《2型糖尿病和糖尿病肾病候选基因的研究[内分泌专业]2004.07.01》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2型糖尿病和糖尿病肾病候选基因的研究[内分泌专业]2004.07.01（86页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、南京医科大学硕士学位论文2型糖尿病和糖尿病肾病候选基因的研究申请学位级别：硕士专业：内分泌20040701南京医科人学坝f 学位论文中文摘要第一部分肾上腺髓质素与2 型糖尿病及糖尿病肾病目的研究肾上腺髓质素( a d r e n o m e d u l l i n ，A M ) 基因多态性与2 型糖尿病和糖尿病肾病之间的关系，并探讨肾上腺髓质素在糖尿病肾病中的作用，为糖尿病肾病的早期防治提供新的思路与方法。方法以江苏地区2 型糖尿病群体及受累同胞对为研究对象，应用微卫星多态性( M i c r o s a t e l l i t eD N A ) 结合聚合酶链反应( p o l y m e r
2、 a s ec h a i nr e a c t i o n ，P C R ) 技术，通过病例一对照相关研究和9 2 对性状一致性受累同胞对连锁分析对A M 基因多态性进行研究。通过体外培养人肾小球系膜细胞，观察高糖条件对系膜细胞A Mm R N A 、转化生长因子一p 】( t r a n s f o r m i n g g r o w t h 蠡c t o r一0 l ，T G F p1 ) m R N A 表达、T G F p1 分泌及血管紧张素I I ( A n g I I ) 和细胞外基质层粘连蛋白( f i b r o n e c t i n ，F N ) 和I V 型胶原( 1
3、i m i n i n ，L N ) 含量的影响及肾上腺髓质素干预的作用。结果 A M 基因下游约4 k b 处标记( C A ) 重复序列具有多态性。该位点存在4 种等位基因，C A 重复序列分别重复1 1 、1 3 、1 4 和1 9 次，频率分布介于1 4 7 。病例一对照群体分析结果表明，两组间等位基因频率总体分布有显著性差异( x22 0 4 5 ，P 0 0 5 ) 。等位基因2 频率最高，约为4 7 ，等位基因1 ，3 的频率均接近2 5 ，而等位基因4 频率最低约为1 。两组间基因型频率总体分布有显著性差异( x22 0 4 5 ，P 0 0 5 ) 。见表1 1 4四、糖尿病
4、人A M 基因等位基因4 组与A M 等位基因非4 组临床参数的比较糖尿病组具有A M 等位基因4 的基因型共有3 种( 1 4 ，2 4 ，3 4 ) ，共9 例，称为A M 等位基因4 组。其余不合等位基因4 的基因型有6 种，共9 5 例，称为A M 基因非4 组，两组问的临床参数进行比较，除血浆A M 水平外，结果无明显差异( P 0 0 5 ) ，见表1 1 5 。五、受累同胞对A M 基因微卫星位点等位基因连锁分析应用哈尔滨医科大学P P A P 统计软件受累同胞对I B S 法，计算t = 2 9 6 ，表明A M 下游约4 K b 处该微卫星位点与A M 基因两位点连锁。南京医
5、科凡学硕士学位论业表1 - 1 12 型糖尿病组与正常对照组临床资料和生化特征f X s )# 取自然对数( 1 n )+ P 0 0 5 ) 。可能是由于中国人群与日本人群均为亚洲人群，人种比较接近，故该基因微卫星多态性无显著性差异。遗传标记所包含的信息量除与多态类型的数目有关外，还与多态类型的群体频率有关。多态信息含量( P I C ) 和杂合度( H ) 是反映标记物可提供信息量大小的2 项指标。一般认为P I C 0 5 ，标记具有高度地可提供信息性：0 2 5 0 5 时H 能较合理的提供信息。本实验结果显示，中国人A M 基因微卫星多态性的多态信忽含量P I C 为O 6 0 3
6、，杂合度H 为0 6 5 3 ，表明该微卫星适合作为一种遗传标记进行连锁分析。A M 基因微卫星多态性在正常对照组和糖尿病组间基因型频率总体分布有显著性差异( x2 = 2 0 4 5 ，P I标志与疾病呈正关联，R R 值越大，其关联的程度越强：R R 0 0 5 ) 。阴性结果可能有以下几种可能：( 1 ) 观察样本数不大而致假阴性。( 2 ) 2 型糖尿病为多基因遗传病，由多个微效基因作用，每个微效基因的表型效应很小。( 3 ) 表现型是遗传基因与环境相互作用的结果，需要结合环境因素综合分析。我们的研究结果显示，在糖尿病纽具有A M 等位基因4 的患者其血浆A M水平较不具有A M 等位
7、基因4 的患者有明显升高，具有显著统计学差异( P O 0 5 ) 。健康对照组、正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组间A M 基因型频率分布具有显著性差异( x2 = 6 1 9 ，P O 0 5 ) 。V D R 基因F o kl 酶切位点各基因型在2 型糖尿病组和正常对照组中的分布差异具有显著统计学意义( x2 = 9 9 9 3 ，P = o 0 0 7 ) 。两组问等位基因频率总体分布有显著性差异( x2 = 7 6 9 8 ，P = o 0 0 6 ) 。D M 组等位基因f 和基因型仟频率明显高于N组，等位基因f 与2 型糖尿病呈明显正关联( R R = 2 0 9 ，
8、P = 0 0 2 5 - 0 0 1 0 ) 。等位基因F 与2 型糖尿病呈负关联( R R = 0 0 4 0 ，P 0 0 5 ) 。见表2 - 1 2袁2 - 1 2 糖尿病人V D R 等位基因F 组与等位基因f 组，临床参数的比较( X s )等位基因f 组等位基因l ? 组年龄( 岁)5 57 1 05 4 2 1 3病程( 年)8 2 0 677 07B M Ifk g m 2 )2 4 1 士0 62 5 2 4 - 0 4 W H RO 8 土0 0 10 8 士0 0 1S B P ( m m H 9 112 9 4 土2 21 3 0 4 土2 4 D B P ( m
9、m H g ) 8 2 2 e 1 28 3 8 土1 4F B S ( m m o l L )8 4 4 - 0 38 5 土0 5P B S ( m m o r E )1 2 8 土1 09 0 + 1 5F I N S ( m l U I 。、#2 3 土1 42 2 土1 6P I N S ( m l U U #3 2 6 土0 13 3 1 0 2I S I #一4 2 土0 24 4 士0 1T C ( m m o l L )4 5 士0 14 7 土0 2+ f G ( m m o l L )1 8 + 0 11 7 士0 2H D I 。( m m o l L 11 3 士0
10、0 31 4 士0 0 3L D L ( m m o l U2 4 5 士0 42 6 1 土0 7# 取自然对数( 1 n )四、V D R 基因变异与2 型糖尿病的关系用单因素非条件L o g i s t i c 回归分析研究V D R 基因变异对2 型糖尿病友炳的影响。V D R 基因等位基因f 与2 型糖尿病呈显著正相关，P = - 0 o l ，O R 值为2 1 2 6 ，O R 9 5 C I ：1 1 9 4 3 7 8 。V D R 基因等位基因F 与2 型糖尿病呈显著负相关，P = 0 0 4 5 ，O R 值为o 3 7 8 ，O R 9 5 C I ：0 1 4 7 0
11、 9 7 7 。结果提示：等位基因f是2 型糖尿病的易感基因，而等位基因F 对2 型糖尿病具有保护作用。南京_ _ 【i 科人学坝十学位论文讨论维生素D 主要通过其活性形式l ，2 5 一( O H ) 2 D 3 ( 骨化三醇) 发挥其生物学作用。维生素D 对胰岛具有保护作用，长期接受高剂量骨化三醇注射的非肥胖糖尿病( N O D ) 鼠胰岛炎的发生率非常低，而且没有明显的副作用。进一步研究发现，维生素D 是维持正常的胰岛素分泌和糖耐量所必需的物质。缺乏维生素D 会引起胰岛素分泌功能受损，但受损的胰岛素分泌功能可通过服用骨化三醇得到恢复I H l 。人维生素D 受体( V D R ) 基因位
12、于1 2 q 1 3 ，由9 个外显子和8 个内含子组成，存在多个限制性内切酶酶切位点，其中常见的是：B s m I 、A p a l 、T a q I和F o k l4 种，依次位于第8 内含子、第9 外显子和转录起始位点。一般用b 、a 、t 、f 表示存在这4 种内切酶的多态位点，用B 、A 、T 、F 表示缺乏这4 种内切酶的多态性位点。近年来关于维生素D 受体基因与糖尿病之间关系的研究已经取得一定进展。M c D e r r n o t t 【1 5 】等对3 个父母一方或双方均患l 型糖尿病、其后代亦患1 型糖尿病的南印度家庭的研究发现，这些家庭的后代V D R 等位基因中的B s
13、 m I 多态性位点有过度表达。对V D R 基因多态性对胰岛素分泌关系的研究发现【”】，A p a I 多态性位点与胰岛素分泌显著相关，胰岛素分泌指数以O G T T 血糖值及胰岛素值计算( 3 0 m i n 胰岛素一基础胰岛素) ( 3 0 m i n 血糖值一基础血糖值1 ，结果显示胰岛素分泌与基因缺失有关，a a 基因型胰岛素分泌指数最低( 6 8 5 ) ，A A 基因型最高( 1 4 6 ，8 ) ，A a 居中( 9 7 2 ) 。C h i u l l 6 1 等对4 9名健康的高加索人进行O G T T ，结果发现V D R F o k I 多态性与胰岛素的敏感性有关，但是
14、对胰岛p 细胞功能无影响。F o k I 位点是近两年来研究的新热点。本试验研究结果显示：V D R 基因F o kI 酶切位点各基因型在2 型糖尿病组和正常对照组中的分布差异具有显著统计学意义( x2 = 9 9 9 3 ，P = 0 0 0 7 ) 。两组间等位基因频率总体分布有显著性差异( x2 = 7 6 9 8 ，P = o 0 0 6 ) 。D M 组等位基因f 和基因型f r 频率明显高于N 组，等位基因f 与2 型糖尿病呈明显正关联( R R = 2 0 9 ，P 0 0 5 ) 。健康对南京医科人学砸1 学似沦殳照组、正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组间V D R
15、 基因型频率分布具有显著性差异( x2 = 2 1 1 3 7 ，P = o ，0 0 2 ) ；V D R 等位基因频率分布具有显著性差异( x23 6 6 9 2 4 ，P O 0 5 ) 。尿白蛋白排泄率糖尿病模型组和维生素D 3 治疗组与正常对照组均有显著差异( P O 0 5 ) ；8 周时糖尿病模型组和维生素D 3 治疗组间有显著性差异( P O 0 5 ) 。见表2 3 3 ，图2 3 2 、图2 - 3 3表2 - 3 3 各纽大鼠F N ，L N 表达比较( A S )注：与N C 组比较与D C 组比较3 P 6 0 岁= 27 年= 2 阳性= 0 ；阴 生= 1阳性=
16、O ：阴性= 12 7k g m 2 = 21 0 = 21 6 0 m m H g = 29 5 m m H g = 21 0 m m o l L = 212 m m p l L = 22 5 m l U L = 27 5 m i U I 。= 24 0 0 p m o l L - 21 5 0 0 p m o l L = 26 0 r e t o o l L = 2J 8 m m o l L = 21 6 m m o l L = 23 0 m m o l L2 不合A M 等位基因1 者= O ；舍A M 等住基因l 者= 1 不含A M 等位基因2 者= O ；含A M 等位基因2 者= l 不合
