1 细胞凋亡相关蛋白的变化：E L I S A 发现，抗孕激素浓度为1
12、0 一m o l L ，作用山东大学博士学位论文2 4 小时，异位子宫内膜间质细胞开始出现F a s 表达，其表达呈现时间一剂量依赖性升高。T U N E L 分析显示，抗孕激素浓度为1 0 一m o l L ，作用4 8 小时，异位子宫内膜间质细胞丌始出现阳性细胞，其数量也呈现时问剂量依赖性增加。流式细胞仪测定A n n e x i nV 发现，当抗孕激素浓度为1 0 一m o l L ，作用4 8 h s 时，异位问质细胞凋亡率开始增加，细胞凋亡率以时间- 剂量依赖性增加。2 细胞形态学变化：光镜观察发现，两种抗孕激素以浓度1 0 一m o l L 、培养4 8小时，异位子宫内膜问质细胞开
13、始出现早期细胞凋亡变化。随作用时间延长和浓度增加，细胞凋亡形态学变化更趋明显。抗孕激素浓度为1 0 m o l L 、培养4 8 小时，异位削质细胞多数坏死和漂浮。两种抗孕激素的作用无明显差别。透射电镜观察发现，抗孕激素浓度为1 0 。m o l L 时，异位I 训质细胞即出现典型的细胞凋亡变化。结论：1 抗孕激素米非司酮和利洛司酮以时间和剂量依赖性方式促进异位子宫内膜间质细胞的凋亡2 米非司酮和利洛司酮通过调节细胞凋亡相关蛋白和基因的表达促进异位间质细胞凋亡。3 、利洛司酮诱导异位内膜细胞凋亡的作用高于米非司酮。关键词：子宫内膜异位症抗孕激素凋亡T U N E LF a sA n n e x
14、 i nV出东丈学祷士学饭论文谂文I I I米非司酮和三苯氧胺对子宫腺肌病N F k a p p aB 、N F k a p p aBm R N A ，P D G F 翻T G F 一蚤表达酌影璃博士研究生：李明江博生导箨：李继俊教授蟊瓣 溉寨抗孕激素米非菊黼耦抗蠛激素三笨戴胺辩子宫藩腻瘸N F - k a p p a Bp 6 5m R N A 、N F k a p p aB 、P D G F A 器T G F - b e t a 表达靛影响，探讨蕊黪嬲飙裁，为躲藏应用提供实验依据。方法：子富菰鼹癌麓病人霹6 凑，蘧辍分必淤睡霹黧浚疗缓、三苯裁羧治疗缝帮对照缓。威耀原德杂交法检测N F -
15、k a p p aBp 6 5m R N A 懿表这；藏塌免瘦缀纯法渔测P D G F A 。T G F “b e t a ，N F k a p p aB 的表达。绩袋：1 。子窘艨瓿痰嚣馥子塞斑貘秘舅佼子富疼联垮莓在N F - k a p p aBp 6 5m R N A 、N F k a p p aB 、P D G F A 帮T G F b e t a 表达。2 。对照堪( 来渣疗绻) ，擞经子塞恣貘中N F - k a p p a B p 6 5 m R N A 、N F k a p p a B 、P D G F A 、T G F 。b e t a 的袭达较黼并呈现周期性变化，分泌期高予
16、增生期。异位子宫内貘表达秘撬麓予溪蕴子鬻癍黢，遭无鲷霞躅麓缝燮健。3 。三笨氧薮治疗缀：暴键内膜帮募往内膝N F - k a p p a B p 6 5 m R N A 、N F - k a p p a B 、P D G F ，A 、T G F b e t a 的袋达较辎，低于对照组( p 如0 5 ) ，无周期性爱化，两者表达疆凄无嚣蓉瞧菱髯。4 。米棼司黧潼疗绥：努霞子寒肉骥N F k a p p aBp 6 5m R N A 、N F - k a p p aB 、P D G F - A 、T G F ，b e t a 的表达较弱或褥谴，褥显憾予原位子富内袋。5 。燧臆因子N F k a p p aBp 6 5m R N A 、N F k a p p aB 、P D G F A 翻T G F b e t a 豹表达山东大学媾士学位论文强度，依次为对照组 三苯氧胺e l l 米非司酮组，三组存在恩著性麓异。N F k a p p aB
