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1、项 目总蛋白（总蛋白（TP）方 法双缩脲终点法双缩脲终点法目目 录录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录 A: 参数1. 检测原理检测原理蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，肽键在碱性溶液中，能与铜离子作用产生紫红色络合物，在 540nm 有吸收峰，并与蛋白含量成正比。通过与同样处理的标准蛋白比较可
2、求出血清总蛋白含量。碱性蛋白质 + 铜离子 - 紫红色络合物2标本采集与处理标本采集与处理2.1 受检者的准备：受检者的准备：病人空腹 12h，不饮酒 24h 后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前 24 小时内不做剧烈运动。2.2 静脉采血：静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐 5 分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过 1
3、分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3 抗凝剂：抗凝剂：血浆使用 0.1mg/ml 肝素或 EDTANa2（1.8mg/mL）作为抗凝剂。2.4 标本处理：标本处理：血标本室温放置 30min45min 后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖 2-8保存。3试剂试剂3.1 试剂：试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司 TP 试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：标准液： 70g/L 总蛋白3.2 校准血清：校准血清：组 成浓 度氢氧化钠200mmol/L硫酸铜12mmol/L酒石酸钾钠64mmol/L碘化钾6.0mmol/L使用湖
4、南永和阳光科技有限责任公司提供的 40 项校准血清。校准频次：校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的 2SD 范围，需要全点定标。3.3 试剂与校准血清的稳定性：试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在 2-8至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存 30 天。试剂储存在 18-22稳定 28 天，试剂应避免污染。试剂颜色为浅兰色，当试剂变色，按照试剂失效处理。多项校准血清在 2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。试剂盒配备的水标准液在 2-8储存至标签所示失效日
5、期，开瓶后 2-8储存避免污染，可稳定 2 个月。4仪器仪器KONELAB 30 型号仪器。性能：波长 540nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到 0.001ABS 以上。5操作操作样品为血清或肝素/EDTA 抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录 A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6计算计算A测定C = C oA标准式中：c 测定总蛋白浓度，g/L；A测定 标本管吸光度；A标准 标准管吸光度；CO 校准血清总蛋白浓度，g/L；7操作性能操作性能7.1 精密度：精密度：批内 CV2.8%，批间 CV3.3%。7.2 准确度：准确度：检测结果的相对不准确度10%。7
6、.3 灵敏度：灵敏度：本试剂最低检测限为 0.7g/L。7.4 可报告范围：可报告范围：血清与试剂用量之比为 1:50 时，测定上限为 100.0g/L。7.5 特异性：特异性：测量值在给定值的 95%-105范围内。7.6 干扰：干扰：内源性干扰物为 Hb 1000mg/ml、TG 2000mg/ml、BIL 25mg/ml、VitC 300mg/ml 对测试结果无明显影响。8参考值参考值60.085.0g/L。9临床意义临床意义总蛋白测定试剂盒用于定量测定人体血清中总蛋白的含量。蛋白质是血清的主要成分，分白蛋白和球蛋白两类，在机体中具有重要的生理功能。蛋白质对于维持渗透压及保持水份平衡极为重要，并可维持血液的酸碱度。血清总蛋白增加常见于严重腹泻、呕吐、肾上腺皮质功能减退；营养不良、消耗增加和肝脏疾病等亦可导致总蛋白水平下降。附录附录 A: 参数参数
