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1、1 实验室操作手册（性病分册）2 生殖器标本取材方法及注意事项1.男性标本 : (1)如疑为急性淋病奈瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部 后,以碘伏或其它非粘膜刺激性消毒后,挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取,立即 送检,或以专用的细拭子插入尿道口12cm,旋转采取 .(2)如疑为前列腺炎、精囊 炎慢性淋病奈瑟菌感染应由医师按摩前列腺,以无菌手续自尿道口采取前列腺 液送检 . 2.女性标本 :(1)成年妇女自宫颈采取标本,应在扩阴器的支下,选取有炎症或分 泌物部位 ,先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物,再用另一拭子取分泌物送检.如做 厌氧或真菌培养应另外采取标本.如未成年幼女疑患性传播疾病时,不应
2、使用扩 阴器,应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检. 对不合格标本的处理1.申请单项目与标本不符 . 2.申请单姓名、科别、床号和标本的档签不符.3.标本已有明显的污染迹象( 如开塞 ).4.送检标本不符合上述取材要求.5.标本过少或已明显干燥 .6.申请单项目的项目填写不符合要求或无医师签字. 7.送检标本的时间已明显拖延. 当标本符合以上任何一条都作为不合格样本,必须重新采取样品且核对标本无误后才可以进行下一步实验.淋病的涂片检查原理急性淋菌性尿道炎病人常有大量黄色分泌物, 在有些脓细胞内可有许多淋球菌, 淋球菌革兰染色革兰阴性双球茵. 检查分泌物涂片中有无典型细胞内革兰阴性双球茵 , 可
3、作初步诊断淋病的依据 . 试剂采用自配革兰氏染液 , 试剂见试剂配制附录.3 方法1.取材: 男性: 拭子蘸取无菌生理盐水 , 插入尿道 2-3cm,轻轻转动 , 停留数. 女性 : 宫颈拭子蘸取无菌生理盐水先将宫颈口的分泌物擦去, 拭子插入宫颈内政 -1.5cm, 转动并停留驾齐驱20-30 秒, 取出涂片 . 2. 涂片后 , 待自然干燥后火焰固定 , 革兰染色 , 油镜镜检 . 结果部分白细胞的胞浆中有圆形或卵圆形、成双排列的革兰阴性双球茵, 两茵接触面扁平或稍凹 , 茵体大小可有差异 . 菌体长约 0.7um,宽约 0.5um 注意事项1. 涂片时不要太用力 , 轻轻滚动 , 以免炎症
4、细胞浆内淋球菌因细胞破坏而溢出细 胞. 2. 涂片厚薄适宜 . 脱色时间应以涂片的厚薄而定, 过厚而脱色清足时, 革兰氏阴 性误染成阳性 . 3.固定涂片时 , 只要将涂片迅速通过火焰二三次, 避免加热过度使细胞变形. 4. 报告结果时应注明细胞或细胞外发现革兰氏阴性双球菌. 临床意义细胞内革兰氏阴性双球菌为淋病患者的诊断标准. 男性淋菌性尿道炎检出敏感性和特异性在95% 以上 , 具有初步诊断的价值, 但女性患者由于其它杂菌的影响, 检出敏感性仅50%,且特异性较差 , 故世界卫生组织不推荐将涂片法用于女性淋病患者的诊断 . 同时也不推荐用于诊断淋菌性直肠和咽部感染. 衣原体 CC快速免疫测
5、定法原理本试验是将衣原体单克隆抗体的带色乳胶复合物吸附于滤纸上, 将滤纸夹 在二块塑料板中间. 若加入的标本为阳性, 则标本中的抗原与结合有乳胶的单 抗结合 , 复合物因毛细作用向前扩散移动至结果窗, 可被该处含有的未标记的 鼠抗衣原体单抗所捕捉, 在结果窗中出现一条黑线, 标本即为阳性 , 过剩的未结 合的带色乳胶标记的鼠抗衣原体单抗可移到质控窗, 与该处的兔抗鼠抗体结合, 显现一条黑线 . 试剂本试验采用立明试剂盒 . 试剂名称为 : 快速沙眼衣原体胶体金测定方法 4 1. 将试剂反应板和塑料管自冰箱取出置室温度30 分钟. 2. 加试剂 1 至塑料管刻度 (0.6ml),将取材拭子放入管
6、内 , 搅混 80+2水浴 10 分钟 12 分钟, 使细胞中衣原体的脂多糖释放出来. 取出后 , 沿管壁转动挤压 拭子并丢之 , 加盖后放室温中 5 分钟冷却 . 3. 将测拭板平放 , 加 5 滴提取液于检测窗 , 静置 15分钟 30 分钟后观察结果 . 4. 阳性对照试验 : 取试剂 2 加 5 滴于塑料管 , 再加试剂 1 至刻度 , 以下操作按 3 4 进行, 结果应出现阳性反应 . 结果应另取测试板进标本为阳性时, 结果窗中显示一条黑色线. 强阳性者黑线 色深, 出现时间快 , 出现隐约可见的黑线也判为阳性. 8520/ 质控窗显示一条黑线 , 表示标本试剂质量可靠 , 试验正确
7、 . 如 30 分 钟内, 未见黑线出现 , 应另取测试板进行试验 . 临床意义作衣原体诊断的参考. 结果阳性表示病人可能有衣原体感染, 但需要结合临床症状全面考虑 . 注意事项1. 标本中需要一定量抗原, 提取的抗原低于试验敏感性时可出现假阴性, 因此 , 每批试验应同时用阳性对照标本测试, 并在质控窗和结果窗均出现一条黑线. 2. 如本试验阴性而病人持续有症状则应作衣原体培养. 3. 本试验检测的是衣原体抗原, 因而不能区别是衣原体的感染还是携带者 , 也 不能区别衣原体的死活 , 不能作判愈试验 . 4. 不要混合不同的试剂和用具, 不要盖错瓶盖 . 5. 试剂中含有叠氮化钠, 它与铝铜
8、等金属可起反应引起爆炸, 应避免接触此 类金属器具 , 处理时可用大量水冲洗 , 6. 衣原体可多途径感染, 处理标本时要戴手套, 不要在实验室吃东西, 喝水和 抽烟. 支原体液体分离培养和鉴定法原理解脲支原体 (Uu)具有尿素酶 , 能分解尿素产氨 , 使含酚红指示剂 Uu液体培养 基 pH 值升高变碱性 , 液体颜色由黄变红 , 人型支原体 ( Mh) 具有精氨酸酶 , 能分解精氨酸产氨 , 使分解精氨酸产氨 , 使 含酚红指示剂的 Mh液体培养基 pH值升高变 , 液体颜色由黄变红 . 试剂本实验采用中山市天洋电子生物传感器有限公司生产的试剂盒. 名称为:Uu 和 Mh的分离和鉴定液体培
9、养基 . 方法5 1. 标本采集 :男性: 用棉拭子取尿道内口22.5cm处分泌物、前列腺或中段尿沉渣( 中段尿 10ml 2000T/min 离心 10 分钟). 女性: 取宫颈管内口12cm 处单层柱状上皮细胞 , 取样拭子不可 碰阴道壁 , 尿液不推荐 .2. 接种: 将标本洗入单一 Uu或 Mh 液体培养基 , 或用滤菌器过滤接种 . 3. 掊养: 置 37恒温箱孵育 1-3 天, 每日观察培养基颜色变化.结果液体培养基变红色 , 并清流澈可初步判断为Uu或 Mh 阳性. 注意事项1. 取材要准确 , 尤其女性宫颈拭子 , 要尽量多取标本 . 2. 采样时旋转拭子30 秒以上, 取含柱
10、状上皮细胞的样品. 3. 抽出拭子进避免与阴道壁接触. 4. 取材后应尽快接种 , 如果不能及时接种 , 应将标本放入1ml 运送保存液中冰箱保存 , 4 易失去活力 , 超过 48小时应放 -70冰箱保存 . 5. 若是细菌污染致液体颜色变化, 应及时过滤 ( 滤膜孔径 0.45um)后再培养观察是否有颜色变化或转种固体培养基掊养, 阴性结果应继续观察至第5 天. 临床意义支原体培养阳性 , 说明有支原体感染 , 如果患者有临床症状 , 但其它病原体检查阴性 , 则应考虑支原体引起致病的可能, 在部份正常人群中也可存在支原体.线索细胞检查- 湿片法 / 干片法【原理】细菌性阴道炎时阴道正常菌
11、群发生变化，乳酸杆菌减少或消失， 而阴道加特纳菌，厌氧菌等过度生长。 此外，加特纳菌和厌氧菌吸附在阴道鳞状上皮细胞表面，使细胞边缘模糊不清呈锯齿状，形成有特殊外观的线索细胞。对阴道分泌物作湿片和涂片革兰染色， 在显微镜下可观察线索细胞的有无和百分比多少，以及阴道菌群的变化情况。【试剂】6 本实验采用自配革兰氏染色液，试剂见试剂配制附录。【方法】1湿片法：在载玻片上加一滴生理盐水，将阴道分泌物与生理盐水混合成悬液，加上盖玻片后，在高倍（400 倍）镜下检查。2干片法：取阴道分泌物，涂片，作革兰染色，油镜下检查。【结果】线索细胞为阴道鳞状上皮细胞的表面覆盖着许多球杆菌（主要是加特纳菌，有时合并有厌
12、氧菌，革兰染色不稳定） ，使细胞呈斑点状、颗粒状外观，细胞边缘模糊不清呈锯齿状。【临床意义】当线索细胞占全部上皮细胞的20%R 以上时一般认为可诊断BV 。湿片法诊断BV的敏感性在 80% 以上，特异性在 90% 以上。革兰染色镜检观察阴道上皮细胞中线索细胞的敏感性和特异性高于湿片法，分别为89% 和 93% 。阴道毛滴虫显微镱形态学检查- 湿片法【原理】阴道毛滴虫运动活泼, 具有旋转式的特有方式. 等渗盐水可保持阴道毛滴虫维持寄生于宿主时的形态和运动状态. 直接镜检 . 【试剂】本实验采用等渗盐水 . 【方法】7 将采集标的拭子放入含有少量等渗盐水的试管内, 混匀后吸取一滴于载玻片上或将采集
13、标本的拭子直接在滴有盐水的载玻片上. 尿液需 2000r/m 离心 15分钟,离心后取沉渣一滴于载玻片上. 盖上盖玻片 , 于 10X/10X 显微镜下观察 . 【结果】等渗盐水湿片中若有阴道毛滴虫, 则镱下可见梨形或水滴状, 无色透明或淡蓝色虫体 , 大小约 10-30um 5-15um,稍大于白细胞 . 虫体借助于鞭毛和波动膜作螺旋式跳动 , 运动活泼 . 有时可见到保护形的滋养体, 其形态为外围细胞质增厚,细胞质呈均匀、光润、透明。【注意事项】1. 女性取材时所用窥阴器, 只能用少量无菌等盐水湿润. 不可用润滑剂 , 因为一些润滑剂对阴道毛滴虫的活有形影响.2. 从取材到观察的时间间隔越
14、短越好, 否则易影响滴虫的活动性或虫体受到破坏使检查结果受到影响 .3. 注意标本的保温 , 尤其冬季气温较低 , 影响阴道毛滴虫的活力 .【临床意义】滴虫检查阳性 , 结合临床表现 , 即可做出初步诊断 , 应及时治疗 . 此法简便、快速，是门诊的常规检查方法。阴道毛滴虫显微镜形态学检查- 涂片染色法【原理】分泌物涂片作染色检查， 可以清楚地看到虫体形态和内部结构，还能观察到阴道的微生物相、清洁度和细胞组织相。【试剂】本实验采用自配革兰氏染色液，试剂见试剂配制附录。【方法】8 3涂片：将标本加少量生理盐水涂成薄片，置室温自然干燥。4固定：用酒精灯火焰固定或甲醇固定。5染色：革兰氏染色6油镜观
15、察结果。【结果】革兰氏染色时，滴虫易受涂片时挤压变形，可呈多形性，如梨形、圆形、长圆形、多角形等，大小差异较大，介于白细胞的2-3 倍至鳞状上皮细胞的1/2之间；虫体轮廓清楚，胞浆稍呈嗜酸性，疏松泡沫，有紫红色长圆形细胞核，多在偏心位置，并偶见1-4 条鞭毛，而滴虫的波动膜及轴柱难于着色，不易见。【注意事项】4. 涂片染色受多种因素影响，上述虫体典型结构并非完全可见。5. 涂片过程、染色过程的挤压等因素，可造成虫体大小悬殊，形态多形性，但是长圆形的细胞核，疏松且有空泡的细胞质，及偶可见到的4 根前鞭毛，具有一定的特征性，不难辩认。.【临床意义】滴虫检查阳性 , 结合临床表现 , 即可做出初步诊
16、断 , 有利于鉴定，并可长时间保存和利于教学。念珠菌的直接检查一湿片法【原理】10%KOH可保持念珠菌在组织内的形态，并使菌丝及孢子具淡绿色折光，如观察到孢子，芽生孢子及假菌丝，即可作为诊断依据。 【试剂】本实验采用自配10%KOH 液，试剂见试剂配制附录。 【方法】加 1 滴 10%KOH 于载玻片上，将采集标本直接涂在KOH溶液中，盖上盖玻片，置酒精灯火焰加热，直接用10X或 40X镜检。 【结果】 念珠菌阳性者镜下可见略带淡绿色折光的假菌丝和成群的卵圆形孢子，孢子直径9 35um.假菌丝节间有明显的狭窄部，偶可见仅有孢子而无菌丝，可能其它酵母感染，应报告为“芽生孢子阳性” 。皮屑直接镜检可见菌丝和孢子，报告应写作“菌丝、孢子阳性”。 【注意事项】6.采集标本方法要正确，标本量要多。7.念珠菌性阴道炎、龟头炎的病人，仅有分泌物或伪膜而无鳞屑的病人，可直接用等渗盐水涂片作检查，这样可以直接用玻片上的标本做真菌培养。8.念珠菌
