《降血脂溶栓保健啤酒的初步研究（学位论文-工学）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《降血脂溶栓保健啤酒的初步研究（学位论文-工学）（37页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分 类 号 Q815 学 校 代 码 10129U D C 663 学 号 09210051降 血 脂 溶 栓 保 健 啤 酒 的 初 步 研 究Primary Study on Hypolipidemic Thrombolysis care Beer申 请 人 ： 罗 剑 辉学 科 门 类 ： 工 学学 科 专 业 ： 发 酵 工 程研 究 方 向 ： 发 酵 工 程 技 术 与 应 用指 导 教 师 ： 段 开 红 教 授论 文 提 交 日 期 ： 二 一 二 年 六 月摘 要本 实 验 先 对 含 连 有 纤 溶 酶 基 因 的 分 泌 型 表 达 载 体 pPIC9K 的 大 肠 杆
2、菌 DH5 活 化后，提取质粒，并将其转入酿酒酵母菌中，得到一株含有纤溶酶基因的酿酒酵母菌，并 对 外 源 基 因 的 表 达 和 稳 定 性 做 了 分 析 。 同 时 对 重 组 酿 酒 酵 母 菌 的 发 酵 特 性 做 了 分析 ， 主 要 比 较 了 重 组 酿 酒 酵 母 菌 与 原 始 酿 酒 酵 母 菌 在 接 种 量 、 温 度 、 pH 上 的 选 择 和酿 酒 酵 母 菌 的 酒 精 耐 受 性 、 热 死 灭 温 度 、 凝 聚 性 、 发 酵 力 的 变 化 ， 分 析 转 入 了 纤 溶酶 基 因 对 酿 酒 酵 母 菌 的 发 酵 能 力 是 否 产 生 影 响
3、。 最 后 用 重 组 酿 酒 酵 母 菌 做 啤 酒 发 酵试 验 ， 检 测 主 发 酵 结 束 后 发 酵 液 中 的 纤 溶 酶 含 量 ， 为 生 产 具 有 降 血 脂 溶 栓 功 能 的 保健 啤 酒 提 供 理 论 支 持 和 依 据 。研 究 结 果 表 明 ， 通 过 PCR 检 测 证 实 纤 溶 酶 基 因 已 在 酿 酒 酵 母 菌 基 因 组 内 整 合 ，通 过 纤 溶 酶 活 性 检 测 进 一 步 证 实 纤 溶 酶 基 因 可 在 酿 酒 酵 母 菌 体 内 分 泌 和 表 达 。 在 没有 选 择 压 力 的 情 况 下 ， 纤 溶 酶 基 因 的 遗 传
4、 稳 定 性 很 好 ， 5 代 内 都 能 稳 定 传 代 。通 过 比 较 重 组 酿 酒 酵 母 菌 与 原 始 酿 酒 酵 母 菌 在 接 种 量 、 温 度 、 pH 上 的 选 择 ， 得到 的 结 果 ： 在 接 种 量 和 pH 值 的 选 择 上 没 有 很 大 的 差 异 ， 在 接 种 量 为 1 ， pH 值 为4.5 时，能达到最好的效果；在发酵温度的选择上存在差异，分别在 30 和 28 能达 到 最 好 的 效 果 。 由 此 看 出 ， 转 入 了 纤 溶 酶 基 因 对 酿 酒 酵 母 菌 在 接 种 量 、 温 度 、 pH上 的 选 择 差 异 不 大 。
5、通 过 比 较 重 组 酿 酒 酵 母 菌 与 原 始 酿 酒 酵 母 菌 的 酒 精 耐 受 性 、 热 死 灭 温 度 、 凝 聚性、发酵力，得到的结果：酒精耐受性实验中耐酒精能力均为 12；热死灭温度实验 中 两 株 菌 的 热 死 灭 温 度 均 为 60 ； 凝 聚 性 试 验 中 ， 本 斯 值 分 别 为 1.4 和 1.3， 凝聚 性 适 中 ； 发 酵 力 实 验 中 两 株 菌 的 发 酵 速 率 、 真 正 发 酵 度 、 外 观 发 酵 度 基 本 相 同 。由 此 看 出 ， 两 株 菌 的 发 酵 性 能 基 本 一 致 ， 转 入 了 纤 溶 酶 基 因 对 酿
6、酒 酵 母 菌 的 发 酵 性能 影 响 不 大 。啤 酒 主 发 酵 完 成 后 ， 发 酵 液 经 处 理 后 在 波 长 为 595nm 处 测 吸 光 值 ， 带 入 标 准 蛋白 曲 线 中 得 到 啤 酒 发 酵 液 中 纤 溶 酶 的 含 量 为 125.14U/ml。关 键 词 ： 保 健 啤 酒 ； 酿 酒 酵 母 菌 ； 纤 溶 酶 基 因 ； 发 酵 特 性 ； 表 达Primary Study on Hypolipidemic thrombolysis Care beerAbstractIn this study, the first containing even s
7、ecreted plasminogen gene expression thevector pPIC9K activation of E. coli DH5， then plasmid and transferred to S. cerevisiae,get one containing the plasminogen gene of Saccharomyces cerevisiaebacteria, andexogenous gene expression and stability analysis. At the same time we analysis thefermentation
8、 characteristics of recombinant Saccharomyces cerevisiae， and the maincompared the choice of recombinant Saccharomyces cerevisiae with the originalSaccharomyces cerevisiae in the inoculum size, temperature, pH and ethanol tolerance，heatto Simie temperature, cohesion, fermentation changes of Saccharo
9、myces cerevisiae,analysis the transferred to the fermentation capacity of the plasminogen gene ofSaccharomyces cerevisiae is an impact. Finally, use the recombinant Saccharomycesyeast make the beer fermentation test, detection the plasminogen content in thefermentation broth after the end of the mai
10、n fermentation， to provide theoretical supportand the basis for the production of lipid-lowering the thrombolysis function of healthbeer.The results show that the plasminogen gene has been integrated in the S. cerevisiaegenome, confirmed by PCR， through the detection of plasmin activity has been fur
11、therconfirmed the plasminogen gene in Saccharomyces cerevisiae body endocrine andexpression. In the case of no selection pressure, genetic stability of the plasminogen geneis well,and can be stable in the five generations of passage.By compared the the choice of inoculum size, temperature, pH in the
12、 recombinantSaccharomyces cerevisiae comparison with the original S. cerevisiae， we can get results：there is no great difference in the choice of inoculum and pH， we can achieve the bestresults with the 1% inoculum and pH 4.5； there are differences in the choice of thefermentation temperature， we ca
13、n achieve the best results， Respectively in 28 and 30 .This shows that there is no great difference in the choice of inoculum size, temperature,pH to transferred to the plasminogen gene on the Saccharomyces cerevisiae.By comparison to the alcohol tolerance, hot Simie temperature, cohesive,fermenting
14、 power of the recombinant Saccharomyces cerevisiae with the originalSaccharomyces cerevisiae， we can get results： the Tolerance to Ethanol was 12% in thealcohol tolerance experiments； the hot Simie temperature of the two bacteria were 60in the hot Simie temperature experiment； the Rubens values were
15、 1.4 and 1.3 in thecoherence test， and the cohesion is moderate； the fermentation rate， the real degree offermentation and the appearance of the degree of fermentation of the two bacteriabasically the same in the fermenting power experiments. This shows that thefermentation performance of the two ba
16、cteria are basically the same, and transferred tothe plasminogen gene of Saccharomyces cerevisiae fermentation performance has littleeffect.After the beer main fermentation is complete， after The fermentation broth oftreatment Measure the Absorbance at the wavelength 595nm， then into the curve ofstandard protein， we can get the content of plasminogen in the beer fermentation broth as125.14U/ml.Key words： Health beer；Saccharomyces cerevisiae；Plasmin
