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1、植物病理学报 0(5)：530533(2010) ：t t _0 8研究简报8 j；_三 三号三 荆芥茎枯病病原菌的分离与鉴定 易茜茜，张争，丁万隆，魏建和 ，李勇 (中周医学科学院北京协平京100of ta YI xianI 00193，he on TS 章编号：04120914(201()054 荆芥(，别名香荆 芥，为唇形科一年生草本植物，全草皆可人药。荆 芥昧辛，性温，对感冒发热、头痛、咽痛、皮肤瘙痒、 吐血、崩漏、麻疹不透等均有疗效 。荆芥在我国 大部分地区均有分布，生长在江苏、浙江、江两、湖 北和湖南等省的称南荆芥，生长在河北省的称北荆 芥。荆芥为我国八大祁药之一，是常用大宗中 药
2、材。 目前，药用荆芥主要依赖人1二栽培，大面积种 植导致荆芥病害逐年加重。2007年，荆芥茎枯病 害在巾国医学科学院药月生。翌年，该病害再次发生，但为害程度明显加 重，并导致部分荆芥种质几乎绝收。2008年，该病 害在河北省安吲市荆芥栽培地也有大面积发生。 迄今，除极少量文献报道该病害在荆芥上发生外， 未见针对该病害的系统研究报道 为此，笔者对荆 芥茎枯病病原菌进行了分离和鉴定，为今后开展茎 枯病菌生物学研究及病害防治 作奠定了理论 基础。 1材料与方法 11病原菌分离与培养 2008年79月从中国医学科学院药用植物 所试验田以及河北省安国市荆芥栽培地采集茎枯 病害标样，通过喷雾保湿的方法从植
3、物病组织分离 病原菌，在12致病离获得的候选病原菌在5 恒温暗培养7 别接种至室内及田间生长的 健康荆芥茎基部。接种时先用无菌接种针轻轻划 出伤口，将少量候选病原菌菌丝接种至伤口部位， 用适量无菌水润湿。室内培养荆芥于25人工气 候箱中，光照l2 h黑暗12 度控制 在904田间种植的荆芥于雨季接种病原 菌，自然发病。接种5 收稿日期：200943927；修回日期：20102 基金项目：中央级公益性科研院所基本科研、【 务费专项资金项目(国家科技支撑计划项目(2006国家医药管理 局项日资助(2) 通讯作者：魏建和，研究员，主要从事药用植物遗传学与育种学研究；ac 勇，副研究员，主要从事药用植
4、物病害及其生物防治研究；10452899745，ac5期 易茜茜，等：荆芥茎枯病病原菌的分离与鉴定 13病原菌形态学观察 将候选病原菌接种到5恒温 暗培养7 微镜观察、记录病原菌孢子形态 及产孢结构的大小。 14病原茵取足量病原菌菌丝体，于液氮冷却状态下研 磨成粉末，用真菌基冈组取。用真菌 、和 一扩增病原菌基凶组 物由上海生工生物工程技术服务有限公 司合成。，包括：1025 p,L，5 )l L，模板30 L，引物或5)各1 L，25 u L)l L，75 L。在 6型扩增仪(美国)上完成，扩增程序为：94预变性5 4性l 222个 循环；最后72延伸5 扩增产物用15琼脂糖凝胶电泳检测，相
5、。扩增产物经1琼 脂糖凝胶电泳分离，在紫外灯照射下从凝胶巾切取 目的条带，经京汇天东 方生物技术有限公司)纯化后，由上海生工生物工 程技术服务有限公司测序。测得序列经据同 源性分析、病原菌形态学特征及致病性测定结果， 鉴定荆芥茎枯病病原菌归属。 2结果与分析 21 病害症状描述及病原菌分离结果 荆芥茎枯病害主要为害荆芥茎部。通常自茎 基部发病后，逐渐向上、环周扩展。有时，仅茎中部 发病而茎基部无症状。发病部位表皮呈黑褐色干 瘪，病部环周坏死(图1)。发病初期，荆芥茎部出 现许多褐色斑点，植株不萎蔫；发病中期，病斑逐渐 环周扩展，发病部位凹陷缢缩，发病部位以上植株 萎蔫、叶片呈失水状卷曲下垂；发
6、病后期，病部以上 植株枯萎、死亡。 of in a：b：on 22致病了验证候选病原菌的致病性，对田问(图2一 A)及室内(图2一B)种植的荆芥进行接种试验。研 究发现，接种3 种部位出现黑色病斑，且病 斑迅速环周扩展，病株叶片卷曲并逐渐萎蔫，病症 与田间自然发病植株相同，对照无发病症状。从发 病部位重新分离病原物经显微镜观察发现，再次分 离获得的菌系与原接种物在菌落、孢子形态等特征 上完全一致。 23病原菌鉴定 荆芥茎枯病病原菌在，菌丝浓密。显微观察发现，病菌菌丝粗细不均， 上多有瘤状突起(图3一A)。孢子囊(2540) m X(1520)i生于菌丝顶端，表面光滑，椭圆 形或近梨形，有明显突
7、出的脐(图3成熟的游 动孢子(24)I(12) m从孢子囊口排 出，圆形、近圆形或椭圆形，单孢(图3 植物病理学报 40卷 A of ：in ：in a，b：病原菌基因组别得到长度为l 171 录 号：l 138 录号： 扩增条带。通过与已知序列同源性比较发现，通用 引物酸序列与录号：源性最高，分别为1000和 999，图4为2条扩增序列与A 据同源性比较 结果、病原菌形态学特征及致病性测定结果，最终 确认荆芥茎枯病病原菌为P3结论与讨论 根据中药材规范化种植(养殖)技术指 南E 、中国药用植物栽培学 、药用植物病理 学。 等文献报道，荆芥茎枯病南 研究发现，分离的炯草疫霉菌尸康的荆芥植株仅3
8、 种部位即出现明显的 黑褐色病斑，随后病斑迅速扩展，接种5 蔫、死亡，这与荆芥茎枯病田间发病症状相同；尽 管镰刀菌F 900)，但接种试验结果表明，该菌虽能引起荆 芥叶片出现水浸状病斑以及根茎交界部位出现黑 色缢缩，但上述症状发展缓慢，且不导致植株死亡， 这与荆芥茎枯病害的田间发病规律存在明显差异， 推测镰刀菌并非荆芥黑胫病的病原菌，可能是荆芥 茎枯病病部组织上生长的腐生真菌。本文描述的 荆芥茎部病害症状与中国药用植物栽培学 中 对荆芥茎枯病害症状以及荆芥黑胫 病发病症状的描述均一致。我们在深人研究后认 为，荆芥黑胫病与荆芥茎枯病是对同一种病害的不 同称谓，笔者提议统一改称荆芥茎枯病，更正P B C ：a：b：5期 易茜茜，等：荆芥茎枯病病原菌的分离与鉴定 533 A B TS )，B)TS 考文献 1 2 3 ， Z，of M
