《用过氧化物酶同工酶和SSR标记鉴定中油杂12种子纯度》由会员分享，可在线阅读，更多相关《用过氧化物酶同工酶和SSR标记鉴定中油杂12种子纯度（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、农业生物技术学报，2010年，第18卷，第4期，第815821页 010，8，815术改进 过氧化物酶同工酶和德圣李云昌陈玉峰李英德徐育松胡琼 中国农业科学院油料作物研究所国家油料作物改良中心农业部油料作物生物学重点开放实验室，武汉430062 通讯作者，whhb 要杂交种的纯度鉴定是油菜种子生产的重要环节。对甘蓝型油菜( 交品种中油杂 12及其父母本的过氧化物酶同工酶分析结果显示，父本和杂种F 比母本多一条迁移率 ，)为041的条带， 该特征条带可用来进行粗放杂种纯度鉴定，但是难以鉴定出父本杂株。选用173对本进行扩增，筛选出了6对扩增效果好的引物，其扩增条带清晰且亲本间的差异能够重复，其中
2、131和可分别扩增出父母本的特征条带。在同一反应体系中同时 加入现扩增产物带型是单独采用这两对引物分别扩增时产物带型的叠加。对于 混杂程度较高的种子，采用154引物组合可以在工作量不变的条件下提高检测外来花粉的灵敏度， 从而更加准确地鉴定中油杂12的种子纯度。对100份大田制种的中油杂12单株154进行定结果完全一致，并且与田间鉴定结果非常接近。 关键词甘蓝型油菜，中油杂12，种子纯度，过氧化物酶同工酶， 2 i i u u 30062，whhb03969j6747968201004030 is in of OD)us 2 a j0 4 1 in o be to of or 73 SR 2to
3、 of no 052，131 154，l 13l+in as 1 3 l 1 54n of of 131十of 2 of ne NA 2 by 039696747968201004030 基金项目：本研究由国家高技术研究与发展计划(863)项目(007国家科技支撑项目(008农业 科技成果转化资金项目(008同资助 收稿日期：20090224 接受日期：2009 0422 农业生物技术学报 816 。131，131+he of to of ， 2，SR 物品种鉴定和纯度分析是农业生产、作物育 种和种子检验的重要内容，也是保护作物新品种、防 止假冒伪劣品种进入市场、维护农民利益的重要手 段。油菜
4、是常异花授粉作物，制种过程中易受外来花 粉的影响。因此在油菜杂交种应用于生产之前，其纯 度鉴定工作尤为重要。 目前作物品种鉴定和纯度分析的检验技术，已 经从传统的形态学方法发展到了分子水平。田问种 植鉴定结果可靠，但鉴定周期较长；常用的酯酶同工 酶对大多数品种能保证纯度的鉴定2005)，但对少数品种特别是杂种酶谱偏母本型的品 种不能准确鉴定，需采用各 种种子纯度检测，具有很大的优越性。首先，的引物是根据重复序列两端相对保守的单拷贝序 列设计，其扩增产物稳定，建立的指纹图谱可靠。其 次，显性标记提供更多的信 息，而且在种内的栽 培品种之间获得多态性标记位点，尤其适用于杂交 种的纯度鉴定(梅德圣等
5、，2006)。 中油杂12是以陕2质供体，通过复合杂交、分子标记预测杂种优势等 方法培育的一个综合性状优良的甘蓝型优质高效杂 交油菜新品种，在20032005年湖北省油菜区试中， 平均亩产20168 对照中双9号增产1503， 是湖北省油菜品种区试有史以来首个在区试中亩产 超过200 20042006年国家油 菜区试(长江中游)中，平均亩产17425 对照中 油杂2号增产562，是国家油菜区试中首个比对 照中油杂2号增产5以上的油菜新品种(李云昌 等，2007)。2005年通过湖北省审定，2006年通过国 家(长江中游)审定，适合在湖北、湖南、江西等省种 植，应用前景广阔。 本实验探索用过氧化
6、物酶同工酶和油菜杂交种中油杂12纯度的方法，并与大田种植 鉴定的结果相比较，为建立准确快速、简单高效的杂 交种纯度鉴定方法提供参考，并为中油杂12的安全 生产及其产量优势的充分发挥提供保障。 1结果与分析 11过氧化物酶同工酶鉴定 由图1中的过氧化物酶同工酶酶谱可见，中油 杂1的特异条带，母 本6098父本F 均有5条较清晰的酶带。用不育系6098系 母本和父本、杂种F 之问差异的稳定性进行验证，结 果10个6098致，恢复系同单株间也表现一致，说明采用过氧化物酶同工 酶能够准确地鉴定出由不育系微量花粉导致的不育 假杂种。由于不同油菜品种的过氧化物酶同工酶酶 谱间存在一定的差异(李枸，1993
7、)，因此采用过氧化 物酶同工酶也可以将样品中混杂的其它品种的种子 鉴定出来。2008年7月对中油杂12大田制杂交种进 行了鉴定，200粒种子中有16粒与不育系6098谱表现一致，没有发现其它类型的杂株(图2)，因 此该种子样品的纯度为92。由于中油杂12杂种F 和父本的过氧化物酶同工酶酶谱一致，所以该方法 不能有效区分父本和杂种F 。 12 173对除在亲本间 明显无差异的引物以及扩增条带模糊、特异性不强、 有较多非特异扩增的引物后，选择24对效果较好的 引物用亲本6098 选出6对亲本问差异稳定且扩增条带清晰的引物，作 为鉴定中油杂12种子纯度的候选引物，这些引物的 编号分别为078、130、 1)，在亲本6098某一引物在杂种F 中能否同时扩增出父母本各 自的特征带，是决定该引物是否适合用来进行纯度 鉴定的关键。因此，选用中油杂12手工杂交种、不育 系6098别 用前面筛选出的6对引物进行株 有1个单株没有表现出父母本的互补条带，而131和株中 都能够同时出现父母本的特征条带，因此这4对引 用过氧化物酶同 2
