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1、1恰玛古中氨基酸的测定恰玛古中氨基酸的测定摘要：摘要：恰玛古中有人体必有的氨基酸。本文采用了分光光度法来测定伊宁，拜城县，柯坪县，焉耆县的恰玛古中氨基酸含量1。丙氨酸作为标准溶液绘制出标准曲线，其回归方程为: Y=0.01024+1.28961X，R2=0.99831 0.014990.0001 mg/ml 的范围内呈良好的线性关系。平均回收率为 94.06%。用比色法查出丙氨酸与显色剂显色在 570nm 处测定吸光度。结果表明：伊宁恰玛古中氨基酸的含量最高，柯坪恰玛古氨基酸的含量最低。关键词：关键词：恰玛古；氨基酸；分光度法；测定 2前言恰玛古(芜菁，Brassica campestris)
2、一种草本是字花科植物，又称蔓箐、狗头 芥、鸡毛菜等，维吾尔语称为“恰玛古”(音译)；药食两用，广泛分布在全国各地 2。中国中草药大全、本草纲目、维吾尔药志、中华人民共和国卫生部药品标准、维吾尔药分册等药典对恰玛古的植物来源、药材性状(包括块、 根、叶、花和子)、化学成分、药理作用、功能主治、配方加工等都有详细记载。 是肺身之佳品，具有清肺止咳，填精壮阳，明目增视等功效。据大医典记在长 食恰玛古能“生发乌发，润喉顺气，填精壮肾，软肠通便，通利关节，治斑秃，喉 燥气短，肾脏瘦弱，骨节不利等” 4。 恰玛古是高碱性的植物，能平衡人体酸碱度。构成人体的最基本的物质，有蛋 白质、脂类、碳水化合物、无机盐
3、、维生素、水和食物纤维等。 作为构成蛋白质 分子的基本单位的氨基酸，无疑是构成人体内最基本物质之一。 构成人体的氨基酸有20多种，它们是：色氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸、赖 氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、苯谷氨酸、乌氨酸等。这些氨基酸存 在于自然界中，在植物体内都能合成，而人体不能全部合成。蛋白氨基酸作为蛋白 质的组成成分，在人和动物的营养代谢和生理功能上发挥重要功能。恰麻姑中有丰 富的氨基酸。本文用分光光度法测定恰麻姑中氨基酸，方法简单，具有产率高，速 度快，耗资少等特点，因而具有广阔的研究和应用前景3。1.实验部分1.11.1 实验原理：实验原理： 1. .茚三酮溶液与氨基酸共热
4、，生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应，最终为蓝色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比。因此在比色法可以用茚三酮对氨基酸进行测定67。CCCOOHOOHCCCOHOOHCCCOHOOHCCCOOHOOH +HCCOOHNH2R+NH3+CO2+RCOH +NH3+ 3OH2CCHNCOOCCCOO 31. 2 仪器与试剂1. 2. 1 主要仪器： 1 分光光度计 722S 型（上海第三分析仪器厂） 2.温水浴锅（山东鄄城华鲁公司） 3.搅碎机（北京市永光明医疗仪器厂）4.电子天平（上海精科天平）5.长颈漏斗 6.移 液管 7.量筒 8.烧杯 9.滤纸 10.温度计 11.容量瓶 12
5、. 具塞试管。 1.2.2 试剂 1.盐酸（分析纯）2.茚三酮（分析纯）3.乙二醇甲醚（分析纯）4.抗坏血酸（分析 纯）5。丙氨酸（分析纯）6.乙醇（分析纯）7.柠檬酸（分析纯）8.氢氧化钠（分 析纯） 。 1.2.31.2.3 试剂的配制试剂的配制 1.茚三酮乙二醇甲醚的制备：先制备还原性茚三酮，称去 2.5 克茚三酮，用 65ml 沸蒸馏水溶解，的黄色溶液，将 5g 抗坏血酸用 250ml 温蒸馏水解一边搅拌一 边将抗坏血酸溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。滴定后继续搅拌 15min， 然后在冰箱内冷却到 4过滤，沉淀用冷水洗条 3 次。然后称取 0.043g 茚三酮和 0.007g
6、还原茚三酮，用 50ml 乙二醇甲醚溶解。 2. 1%抗坏血酸溶液的制备：精密称取 1 克抗坏血酸固体放到 100ml 的容量瓶中 水稀释刻度。 34%氢氧化钠溶液的配制：称取氢氧化钠 4g 放到 100ml 的容量瓶中水稀释至 刻度。 4pH5 的柠檬酸溶液的制备：精密称取 2g 柠檬酸稀释然后加 0.1mol/l 氢氧化 钠溶液至 pH=58。 56mol/L 盐酸的制备：100 容量瓶中放入 50ml 盐酸再加入 50ml 水稀释刻度。 660%乙醇的制备：量取 63ml 乙醇放入 100ml 容量瓶中水稀释至刻度。 7. 丙氨酸的配制：取 0.032g 丙氨酸放入 100ml 容量瓶中
7、水稀释至刻度。 1.31.3 实验方法实验方法1.3.1 最大吸收波长 精密量取浓度为 0.32mg/ml 丙氨酸标准溶液 0.0ml，0.1ml 分别装入 25ml 具塞试管 中，加水使成 1.0ml，加 pH 为 5.0 的柠檬酸缓冲溶液 1.0ml，加 1%抗坏血酸溶液 0.1ml，茚三酮乙二醇甲醚试液 1.0ml，摇均，放到沸水中加热 3 分钟，取出，放冷至 室温，加 60%乙醇 3ml，水稀释至刻度，摇均。用分光光度计，在 460-650nm 波长处扫 描得吸收曲线，并确定最大吸收峰的波长，以此为测（结果见表-2 图-1）1.3.2 标准曲线的绘制 精密量取浓度为 0.32mg/ml
8、 丙氨酸标准溶液 0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7ml 分别装入 25ml 具塞试管中，加水使成 1.0ml，加 pH 为 5.0 的柠檬酸缓冲溶液 1.0ml，加 1%抗坏血酸溶液 0.1ml，茚三酮乙二 醇甲醚试液 1.0ml，摇均，放到沸水中加热 3 分钟，取出，放冷至室温，加 60%乙醇 3ml，水稀释至刻度，摇均。用分光光度计，在 570nm 波长处测吸收度（结果见表-3 图- 2）所示。41.41.4 稳定性实验的选择稳定性实验的选择 1.4.1 提取时间的选择把恰玛古洗净，搅碎恰玛古。取恰玛古 1g，精密称定。用适量的水溶解并转移 100ml 量瓶中
9、，于 60水浴中分别振摇 0，5，10，15，20，25，30 分钟，放冷， 加水至刻度，摇匀，滤过。分别量取恰玛古提取液 0ml,1.0 ml 分别装入 25ml 具 塞 试管中。加水使成 1.0ml，加 pH5.0 的柠檬酸缓冲溶液 1.0ml，加 1%抗坏血酸溶液 0.1ml，茚三酮乙二醇甲醚试液 1.0ml，摇均，放到沸水中加热 35 分钟，取出，放 冷至室温，加 60%乙醇 3ml，水稀释至刻度，摇均。在 570 波长处测吸收度（结果 见表-4 图-3）1.4.2 茚三酮显色时间的选择把恰玛古洗净，搅碎恰玛古。取恰玛古 1g，精密称定，用适量的水溶解并转 移至 100ml 量瓶中，于
10、 60水浴中分别振摇 15 分钟，放冷，加水至刻度，摇匀， 滤过。分别量取恰玛古提取液 0ml,1.0 ml 分别装入 25ml 具塞试管中。加水使成 1.0ml，加 pH5.0 的柠檬酸缓冲溶液 1.0ml，加 1%抗坏血酸溶液 0.1ml，茚三酮乙 二醇甲醚试液 1.0ml，摇均，放到沸水中加热 5，10,15,20,25，30，35，40,45 分 钟，取出，放冷至室温，加 60%乙醇 3ml，水稀释至刻度，摇均。照分光光度计法， 在 570 波长处测吸收度（结果见表-5 图-4）。1.4.3 伊宁，拜城县，柯坪县，焉耆县恰玛古中氨基酸测定 表1 取样量(g) 恰麻古取样次数伊宁市柯坪县
11、拜城县焉耆县第一次 1.003 1.007 1.012 1.006 第二次 1.006 1.003 1.007 1.008第三次 1.004 1.008 1.005 1.000 第四次 1.003 1.007 1.006 1.005第五次 1.009 1.002 1.007 1.008用适量的水溶解并转移至 100ml 量瓶中，于 60水浴中分别振摇 15 分钟，放 冷加水至刻度，摇匀，滤过。分别量取恰玛古提取液 0ml,1.0 ml 分别装入 25ml 具塞试管中。加水使成 1.0ml，加 pH5.0 的柠檬酸缓冲溶液 1.0ml，加 1%抗坏血酸 溶液 0.1ml，茚三酮乙二醇甲醚试液 1
12、.0ml，摇均，放到沸水中加热 35 分钟，取出， 放冷至室温，加 60%乙醇 3ml，水稀释至刻度，摇均。照分光光度计法，在 570 波 长处测吸收度(结果见表-6 图-5)。1.5 回收率实验 精密称取样品三份，每份约 1g，分别加入一定量的丙氨酸标准溶液，按照 1-2 丙 氨酸标准曲线的相同条件下进行测定（结果见表 7）所示。52 结果与分析2.1 最大吸收波长的选择 表 2 波长与吸光度的关系图 1 最大吸收波长的曲线由（表 2 图 1）可知，丙氨酸在 570nm 处有较大吸收。它对应的 A 为 0.933.以 570nm 为最大吸收波长测定吸光度。波长 460 470 480 490
13、 500 吸光度 Abc 0.060 0.073 0.108 0.152 0.226波长 510 520 530 540 550 吸光度 Abc 0.318 0.425 0.577 0.717 0.811 波长 560 570 580 590 600 吸光度 Abc 0.882 0.933 0.875 0.807 0.699 波长 610 620 630 640 650 吸光度 Abc 0.591 0.453 0.345 0.261 0.17562.2 标准曲线的绘制表 3 吸光度与浓度的关系样品次数 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10浓度（mg/ml）0.0012 0.0025 0.0
14、038 0.0051 0.0064 0.0076 0.0089 0.0102 0.0115 0.0128吸光度（A） 0.223 0.287 0.365 0.479 0.556 0.637 0.722 0.786 0.851 0.933图 2 标准曲线由（表 3 图 2）可知，在波长 570nm 处测定其吸光度，结果表明浓度（c） 吸光度（A）关系曲线的回程方程；Y=0.01024+1.2896X，相关系数 0.99831。2.3 稳定性试验2.3.1 提取时间的选择 表 4 提取时间与吸光度关系 时间 （min）0 5 10 15 20 25 30吸光度 （A）0.2010.2070.288
15、0.2790.2800.2820.2857图 3 提取时间曲线 由（表 4 图 3）可知恰玛古提取到 1525 分钟吸光度保持不变，1525 分钟是 提取最佳时间。2.3.2 显色时间的选择表 5 显示时间与吸光度的关系 时间 （min）5 10 15 20 25 303540 45吸光度 （A）0.0370.1430.2140.2370.2770.3060.2850.2800.283图 4 显色时间曲线 由（图 4 表 5）可知茚三酮显色 3545 分钟吸光度保持不变，3545 分钟是显 色最佳时间。82.4 恰麻古中氨基酸的含量图 5 恰麻古中氨基酸含量的比较由（表 6 图 5）可知，伊宁恰玛古中氨基酸的含量最高，柯坪恰玛古中氨基酸 的含量最低。92.5 回收率表 7 回收率试样体积(ml)吸光度回收率% 平均回收率%1丙氨酸标准液0.10.223 2恰玛古10.279 10.722396
