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1、紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含量紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含量一、实验目的 1.进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习 UV2550 的操作。 2.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 二、实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防 腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品 卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，其使用量一般在 0.1%左右。 苯甲酸具有芳香结构，在波长 225nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带
2、。根据苯甲 酸（钠）在 225nm 处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的 含量。 三、仪器和试剂 1.紫外可见分光光度计 UV2550（日本岛津） ，1.0cm 石英比色皿，50ml 容量瓶。 2.NaOH 溶液（0.1mol/L） 3.苯甲酸钠标准溶液的配制 (1) 苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠 1.000g（105干燥 处理 2h）于 1000mL 容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存 一段时间。 (2) 苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液 10.00mL 于 100mL 容量
3、瓶 中，加入蒸馏水稀释定容。 (3) 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液 1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL 和 5.00mL 于 5 个 50mL 容量瓶中，各加入 0.1mol/LNaOH 溶液 1.00mL 后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为 2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L 和 10.0mg/L 的苯甲酸钠系列标准溶液。 4.市售饮料的配制 准确移取市售饮料 0.5ml 于 50mL 容量瓶中，用超声脱气 5min 驱赶二氧化碳后，加入 0.1mol/LNaOH 溶液 1.00mL，用蒸馏水稀释定容。 5.蒸馏水 四、
4、实验步骤 1. 开机 (1) 打开计算机，打印机。 (2) 打开主机开关，双击软件图标 UVProbe，点击“Connect”与仪器联机，仪器开始自检， 通过后按“OK” 。 2. 吸收光谱的测定 (1) 选择“Window”“Spectrum” ，打开光谱模块。 (2) 选择“Edit”“Method” ，设定波长范围（从大到小） ，扫描速度（Fast） ，采样间隔 （1.0） ，扫描方式（Single） ，Instrument Parameters（Absorbence） 。 (3) 样品池和空白池均放上 2.5mL 缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Baseline” ，启动基 线校正，点
5、击确定。 注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。(4) 参比池中加入缓冲溶液，样品池中加入苯甲酸钠标准液，点击按键条中的“Start” ， 测定紫外可见吸收光谱。 （5）扫描完成后，在弹出的新数据采集对话框中输入样品名，点击确定。 （6）图谱保存：选择“File” “Save as” ，在对话框顶部的保存位置中选择适当的路 径，输入文件名，保存类型中选择 Spc，点击“保存” 。 （7）最大吸收峰：选择“Operations” “Peak Pick” ，找到最大吸收峰对应的波长。 3. 标准曲线法测定待测样品的浓度 (1) 选择“Window”“Photo
6、metric” ，打开测量光度模块。 (2) 选择“Edit”“Method” ，设置合适的波长（“Wavelength” ） ，如 225nm，点击 “Add” ，点击选定的 Wavelength，根据提示，点击 next，next，方法，设定保存路径， 点击“保存” 。 (3) 样品池和空白池均放上 2.5mL 缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Cell blank” ，进行 背景校正。 (4) 标准曲线：在 Standard table 框里输入 Sample ID（从 1 开始） ，标准溶液的浓度 “Concentration” ，输入完毕，将光标移到 WL225 下。在样品池中由稀到浓
7、，依次放 入系列标准溶液，点击按键条中的“Read std” ，依次读出标准系列溶液的吸光度值。 （浓度为 0 的空白液可先按“自动归零”后再读数） (5) 点击“Graph” “Standard Curve Statistics” “Equation” ， “Correlation Coefficient” ， 得到标准曲线的方程和相关系数。 (6) 同样，样品池中放入待测溶液，在 Sample table 框里框里输入 Sample ID，点击按键 条中的“Read std” ，读出待测溶液的浓度和对应的吸光度值。 4. 关机 点击菜单中“Instrument” “configure” “
8、maintenance” ，进入界面后点击 “D2” 、 “W1” ，关闭氘灯和钨灯，再点击按键条中 “Disconnect” ，然后关仪器软件，最后 关电脑和仪器电源。 五、数据处理 1.苯甲酸钠紫外-可见吸收光谱的测定，并找出最大吸收峰波长。 2.苯甲酸钠标准曲线的测定，以及曲线方程、相关系数的测定。 3.样品中苯甲酸钠含量的测定。 六、注意事项 1.试样和标准工作曲线的实验条件应完全一致。 2.不同牌号的饮料中苯甲酸钠含量不同，移取时样品量可酌情增减。 七、思考题 1.紫外可见分光光度计由哪些部件构成？各有什么作用？ 2.本实验为什么要用石英比色皿？为什么不能用玻璃比色皿？ 3.苯甲酸的紫外光谱中有哪些吸收峰？各自对应哪些吸收带？由哪些跃迁引起？
