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1、1植物染色体安全毒理实验植物染色体安全毒理实验洗衣粉对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应洗衣粉对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应摘要摘要 本实验研究一定浓度的洗衣粉对蚕豆根尖的诱变效应试验。采用蚕豆根尖细胞的微核试验方法， 以一定浓度的洗衣粉处理蚕豆根尖，观察蚕豆根尖细胞的微核率。学会理论联系实际的去独立设计实验、 准备实验、完成实验和分析实验，从本质上理解毒物对有丝分裂过程中的影响，即毒物能抑制有丝分裂 过程，导致染色体畸变效应和微核效应，产生染色体膨大，滞后染色体和染色体桥。关键词关键词 洗衣粉 蚕豆根尖 微核效应 染色体前言前言 微核（micronucleus,MCN）是指位于生物细胞的细胞质中，完全
2、与主核分开的椭圆 形或圆形的微小核。目前普遍认为微核是由外界损害因素(生物、物理、化学)作用细胞 后，导致细胞染色体发生畸变，造成无着丝粒的染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时,染 色体载玻片段不能随有丝分裂进入子细胞,而在细胞浆中形成直径小于主核的、嗜色与主 核一致、完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核，其染色同主核，但比主核淡，其直径 小于主核 1/3，在胞浆中形成 1 个或数个小核。1 蚕豆根尖微核试验在年已被中国环保局列为一种水环境生物测试的规范方法。 它作为一种环境致突变性的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都 有广泛的应用。2蚕豆根尖微核技术是一种检测化学药品对生物毒
3、害的毒理学方法，具有简便、快速、重复性好和灵敏度高的优势。利用洗衣粉处理蚕豆根尖，测定蚕豆根尖细胞的微核数和微核率，得到实验结果表明： 毒物（洗衣粉）能引起染色体畸变和微核效应，根尖细胞的有丝分裂受到抑制。31 1 材料和方法材料和方法1.1 实验材料立白洗衣粉、蚕豆、滤纸、纱布、培养皿、恒温箱、量筒、锥形瓶、标签、刀片、卡诺 氏固定液（3 甲醇：1 冰醋酸） 、1mol/L 的盐酸、蒸馏水、石碳酸-品红溶液、乙醇 （95%、70%） 、显微镜1.2 实验方法1.2.1 浸泡 选用适量大小均匀、色泽一致的籽粒，将试验用蚕豆种子按需要量（20 粒）放人盛有 自来水的烧杯中，浸泡 24 h，（22
4、23）1.2.2 发芽种子吸胀后松散的铺在铺有 2 层浸湿纱布的培养皿中，用 2 层浸湿纱布盖在种子上， 保持湿度，在 2223催芽 2 天，待大部分初生根长至 12 cm 左右时，再选取发芽良 好的种子，作为实验材料，便可进行实验。21.2.3 毒液处理分别选取 10 粒生长良好、根生长差不多的种子，分别用蒸馏水、毒液培养种子一天。1.2.4 恢复培养将种子用蒸馏水洗净之后，分别放入培养皿中，于 2223恢复培养 24 小时。1.2.5 固定剪取约 1cm 根尖，放入卡诺氏固定液中固定 56 小时。1.2.6 解离取出根尖，用蒸馏水洗涤 2 次，吸干，加入 1mol/L 的 HCL 将幼根浸
5、没，60条件下解 离 35 分钟，使幼根软化。 1.2.7染色取出根尖，用蒸馏水洗 34 次，放在载玻片上，滴上石炭酸品红染色液，然后用解剖 针将根尖细胞团块在染色液中捣碎，染色 1520 分钟。1.2.8压片在根尖上盖上盖玻片，垫上吸水纸。用拇指垂直加压，将根尖压成薄片，使根尖细胞 被展开。41.2.9 镜检、计数选取一定的视野，观察 1000 个细胞中发生微核效应的细胞个数，计算微核百分率与污染 指数 PI。微核百分率=含有微核的细胞数/观察统计的细胞总数1000污染指数（PI）=样品实测微核率平均值/对照组微核率平均值附：污染指数 PI 值评价样品标准表3PI 范围 污染程度0.001.
6、50基本无污染1.502.00轻度污染2.003.50中度污染3.50 以上重度污染2 2 结果与讨论结果与讨论2.1 结果通过观察，得到以下结果：表一：一定浓度洗衣粉对蚕豆根尖微核率的影响项目观察细胞数/个微核细胞数/个微核百分率/%污染程度载玻片一载玻片二载玻片三载玻片四载玻片五（对照组）载玻片六（对照组）载玻片七（对照组）1000100010001000100010001000358100120.75%1.25%2.00%2.50%0.00%0.25%0.50%基本无污染轻度污染中度污染中度污染无污染基本无污染基本无污染由实验可知：毒物（洗衣粉）能引起微核效应，根尖细胞的有丝分裂受到抑制
7、。2.2 结果讨论微核是真核生物细胞中的一种异常结构，它主要由落后的染色体和无着丝粒的染色体 载玻片段所形成。微核的数量反应了染色体损伤的程度，可反映诱变剂对生物的危害程 度，所以，微核已经成为检测环境诱变剂毒害效应的一个重要指标。5通过与其他组的比较，一定浓度的洗衣粉溶液对蚕豆根尖的影响也不同。这可能与同4学培养的蚕豆根尖的长度有关。而且不同浓度的洗衣粉对蚕豆根尖的影响也不同，而且 毒物浓度越高影响越大。参考文献参考文献 1.杨汉民 细胞生物学实验 高等教育出版社 205-207 2.纪云晶 实用毒理学手册 中国环境科学出版社 379-385 3.翟中和 王喜忠 丁明孝 细胞生物学实验 高等教育出版社 271-277、290-291 4.祝庆蕃，常福聚，赵庆夏蚕豆根尖细胞微核试验J遗传 5.李龙 陈家 现代毒理学实验技术原理和方法 化学工业出版社 31-34
