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1、1葡萄糖绘制标准曲线本试验选择 3，5 一二硝基水杨酸(DNS)法5测定还原糖量【所需配制试剂】DNS 试剂，葡萄糖标准溶液【所需仪器】25mL 带刻度试管，恒温水浴锅，分光光度计【原理】 3，5 一二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后，3，5 一二硝基水杨酸则被还原成红色氨基 化合物，并在一定的范围内，还原糖的量与反应溶液所呈现颜色深浅的程度成正比。因此 通过 3，5 一二硝基水杨酸试剂还原糖的呈色反应，可以用分光光度计法测定酶促反应后生 成的还原糖量，从而测出蔗糖水解的速度和酶活性。 DNS 试剂配制： 将 0639DNS 和 262mlNaOH(2ML)溶液，加到 50mL 含有 18.29
2、酒石酸钾钠的热 水中，再加 059 结晶酚和 059 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 500ml， 至于棕色瓶中备用。取 11 支 25ml 的刻度试管，编号，按表 1 所示的量，精确加入浓度为 1mgmL 的葡 萄糖标准液和 3，5 一二硝基水杨酸试剂。摇匀各管，沸水浴加热 5min，取出后立即放人 盛有冷水的烧杯中冷却至室温，以蒸馏水定容至 25mL，充分混匀。在 540nm 波长下，用 1 号管调零，分别读取 2 号一 11 号比色管的吸光度(abs)。以 abs 为纵坐标，葡萄糖 mg 数 为横坐标，绘制标准曲线图 MJ。求得标准曲线回归方程为：， ，y=00297x 一 00028；R2=09928。m：由回归方程求得的还原糖重(mg)； n: 稀释倍数； V：酶液的总体积(mL)； W：样品重(g)； t：时间(10min)； 1000:毫摩尔转化为微摩尔的倍数。
