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1、2010年第4期 植物检疫4 006，116(1)：4556 7 S。L Wof 002，49：1117 8赵文军，夏明星，陈红运，等番茄溃疡病菌植物检疫，2007，21(2)：7577 9夏明星，赵文军，马青，等番茄细菌性溃疡病菌的实时荧光测植物病理学报，2006，36(2)：152157 10 H，A999，147：687693 11 ，of of in 2008，104(3)：77686 12 ，of a CR in 007，146(12)：196201 13郑雪松，杨虹，韩文卿，等基因间隔序列(细菌分类鉴定 和种群分析中的应用应用与环境生物学报，2003，9(6)：678 684 14
2、 W， W， Aof in 989 黄瓜绿斑驳花叶病毒疫情处置效果的研究 陈笑瑜 张永江 李桂芬 马书英 胡银平 丁建云 (1北京市植物保护站北京100029；2中国检验检疫科学研究院；3北京平谷区植物保护站) of 100029，at in NA Tn NA be Tey T要通过对经焚烧深埋处理的取 土壤和病残植株样品的测了带有和土壤中病毒核酸的存在和其侵染活性。结果表明：经过通常检疫销毁的病植株残体和土壤可以检到 病毒已没有侵染活性。 关键词黄瓜绿斑驳花叶病毒；疫情处置；图分类号$4130 黄瓜绿斑驳花叶病毒(1935年以来，已被证实为葫芦科作物的重要病毒之一， 一旦发生往往会使受侵染作
3、物绝产，造成巨大的经 济损失。2005年以来，我国大陆已发生多起进口源 性针对北京引自日本横浜的网纹甜瓜植株样品 经经测呈阳性，确定为涉及的日光 收稿0091102，2010一9修回 一室和塑料大棚的网纹甜瓜播种4个月后的植株 全部拔除、焚烧、深埋的销毁处理，并对种植田块土 壤用消毒剂一检科3号处理。 为了评估销毁的实际效果，在发生疫情的地块 和深埋土坑中采集土壤和病残植株样本进行定样品是否被1材料与方法 11材料 样品的采集见(表1)，(1)取经焚烧和深埋 2010年第4期 植物检疫5病株残体作为待检样品；(2)在发生疫情的网纹 甜瓜种植大棚，耕土层经检科3号处理后次年春天 种植玉米，挖取该
4、棚内的土壤作为待检样品；(3)在 种植了网纹甜瓜的温室，耕土层经检科3号处理 后，客土种植黄瓜的土壤作待检样品。 表1样品采集 引物设计参照游 引物(于383402)：5 一a 下游引物(于887 906)：5 一产物大小 为524土壤样品核酸提取使用12样品中病毒的定性检测 土壤样品核酸提取根据试剂盒(说 明书操作。 5 95IL 22取；计算每微升样品中的00 gT2 L 0)，10 L 0)，70保温5冰上放置2加入41 L 40U1420上述反应产物2入20 ，061xL 对引物各05 ， 2U2O 134 ， 反应总体积201L，混匀后进行反应程序：944C 30s，55C 30，7
5、2 15个循环；728产物检测：10进行1琼脂糖凝胶电泳检测，在凝胶成像系统 上观察记录结果。 13样品中病毒侵染活性检测 经残体匀浆 样品与双蒸水按1：3混匀，42000r 记为A)。对照为提纯对提纯后取300y蒸水稀释到与样品上清液相同的浓度(标记为 B)。A、接种法接种到刚展开的两片子叶的葫芦(主上，以双蒸水接种植株作对照， 各接种5株，观察发生症状。 2结果与分析 21样品中病毒存在的检测 研究中共取样品79个，其中包括6份病株残 体样品，73份土壤样品(表2)。1琼脂糖凝胶电泳，阳性对照约524性对照无扩增 产物。第1批样品中7、43、44、47为阳性(图1)，其 余为阴性；第2批样
6、品(图2)均为阴性。 表2 号 样品 处置时间 检测结果 序号 样品 处置时间 检测结果 第1批样本 1 100个月 一 41 深埋土壤 1 2 深埋经焚烧 42 深埋土壤 1 3 深埋未经焚烧 1 43 深埋土壤 10个月 + 4 深埋未经焚烧 1 44 深埋病残体 1 5 广棚150个月 一 45 深埋土壤 1 6 广棚0350个月 一 46 深埋病残体 10个月 一 7 广棚100个月 + 47 深埋土壤 10个月 + 2010年第4期 植物检疫表2 序号 样品 处置时间 检测结果 序号 样品 处置时间 检测结果 8 广棚100个月 一 第2批样品 9 广棚50个月 一 1 广棚15cm
7、 10 广棚50个月 一 2 广棚15cm 11 广棚经焚烧土壤 3 广棚01个月 一 棚未经焚烧土壤 1 4 广棚151个月 一 13 广棚150个月 一 5 广棚3 14 马西个月 一 6 广棚30cm 西5个月 一 7 广棚301个月 一 16 马西20个月 一 8 广棚0cm 17 马西10个月 一 9 广棚1个月 一 18 马西0个月 一 棚O)303个月 一 19 马3棚20个月 一 棚O)203个月 一 2O 马3棚0个月 一 埋病残体 2l 马3棚5个月 一 埋病残体 13个月 一 22 马3棚10个月 一 棚153个月 一 23 马3棚30个月 一 15 广棚303个月 一 24 广棚5个月 一 棚3个月 一 25 广棚0个月 一 17 广棚病残土壤 13个月 一 26 广棚20个月 一 18 广棚303个月 一 27 广棚0个月 一 棚O)3个月 一 28 深埋土壤 9个月 一 20 广棚153个月 一 29 广棚20个月 一 2l 广棚03个月 一 30 广棚10个
