选择正确的缓冲液

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1、订货或客户支持，请参见封底1P186 选择正确的缓冲溶液 右表所示为常用缓冲溶液系统表。表中列 出一部分常用缓冲溶液及其相应的 pH 值。 其中，最常用的是磷酸盐。作为一种缓冲 溶液，当不同 pH 值的样品加入到其中时， 应当具有保持 pH 稳定的能力。同时，缓冲 溶液的缓冲容量为酸或碱的 pK 值上下浮动 100%。在 pH4 时，磷酸盐时一种弱的缓 冲溶液，如果一种酸性或碱性更强的样品 加入到其中，其 pH 值会迅速朝着它的一个 pKa 值变化。 通常，为保持流动相 pH 值的稳定， 流动相的 pH 值应控制在其 pKa1 的范围 之内。在 HPLC 中，常用的缓冲溶液浓度 为 10-10

2、0mM。具体的浓度取决于样品的尺 寸和性质，以及色谱柱的填料。通常，含 有极性基团的固定相，如 Hypersil Gold aQ，比传统的烷基填料更适于在稀的缓冲 溶液中使用。 若想控制流动相在一个低的 pH 值范 围(2-3)，通常会选择使用磷酸盐、或较强 的有机酸，如 TFA 或醋酸。若希望控制在 pH4-5，醋酸盐或柠檬酸盐而不是磷酸盐， 是通常考虑使用的试剂。 右图所示为 pH 值选择对分离的重要 性。如果不能正确缓冲，即使 pH 值微小变 化，由测量的误差、泵混合物或者流动相 吸收空气中的水所造成的变化，都会改变 方法。 当选择一种缓冲溶液和有机溶剂混合 时，应注意它们的互溶性，避免

3、出现混合 后缓冲盐结晶析出从而造成系统污染的情 况。 实验完成后，应及时冲洗仪器和色谱 柱，以防止缓冲盐沉积在系统或筛板上。常用缓冲溶液系统 缓冲 溶液pKapH 有效 缓冲范 围是否 适用 与 MS三氟 乙酸0.30是pK12.11.1-3.1否pK27.26.2-8.2否磷酸 盐pK312.311.3- 13.3否pK13.12.1-4.1否pK24.73.7-5.7否柠檬 酸盐pK35.44.4-6.4否甲酸 盐3.84.4-6.4是醋酸 盐4.83.8-5.8是三氨基甲烷盐 酸缓冲液8.37.3-9.3是氨9.28.2-10.2是硼酸 盐9.28.2-10.2否二乙 胺10.59.5-

4、11.5是pK16.4是碳酸 盐pK210.2是三乙 醇胺7.80是pH 的微小变化对微离子化混合物分离订货 号 流动 相 流量 检测订货或客户支持，请参见封底2的影响P187 LC/MS 缓冲溶液选择 缓冲溶液的选择很大程度上取决于所使用的仪器和分析物。理想地，LC/MS 系统中应 使用易挥发的缓冲溶液以避免形成污染 源极的沉积。无机酸、不挥发的缓冲溶液以及离子 对试剂应避免使用。常用的 LC/MS 缓冲溶液包括： 醋酸铵/甲酸盐/碳酸氢盐(C=N-1905000偶氮-N=N-285-4003-25苯184 202 25546,700 6,900 170羧基-COOH200-21050-70

5、酯-COOR20550醚-O-1851000烯-C=C-1908000酮C=O萘220 275 312112,000 175 5600硝酸盐-ONO227012-(C=C)-无环 -(C=C)3 C=C-C=C C=C-C=N C=C-C=O C=C-NO2210-230 260 219 220 210-250 300-35021,000 35,000 6,500 23,000 10,000-20,000 弱氰-CN -ONO160 220-230 300-4001000-2000 10硝基-NO2210强亚硝基-N=O302100肟-NOH1905000嘧啶174 195 25180,000

6、 6,000 1,700砜-SO2-180订货或客户支持，请参见封底6亚砜S-O2101500硫醚-S-194 2154600 1600硫醇-SH1951400氢离子型 用 25的 0.1 的H2SO4 溶液 以 0.1mL/min 的流量反向 冲冼 416h。 用 25的 20/80 的乙腈 /水溶液以 0.1mL/min 的 流量反向冲 冼 4h。用 65的 20/80 的ACN/0.01MH2 SO4 溶液以 0.1mL/min 的 流量反向冲 冼 4h。钙离子埋 用 850.1mol? L pH6.的 Ca(NO3)2溶 液以 0.1mL/mif 的 量反冲冼 416h。用 25的 2

7、0/80 的乙腈 /水溶涺以 0/1mL/man 的流量反向冲冼 4h。甈 25的 20/80 的乙腈 /水溶液以 0.1mL/min 的流量反向冲th。钠离型用 85的 0.1mol/L!pH6.3 的 Ca(NO3-2溶澲以 0.1mL/min 的流量反向 冲冼 416h。用 25的 20/0 的乙腈/水溶液0.1mL/min 的 流量反向冲冼 4h。用 25的 2/80 的乙 腈/氶溶液以 0.1mL/min 的流量反向冲冼 4h。铅离子型用 85的 pH 5.3 的 0.1M Pb(NO3)2溶液以 0.1mL/min 的流量反向 冲冼 416h。用 25的 20/80 的乙腈 /水溶

8、液以 0.1mL/min 的流量反向冲冼 4h。用 25的 20/80 的乙腈 /水溶液以 0.1mL/min 的流量反向冲冼 4h。P192订货或客户支持，请参见封底7GC 方法选择和优化 下图所示为 GC 方法建立和优化的通用步骤。其它在本产品目录中与之有关信息的页码均 在图中标示出来。P193195 GC 故障排除 在开始故障排除之前，首先需查看相关的实验室安全规程。了解试剂的理化性质及其相应 的材料安全数据表(MSDS)。同时，还需将所有的电器都关机并拔下其电源插头。带好护目 镜。开始确 认 分 析 物查看 应用 索引 (见 P201 、29 1)是否 找到 适合 的应 用否用 TRA

9、CETMTR-5MS 进 行初始 方法开 发 见 P118方 法 优 化验证是验证提高 灵敏 度增加保 留提高分辨率加快分析速度增加进 样体积减小膜厚 使谱峰更 尖锐减小柱内径 以减小 HETP 增加压力以 维持线速度减小温度梯度速度 增加分配系数以及 分析物在固定相中 的停留时间减小载气的线速度 增强与固定相的相互作 用，增加保留、分辨率 但谱峰扩展增加膜厚 增加样品与膜的相互作用改变固定相 极性柱对极性样品保 留更强，反之亦然。 见 P114增加柱长维持线速度减小温度梯度速度 增加分配系数以及分 析物在固定相中的停 留时间减小载气的线速度 增强与固定相的相互 作用，增加保留、分 辨率但谱峰

10、扩展改变柱尺寸 使用小内径、长柱增加膜厚 可根据样品在固定 相上的停留时间改 善分辨率改变固定相 极性柱对极性样品保留 更强，反之亦然。 见 P114增加温度梯度速度 降低分配系数及分 析物在固定相上的 保留时间减小载气的线速度使用短柱减小膜厚 减小分析物在固定 相上的停留时间考虑使用 UltraFast GC 可减少 20 倍分析时间订货或客户支持，请参见封底8以下是 GC 实验中的常见问题、可能的原因及相应的解决方法。现象原因解决方法基线相关问题固定相积聚。除去色谱柱末端部分。载气瓶压力太低，不易控制。更换气瓶，增加压力。载气或燃烧气流量波动。检查气阀。基线漂移色谱柱污染。检查气体的纯度，

11、使用相应纯度 的气体。系统载气泄漏。做泄漏测试，检查载气线路中的 连接件是否拧紧。基线下漂色谱柱未老化好。延长色谱柱的平衡时间。在实验过程中，冲洗阀一直处于 关闭状态。改变 GC 程序。具体方法参见仪 器使用说明。冲洗流速太低。增加冲洗流速。冲洗阀关闭时间过长。缩短冲洗时间。溶剂峰拖尾。增强溶剂抑制，缩短冲洗时间。基线从一个较高的 初始值慢慢下漂。前过滤器污染 (当使用四极杆质谱检测器时)联系服务代表。色谱柱内杂质堆积。检查气体的纯度，使用相应纯度 的气体。检测器污染。检查检测器，并清洗之。GC 柱泄漏。检修色谱柱，更换色谱柱。基线上漂空气进入系统之中。查找并修补泄漏点。温度程序控制下的 基线

12、上漂。色谱柱污染。检修色谱柱。载气流速太快。降低载气流速。色谱柱污染检修色谱柱。气体污染。更换气瓶，替换气体过滤器。色谱柱固定液流失。检查柱温，确保其不超过色谱柱 的最高使用温度；修理色谱柱； 更换色谱柱。基线稳定在高示值。连接件未拧紧。检查并确保所有的连接件及螺丝 等都处于拧紧的状态。基线形状不规则： 溶剂出峰后开始下 降检测器污染。检测器退火。清洗检测器。程序升温过程中色谱柱泄漏。降低色谱柱的使用温度。色谱柱 退火。 更换一支耐温更高的色谱柱。基线不形规则：S 形氧气污染导致固定相分解。在气路上安装氧气过滤器。检查 气体系统及入口是否有泄漏。使 用氧气含量低的气体。基线高频噪声检测器污染。

13、将检测器与其它电子仪器隔离开。订货或客户支持，请参见封底9如果噪声消失，清洗检测器。燃烧气流速太低或者太高。检查检测器的气体流速。色谱柱污染。检修色谱柱。检测器气源污染。检查气体纯度，安装相应的过滤 器。检测器温度高于色谱柱的最高使 用温度。将检测器温度下调至色谱柱的最 高使用温度。色谱柱接头松动。拧紧接头。色谱柱离火焰太近(使用 FID 时)。 将色谱柱调整到合适的位置(喷 嘴末端下 2-3mm)喷嘴或检测器污染。将检测器与其它电子仪器隔离开。 如果尖峰消失，清洗喷嘴和收集 器。基线出现尖峰若使用 FID，其温度太低。将 FID 的温度至少调高到 150。谱峰相关问题柱流量太快。降低流量至微

14、高于最佳值。柱流量太低。增加流量至微高于最佳值。分流进样时，分流流量太低。将流量增加至 40-50mL/min。柱效降低。在最佳流速下测试色谱柱。进样器污染。清洗并更换衬垫。固定相积聚在出口。从柱中除去最后两卷。检测器温度太低。将检测器温度上调至色谱柱最高 使用压力下 5。谱峰展宽样品过载。降低样品的进样量或者进样浓度。进样速度太慢。进样快速连贯。出现双峰错误的自动进样速度或模式。快速进样。柱或检测器过载。减小进样量；降低分析物的浓度； 增加分流比。柱温太低提高柱温。固定相量太少。使用一支膜厚更大的色谱柱。前伸峰进样技术欠佳。反复练习，提高进样技术。载气被污染。更换气瓶，更换过滤器。由玻璃器皿

15、造成的污染。清洗玻璃器皿，确保所使用的玻 璃器皿干净，不会造成污染。已进样的样品分解降低进样口温度。采用柱上进样 技术。鬼峰样品溶液污染样品进样前需进行充分的预处理。宽的鬼峰入口或气动装置污染。卸下色谱柱，bake out 入口。使 用高质量的隔膜。更换分流出口 过滤器。在气动装置和入口之间订货或客户支持，请参见封底10安装在线过滤器。前次实验的样品未完全洗脱下来。 提高柱温箱最后的程序温度或总 运行时间。增加柱流量。不规则椅装峰色谱柱溶剂溢出。提高初始柱温，减小进样体积 (OC)。 安装一个保留缝隙(OC)。载气流速太快。降低载气流速。燃烧气流量错误。检查燃烧气的流量。检测器污染。Bake

16、out 或清洗检测器。FID 火焰被溶剂峰淹没。检查检测器温度。进样量过大。减小进样量。溶剂峰后未见有谱 峰S/SL 进样器上，色谱柱位置错误 (太高)。检查色谱柱的位置。进样针阻塞。更换或修理进样针。色谱柱破裂或未连接。检查色谱柱及连接。电压计或放大器故障。更换电压计，更换放大器。记录仪故障。更换记录仪。FID 火焰熄灭。重新点燃。电子连接件损坏或丢失。检查电缆连接。进样后不出峰S/SL 进样器上，色谱柱位置错误 (太高)。检查色谱柱的位置。色谱柱降解。进样标准品混合物，测试色谱柱。柱温太低。提高柱温。 不要超过固定相的最高建议使用 温度。衬垫污染。清洗或更换衬垫。玻璃纤维或入口衬垫引起。用硅烷化过的纤维及干净的入口 衬垫替换。入口温度太低。提高入口温度。柱接头堵塞或连接不好。重置色谱柱入口接头。样品峰拖尾固定相选择错误。根据色谱柱生产厂商提供的文献 资料重新选择色谱柱。色谱柱在进样口端位置不正确。重新安装色谱柱。初始柱温太高。(柱上)降低初始柱温。隔膜净化流量太小，分流出口流 量太低。检查并