亚硝酸盐含量的测定

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1、实习六食品中亚硝酸盐含量的测定一、目的熟悉食品中亚硝酸盐含量的卫生标淮，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。二、测定方法：亚硝酸盐测定格里斯试剂比色法1、原理： 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N1萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。2、试剂： 实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。氯化铵缓冲液： 1L 容量瓶中加入500m1 水，准确加人20.0ml 盐酸，振荡混匀，准确加入50mI 氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.69.7。硫酸锌溶液（ 0.42mol/L ) ：称取 120g 硫酸锌

2、(ZnS04 7H2O) ，用水溶解，并稀释至1000m1。氢氧化钠溶液 (20g/L) ：称取 20g 氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。对氨基苯磺酸溶液：称取10g 对氨基苯磺酸，溶于700m1 水和 300m1 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。N1萘基乙二胺溶液 (1g/L) ：称取 0.1g N1萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至l00ml ，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。显色剂：临用前将N1萘基乙二胺溶液 (1g/L) 和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。亚硝酸钠标淮溶液：准确称取250.0mg 于硅胶干燥器中干燥24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入500m1容量瓶中，加l0

3、0ml 氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4避光保存。此溶液每毫升相当于500 g的亚硝酸钠。亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00m1，置于 100m1 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0 g 亚硝酸钠。3、仪器小型粉碎机。分光光度计。4、操作方法样品处理：称取约10.00g (粮食取 5g) 经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70m1 水和 12m1 氢氧化钠溶液 (20g/L) ，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L) 调样品 pH 8，定量转移至200m1 容量瓶中加10ml 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加25ml 氢氧化钠，混匀。置60水浴

4、中加热10min ，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20m1，收集滤液备用。测定：亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0m1 亚硝酸钠标准使用液(相当于 0，2.5，5，10，15，20，25 g 亚硝酸钠 )，分别置于 25m1 带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5m1氯化铵缓冲液， 加 2.5m160%乙酸后立即加入5.0ml 显色剂， 加水至刻度， 混匀，在暗处静置25min，用 lcm比色杯 (灵敏度低时可换2cm 比色杯 )，以零管调节零点，于波长550nm 处测吸光度，绘制标准曲线。低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0m1 亚硝酸钠标准使用液 (相当于 0，2，4，6，8，10g 亚硝酸钠 )。样品测定：吸取10.0m1 上述滤液 (样品处理滤液 )于 25ml 带塞比色管中，自上述“ 于标准管中分别加入4.5m1 氯化铵缓冲液 ” 起依法操作。同时做试剂空白。5、计算X1= (1) 式中 X1：样品中亚硝酸盐的含量，mgkg；m1：样品质量， g；m2：测定用样液中亚硝酸盐的质量， g；V1：样品处理液总体积，m1；V2：测定用样液体积，m1。结果的表述：报告算术均值的二位有效数。允许差：相对相差10% 。