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1、G M P 文件湖北* * * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题目微生物计数培养基 适用性试验验证方案文件编号SOP-YZ-6303 制 订 人制定日期年 月 日版 本 号B 审 核 人审核日期年 月 日页码16/9 批 准 人批准日期年 月 日修改状态 0颁发部门质量部生效日期年 月 日分发份数分发部门质量部161. 概述: 培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。供试品微生物限度检查中所使用的培养基应进行适用性检查。2. 验证目的 ：本次验
2、证的目的是确认需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数检查用的胰酪大豆胨琼脂培养基、 胰酪大豆胨液体培养基、 沙氏葡萄糖琼脂培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用要求。3. 验证依据 ： 中国药典 2015 年版四部“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法” 、 “9203 药品微生物实验室质量管理指导原则” 。4. 验证项目 ：胰酪大豆胨琼脂培养基、 胰酪大豆胨液体培养基、 沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查。5. 适用范围 ：成品培养基、 由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。6. 验证周期 ：除另有规定外， 在实验室中， 若采用已验证的配制和灭菌程序制备培
3、养基且过程受控， 那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可以只进行一次。如果培养基的制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行适用性检查试验。7. 验证小组人员及职责：7.1验证小组人员: 小组人员职务姓 名签字所在部门职 务组 长质量部质量总监组 员质量控制实验室QC主任组 员质量控制实验室微生物 QC G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计数培养基 适用性试验验证方案页码17/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 177.2 验证人员职责及要求7.2.1 按验证方
4、案及相关文件实施验证。7.2.2 认真观察并做好验证原始记录。7.2.3 对实施验证的结果负责。7.3 验证中各部门的职责7.3.1 验证领导组职责7.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。7.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。7.3.1.3负责验证方案的批准工作。7.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。7.3.1.5负责验证报告的批准工作。7.3.2 验证项目小组职责7.3.2.1负责验证方案的起草工作。7.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。7.3.2.3负责验证方案的实施。7.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。7.3.2.5参与验证结果的评价工作。
5、7.3.3 质量部职责7.3.3.1负责公司验证日常管理工作。7.3.3.2负责验证方案的审核工作。7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。7.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。7.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计数培养基 适用性试验验证方案页码18/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 187.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。7.3
6、.3.7负责验证资料和报告的审核工作。7.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。8.合格标准：8.1 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；8.2 被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。9. 验证实施条件9.1 验证方案培训：在验证实施前，应对参与验证的人员进行验证方案以及与验证相关的文件进行培训，确保相关人员掌握了验证的相关要求与知识。9.2 微生物限度检测室：检验所使用的检测室应经过HVAC 系统确认，并符合要求。9.3 检验用水：验证过程使用的纯化水其制备系统应经过确认并符合要求，
7、纯化水质量应经过检验并符合中国药典2015 年版二部的要求。9.4 检验仪器设备：验证涉及的检验仪器（设备）与检验方法，应经过技术监督局校验合格或者公司确认 / 验证合格。9.5 验证菌种：验证所使用的菌种，其种类与传代次数应符合中国药典的相关要求。菌种情况见附件2: 菌种确认。10.验证过程10.1 菌液制备10.1.1 取经 30-35培养 18-24h 的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物1ml 加入 9ml0.9%无菌氯化钠溶液中， 10 倍递增稀释至 10-6-10-8，约为 100cfu/ml 的菌悬液备用。10.1.2 取经 20-25培养 2-3 天的白色念
8、珠菌、 黑曲霉的液体培养物1ml, 加入G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计数培养基 适用性试验验证方案页码19/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 199ml0.9%无菌氯化钠溶液中， 10 倍递增稀释至10-5-10-8，约为 100cfu/ml的菌悬液备用。10.2 实验操作10.2.1 胰酪大豆胨琼脂培养基： 取 11 个无菌平皿，分别接种上述铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、 白色念珠菌、黑曲霉各 2 皿，每皿接种 1ml 菌液（接种量 100
9、cfu ） ，另 1 平皿不接种菌作为空白对照， 倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固后于 3035倒置培养，培养时间不超过3 天（白色念珠菌、黑曲霉培养时间不超过 5 天） ，计数；被检培养基同法操作。10.2.2 胰酪大豆胨液体培养基： 新鲜配制 10ml/ 支的对照胰酪大豆胨液体培养基7 支，121灭菌 15min，备用。取 6 支，分别接种上述铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2 支，每支接种 1ml 菌液（接种量 100cfu ），另 1 支不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作。置3035培养，培养时间不超过3 天，分别观察结果。10.2.3 沙氏葡萄糖琼脂培养基：
10、取5 个无菌平皿，分别接种上述白色念珠菌、黑曲霉各 2 皿，每皿接种 1ml 菌液（接种量 100cfu ） ，另 1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于2025倒置培养培养，培养时间不超过 5 天，计数；被检培养基同法操作。10.3. 检查结果： 见附件 5：计数用培养基适用性检查结果11. 异常情况与偏差处理 ：当出现偏差时，应按偏差处理管理规程进行处理。12. 验证结果评定、结论与建议验证小组组长负责收集各项验证、试验记录，根据验证、 试验结果对验证效果进行综合评审，起草验证报告、做出验证结论。对验证结果的评审应包括以下内容：12.1 验证试验是否有遗漏
11、？12.2 验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计数培养基 适用性试验验证方案页码20/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 20准？12.3 验证记录是否完整？12.4 验证试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差的说明是否合理？是否需要进一步补充试验？13. 附件13.1 附件 1: 验证实施条件确认13.2 附件 2: 培养基确认13.3 附件 3: 菌种确认13.4 附件 4: 菌液浓度确定13.5 附
12、件 5: 计数用培养基适用性检查结果13.6 附件 6: 验证结果审批表附件 1： 设施设备验证确认设施设备名称验证报告编号验证结果实验室 HVAC 系统纯化水系统LDZX-40A型立式自控电热压力PSH-500A型生化培养箱303AS-2 型电热恒温隔水式培养SW-CJ-1C型双人净化工作台确认结论：确认人：确认日期：G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计数培养基 适用性试验验证方案页码21/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 21附件 2： 培养基确认培养基名称来
13、源批号有效期至胰酪大豆胨琼脂培养基胰酪大豆胨液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基胰酪大豆胨液体对照培养基沙氏葡萄糖琼脂对照培养基确认结论：确认人：确认日期：附件 3： 菌种确认培养基名称来源批号枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501 铜绿假单胞菌 CMCC(B)10 104 金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003 白色念珠菌 CMCC(F) 98 001 黑曲霉 CMCC(F) 98 003 确认结论：确认人：确认日期：G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计
14、数培养基 适用性试验验证方案页码22/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 22附件 4：菌液浓度确定10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 铜绿 假单 胞菌皿 1 皿 2 金黄 色葡 萄球 菌皿 1 皿 2 大肠 埃希菌皿 1 皿 2 枯草 芽孢杆菌皿 1 皿 2 白色 念珠菌皿 1 皿 2 白色 念珠菌（沙氏）皿 1 皿 2 黑曲 霉皿 1 皿 2 黑曲霉（沙氏）皿 1 皿 2 结论：根据要求，菌数要控制在每1ml 中含菌数在 100cfu ，因此，我们确定菌液制备：铜绿假单胞菌：稀释金黄色葡萄球菌 : 稀释大肠埃希菌：稀释枯草芽孢杆菌 : 稀释白色念珠菌（胰酪）:
15、 稀释白色念珠菌（沙氏）: 稀释黑曲霉（胰酪） ：稀释黑曲霉（沙氏） ：稀释检验人检验时间年月日- 年月日复核人复核时间年月日G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计数培养基 适用性试验验证方案页码23/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 23附件 5：计数用培养基适用性检查结果培养基验证菌株皿号被检培养基 cfu/ml 对照培养基 cfu/ml 比值 0.5-2 菌落形态 大小生长情况胰酪大豆胨琼脂培养基（3035， 3天）*白色念珠菌、黑曲霉 5 天铜绿假单胞菌1
16、2 平均金黄色葡萄球1 2 平均枯草芽孢杆菌1 2 平均白色念珠菌1 2 平均黑曲霉1 2 平均空白1 胰酪大豆胨液体培养基（3035， 3天）铜绿假单胞菌1 2 金黄色葡萄球1 2 枯草芽孢杆菌1 2 空白1 沙氏葡萄糖琼脂培养基（2328 ，72h ）白色念珠菌1 2 平均黑曲霉1 2 平均空白1 检验人检验时间年月日- 年月日复核人复核时间年月日G M P 文件湖北* * * * * 药业有限公司本文件为受控文件，仅限湖北* 药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝！题 目微生物计数培养基 适用性试验验证方案页码24/9编 号SOP-YZ-6303版本号B 修改状态0 24表 6: 验证结果审批表验证对象验证开始日期验证结束日期评审意见（在方框中打）1、验证实验有否遗漏 遗漏 未遗漏2、验证实施过程中对验证方案有无修改 有修改
