《雌激素对青春期大鼠Sertoli细胞及血-睾屏障的影响（毕业设计-人体解剖与组织胚胎学专业）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《雌激素对青春期大鼠Sertoli细胞及血-睾屏障的影响（毕业设计-人体解剖与组织胚胎学专业）（65页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 上海交通大学硕士学位论文雌激素对青春期大鼠Sertoli细胞及血-睾屏障的影响姓名：潘艺青申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：徐晨20070501 雌激素对青春期大鼠 Ser t ol i细胞及血-睾屏障的影响摘要目的：本实验旨在通过体内、体外两种途径给予青春期大鼠外源性雌激素，初步探讨在 Sertoli细胞分化和成熟阶段，雌激素对 Sertoli细胞FasL表达以及血睾屏障的影响，进一步讨论影响血睾屏障的相关因素及其可能机制。方法：（1）Sertoli细胞 FasL的表达：在培养液中加入雌二醇（浓度 410-6M），分别在 Sertoli细胞培养 24小时、48小时，用间
2、接免疫荧光方法检测 Sertoli细胞 FasL表达的变化；新生 SD大鼠（出生=第 0天），自出生第二天始隔日皮下注射二乙烯雌酚（DES），浓度 10 /20，至第十二天为止，与母鼠共同喂养至第 18天和第 25天两个时间点取材。应用间接免疫荧光方法检测 Sertoli细胞 FasL表达的变化。（2）新生 SD大鼠自出生第二天始隔日皮下注射 DES，与母鼠共同喂养至第18天和第 25天取出双侧睾丸，切成 1mm小块，置入 3% 硝酸镧-戊二醛3-二甲砷酸钠缓冲液中前固定，利用重金属镧不能穿越正常血睾屏障的特点，运用睾丸组织硝酸镧块染法在电镜下观察血睾屏障结构的变化。 （3）新生 SD 大鼠自
3、出生第二天始隔日皮下注射 DES，与母鼠共同喂养至第 18天和第 25天两个时间点心脏取血，ELISA方法检测血液中 TNF浓度的变化。结果：给予外源性雌激素后使：（1）Sertoli细胞 FasL表达增强，并出现 FasL分布区域的改变。（2）在 18天实验组，电镜下显示镧大量透过血睾屏障，到达生精上皮全层。（3）血液中 TNF浓度降低。结论：（1）雌激素可以使 Sertoli细胞内 FasL的表达量和分布区域发生改变；（2）雌激素可以影响血睾屏障的结构与功能（硝酸镧轨迹，TNF 浓度）；（3）FasL可能在血睾屏障结构与功能改变后的机体自身修复中起重要作用，并激活免疫调节功能，因此它可能与
4、睾丸组织免疫豁免密切相关。关键词:雌激素，Sertoli 细胞，FasL，血睾屏障 EFFECTS OF ESTROGENS ON SERTOLI CELLSAND THE BLOOD-TESTIS BARRIEROF THE PUBERTY RATABSTRACTObjective: Firstly, to investigate the relationship between exogenous estrogens exposure and the expression of FasL in Sertoli cells as well as the blood-testis barrie
5、r during the differentiation and maturation period of Sertoli cells in vitro and in vivo. Secondly, to study the effects of estrogens changes on the blood-testis barrier of the puberty rat. Methods: (1) FasL expression in Sertoli cells: estradiol (E 2), at the concentration of 410 M, cultured with S
6、ertoli cells for 24 hours and 48 hours. FasL -6expression in Sertoli cells was determined by immunohistochemistry. Neonatal rats (birth=day0) were administered by subcutaneous injection: 10g DES in 20l corn oil administered on days 2, 4, 6, 8, 10 and 12, fed with their mothers to day18 and 25. The r
7、ats were sacrificed and the expression of FasL in Sertoli cells was observed. (2) Neonatal rats were administered by subcutaneous injection: 10g DES in 20l corn oil administered on days 2, 4, 6, 8, 10 and 12, fed with their mother to day18 and 25. The small block (1mm ) of testis tissue was 3impregn
8、ated in 3% of lanthanum nitrateglutaldehyde buffer for fixation. Since lanthanum cannot pass though the normal blood-testis barrier, so the changes in the rat blood-testis barrier can be observed by electron microscope. (3) Neonatal rats were administered by subcutaneous injection: 10g DES in 20l co
9、rn oil administered on days 2, 4, 6, 8, 10 and 12, fed with their mothers to day18 and 25. Blood was taken from the heart. Plasma TNFlevels were measured by ELISA. Results: After exogenous estrogens exposure: (1) the FasL expression was up-regulate in immature Sertoli cells, and the localization of
10、FasL expression was changed. (2) Lanthanum can pass through the blood-testis barrier and reached at the whole of the epithelium in experimental group of 18 days. (3) Plasma TNFlevels decreased. Conclusions: After exogenous estrogens exposure: (1) change the expression and the localization of FasL in
11、 immature Sertoli cells; (2) the structure and function of the blood-testis barrier (the track of Lanthanum and plasma TNFlevels) was changed. (3) FasL would have important effect on the recovery of the blood-testis barrier, and activate the immunoregulatory function, these results demonstrate that
12、it may be closed related to the status of testis immune privilege. KEY WORDS: Estrogens，Sertoli cell，FasL，the blood-testis barrier 上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期： 年 月
13、 日 上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密，在 年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密。（请在以上方框内打“”）学位论文作者签名： 指导教师签名：日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 引言二十世纪上半叶发现环境中雌激素或其异构体可以引起胚胎期睾丸发育异常1，然而直至上世纪九十年代仍然有部分学者认为男性生殖系统中雌激素受体
14、（ER，ER）的存在是胚胎发育过程中性别分化的遗 迹2 。随着小鼠胚胎期因接触二乙烯雌酚（DES）造成隐睾和附睾功能缺陷的发现 2,3重要作用才逐渐引起人们的关注。随后的研究发现睾丸内生精细胞和 Sertoli细胞都能表达芳香化酶（Ar）从而合成雌激素4,5,6，雌激素在男性生殖系统中的。近年来随着基因敲除等分子生物学实验方法的运用，进一步证实雌激素与男性生殖密切相关。ER在啮齿类动物生殖器官整个发育时期几乎都有表达。胚胎期睾丸网和 输出小管以及附睾头部 ER的表达明显高于附睾远端和其他部位，呈 现明显的多态性；未成熟期和青春期，ER逐渐远离生精上皮，在睾丸网和 输出小管以及附睾中表达，并且在
15、睾丸网和输出小管的表达高于附睾头部7；成年鼠睾丸网和输出小管以及附睾中 ER的表达呈现区域特异性，即在睾丸网和输 出小管以及附睾头部高于附睾体尾部。值得关注的是，在睾丸输出小管以及附睾起始部，ER 与雄激素受体（AR ）分布是一致的。雌激素有着非常广泛的生理功能，如调节细胞的生长和凋亡，参与生殖系统和中枢神经系统的发育和分化等等。大鼠睾丸液中雌激素的浓度可达 250 pg/ml 8,9高于正常女性血液中雌激素的浓度 10，雄马精液中雌激素的浓度甚至高达 4,000。睾丸中雌激素主要由睾丸间质中 Leydig细胞合成，以后发现 Sertoli 细胞、，pg/ml 11精子细胞都能表达 Ar从而合成雌激素。有趣的是：虽然睾丸液和精液中有如此高浓度的雌激素，但是男性血液中雌激素的浓度却不高。对于这一问题目前还没有十分合理的解释。睾丸中为何存在如此高浓度的雌激素，在睾丸特定的生殖环境中，它对 Sertoli细胞和生精细胞将产生怎样的影响，睾丸内各种细胞在此微环境中如何发挥正常的生理功能等，迄今尚未明了。Sertoli细胞对于睾丸的发育、功能成熟以及维持男性第二性征都发挥着重要的1 生理作用。Perter（
