紫薇的组织培养实验

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1、紫薇的组织培养实验紫薇的组织培养实验1010 园林技术园林技术 1-21-2 班班二班第一组二班第一组组员：储海云组员：储海云 褚琴梅褚琴梅 董红侠董红侠 高小丽高小丽 耿蒙蒙耿蒙蒙 袁露露袁露露一一 培养基的配置与灭菌培养基的配置与灭菌1 实验目的：实验目的： 学习并掌握 MS 培养基的配制和灭菌过程。2 实验原理实验原理：培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般含碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等,通常采用母液法配制。培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，确保无菌操作的

2、顺利进行。3 3 实验材料、试剂和仪器设备实验材料、试剂和仪器设备1.试剂： 琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/LNaOH, 1mol/LHCl,各类母液2.仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH 试纸，锥形瓶等。4 实验步骤：实验步骤：4.1 培养基的配制A 确定配方:MS+ NAA 0.5 mg/L+ 6-BA 0.5 mg/LB 清洗玻璃器皿、用具及培养瓶C 把装有母液的试剂瓶从冰箱取出，在实验台上按顺序放好D 不锈钢锅里放入 750 ml 的蒸馏水E 称取琼脂 8g 放入锅中F 加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解G 量取母液： 浓缩 10 倍的大量元素 100 ml

3、浓缩 100 倍的微量元素 10 ml浓缩 100 倍的铁盐母液 10 ml浓缩 50 倍的有机物母液 20 mlNAA 0.5 mg/L 取 4 ml6-BA 0.5 mg/L 取 2 mlH 称取蔗糖 30gI 定容 1LJ 调整 PH 值 6.5-7 之间K 分装 20 瓶（每瓶 4045 ml）4.2 培养基的灭菌A 高压灭菌锅先加水至水位线，再放入培养基，顺时针拧紧盖子，直到不能拧动为止B 接通电源，按下工作键，当压力达到 0.10Mpa 时，使压力表保持0.100.15Mpa，灭菌 30minC 灭菌器蜂鸣报警时，立即断开电源，让压力自然下降。D 当达到 0.05Mpa 时放出蒸汽

4、，至零时，打开锅取出物品E 放入冰箱保存备用二二 外植体的初代培养外植体的初代培养1 实验目的实验目的: :掌握外植体灭菌、无菌操作技术的方法。2 2 实验原理实验原理: :植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官或组织，甚至单个细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料去进行组织培养，这是取得组织培养成功的最基本的前提和重要保证。3 3 实验用具及材料：实验用具及材料：超净工作台、培养基、无菌碟、无菌水、镊子、剪刀、70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、酒精灯4 4 外植体的选择与灭菌外植体的选择与灭菌选取紫

5、薇新稍嫩枝去叶片，剪成 34cm 的小段在自来水中冲洗于无菌条件下用 75%酒精灭菌 3060s用 0.1%升汞浸泡 810min用无菌水冲洗 5 次将材料剪成 2cm 带一个叶芽的茎段。5.无无菌菌接接种种步步骤骤： 用 70%酒精擦拭工作台和双手将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净 工作台上，用 70%酒精灭菌 8s，再用 0.1%升汞灭菌，再用无菌水冲洗，最后 放在滤纸上沥去水分。 材料吸干后， 一手拿镊子、一手拿剪刀 ，对材料进行适当 的切剪。将茎剪成含有一个节的小段。 在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。 用灼烧消毒过的器械将切割好 的外植体插植到培养基上。具体操作过程是：先打开瓶盖，将培养瓶倾斜 45 度拿着，使培养瓶口靠近酒精灯火焰，并将 瓶口在火焰上方转动，使 瓶口里外灼烧 数秒钟。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入 培养瓶内，轻轻插入培养基上。茎段要正放（尖端向上） ，接种完后，将 瓶口在火焰上再灼烧数秒钟。在酒精灯范围内盖上盖子 。接种结束后，将接种好的培养瓶转到培养室培养，清理和关闭超净工作台。定期观察外植体初代培养情况。