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1、唾液淀粉酶唾液淀粉酶最最适适 pH 的测定的测定广西医科大学广西医科大学 42 班班 2 组组 刘家林刘家林摘要：摘要： 酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活 性主要受温度、p H 值等因素影响。温度一定时,酶活力最高时的 p H 值为该酶 在该温度的最适 p H。在不同 p H 值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾 液淀粉酶的最适 p H 值。在不同 p H 条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应 呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物 的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适 p H。关键词关键词 ：唾液淀粉酶； 最适
2、 pH； 吸光值；前言：前言：酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新陈代谢包括的所 有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶催化化学反应的能力称为酶活性。 酶的化学本质是蛋白质，它具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解 离作用。酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被 广泛应用于各个领域。影响酶反应活力的因素很多，主要包括 pH、温度、酶浓 度、金属离子浓度、抑制剂等。酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到 H+的影响，酶活性中心功能基团解离状态将直接影响到酶的活化以及酶与底物 的亲和力，其会随着溶液 pH 的改变而改变。所以，溶液 pH 对酶催化反应的速 度
3、有明显的影响。在某一 pH 值时，酶活性达到最大，这一数值称为酶的最适 pH。不同的酶的最适 pH 不相同。淀粉经唾液中的淀粉酶水解，生成糊精和麦 芽糖，在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝 色复合物，其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。用单位 时间剩余淀粉量与碘反应产生的蓝色在 660 nm 处的吸光度值来表示淀粉酶的活 性。在温度、酶浓度相同的情况下，酶活力在最适 pH 的情况下达到最大。正文：正文： 一、一、实验过程实验过程 （一）（一）不同不同 pH 缓冲液的配制缓冲液的配制按下表配置不同按下表配置不同 pH 的缓冲液。的缓冲液。磷酸缓冲液配制表
4、 pH02mol/LNa2HPO4（ml ）02mol/LNaH2PO4（ml ） 6006154385 6209254075 6413253675 6618753125 6824502550 7030501950 7236001400 （二）（二）唾液的获取唾液的获取 先漱口先漱口 12 次，然后含一大口水约次，然后含一大口水约 1 min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。中。（三）（三）淀粉用量的确定淀粉用量的确定 实验组和空白对照组设置表实验组和空白对照组设置表 用量（mL） 实验组实验组1 12 23 3空白对照空白对照 7 70pH0pH缓冲液缓冲液
5、0 09 90 09 90 09 90 09 9 2 25g/L5g/L淀粉淀粉0 01 10 02 20 03 3 唾液（稀释唾液（稀释1010 倍）倍）0 01 10 01 10 01 10 01 1H2OH2O5 59 95 58 85 57 76 6混匀，37水浴 75 min，然后向每管加 2 滴碘液。 混匀，观察现象看出，03 mL 25 g/L 淀粉溶液颜色反应最浅选择该管做下一步实验。（四）（四） 酶液稀释倍数的确定酶液稀释倍数的确定 酶液稀释倍数酶液稀释倍数稀释倍数稀释倍数5 510101515202025253030酶液（酶液（mLmL）1 10 05 50 04 40 0
6、25250 02 20 02 2H2OH2O（mLmL）4 44.54.55 56 64 475754 48 85 58 8 通过实验得到的酶液稀释对照结果如下表：稀释倍稀释倍 数数5 510101515202025253030空白空白7 70pH0pH 缓冲液缓冲液0 09 90.90.90 09 90 09 90 09 90 09 90 09 92 25g/L5g/L 淀粉淀粉 （mLmL）0 03 30 03 30 03 30 03 30 03 30 03 30 03 3唾液唾液0 01 10 01 10 01 10 01 10 01 10 01 1H2OH2O6 66 66 66 66
7、 66 66 6 混匀，37水浴 75 min，然后向每管加 2 滴碘液。 混匀，观察到稀释 5 倍的 1 号管颜色最浅，为最适管。 （五）最适（五）最适 pHpH 的确定的确定 实验过程及其记录如下表： pHpH6 60 06 62 26 64 46 66 66 68 87 70 07 72 2pHpH 缓冲液缓冲液0 09 90 09 90 09 90 09 90 09 90 09 90 09 92 25g/L5g/L 淀淀粉粉 0 03 30 03 30 03 30 03 30 03 30 03 30 03 3某倍数唾液某倍数唾液（5 5 倍）倍）0 01 10 01 10 01 10
8、01 10 01 10 01 10 01 1混匀，混匀，3737水浴水浴 7.57.5 minmin。然后向每管加。然后向每管加 2 2 滴碘液滴碘液 H2OH2O6 66 66 66 66 66 66 6A6600 03363360 02572570 01921920 03093090 03543540 03713710 0402402 混匀，用蒸馏水调零，测定 A660。 以 A6 6 0 为纵坐标，p H 为横坐标作图，得出如下结果：66.26.46.66.877.27.400.050.10.150.20.250.30.350.40.45唾液淀粉酶PH-A660PHA660二、二、实验结
9、果实验结果由以上实验过程可以得出，唾液淀粉酶的最适 pH 为 64 三、讨论 唾液的 pH 一般为 6671，唾液淀粉酶的最适 pH 约为 6 . 8。在这次实验 中产生误差的可能原因为：（1）制备酶时存在一些不足。直接漱口获得酶的方 法对酶浓度的影响较大；每个人因为个体差异，其唾液淀粉酶对酸碱度的适应 程度不同。 （2）实验设置不理想。固定的缓冲液配置不够精确；水浴保温时间 和反应时间不一致。另外，实验中碘液的浓度也直接关系到对实验结果的准确 观察，若实验中配制的碘液浓度高，其颜色将实际反应的颜色遮蔽，对淀粉用 量和淀粉稀释倍数的判定容易造成影响，使实验结果不能准确地观察得到。酶 活性受 pH 的影响，在 37时，最适 pH 为 64，接近中性，与口腔的环境相似， 所以唾液淀粉酶在人体口腔内有较好的初步消化淀粉的作用。
