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1、-氯代醇氯代醇对岷山蟾蜍影响的病理学观察对岷山蟾蜍影响的病理学观察动物医学院动物检疫:王鹏 指导教师：钟妮娜摘要：摘要：本实验将岷山蟾蜍分别放入浓度为0.1%、0.01%和0.001%的-氯代醇溶液浸泡处理20天，取出岷山蟾蜍的肝脏和心肌石蜡切片，HE染色，显微观察。结果：浓度为0.001%和0.01%的-氯代醇对岷山蟾蜍的生理学影响较小，浓度为0.1%的-氯代醇能严重影响肝细胞结构，使肝细胞明显肿胀，胞核浓缩，胞质空网状，似气球样变性，部分肝细胞坏死，部分区域肝细胞索排列紊乱，失去正常的组织结构，并导致心肌细胞膨胀，溶解断裂，排列紊乱,间质增宽水肿，红细胞大量渗出。关键词关键词：-氯代醇；岷
2、山蟾蜍；病理观察-chlorohydrin on the pathological Minshan toadAnimal Quarantine: Wang PengInstructor: Zhong Ni-naAbstract: This experiment will Minshan toads were placed in 0.1%, 0.01% and 0.001% -chlorohydrin solution treated for 20 days, remove the liver and heart Minshan toad paraffin, HE staining and mi
3、croscopy. Results: The concentration of 0.001% and 0.01% of -chlorohydrin Minshan toad physiological effects on the small 0.1% of -chloro alcohol can seriously affect the physiological function of liver cells to liver cells were significantly swollen cells nuclear condensation, cytoplasmic air mesh,
4、 like balloon-like degeneration, partial liver cell necrosis, some regional cable disordered liver cells, loss of normal structure, and lead to myocardial cell swelling, dissolution fracture, disorganized, and widened interstitial edema , a large number of red blood cells leaking.Keywords: Alpha chl
5、orinated alcohol ；Minshan toad; pathology 岷山蟾蜍1-2 Minshan toad是常见的两栖动物，生活在海拔 17003700米的耕地、林缘及高原草地。皮肤粗糙，表面有许多突起，眼的后方有一对毒腺，所分泌的黏液为蟾酥。生活时背部橄榄灰、绿灰或褐灰色，上面有不显灰黑斑点；体侧具黑色与浅色相同的花斑，有的具黑色线纹，自眼后沿耳后腺下方斜伸胯部。腹面具乳黄或污白色与黑色或棕褐色形成的花斑。腹后部多有一深色大斑。第二性征：蟾体形略小，皮肤松弛，背面瘰粒少且较光滑；前臂较粗壮，内侧三指及内掌突上具有黑褐色婚垫；无声囊及性线。雌蟾瘰粒较密集，背腹面疣粒上有不同程
6、度的黑褐色角质小刺。动物极黑色，植物极灰褐或棕黑色。雌性背部突起上生有黑色小棘，雄性则无3。从生物学的角度4，两栖动物岷山蟾蜍由于其独特的生活史周期和生理学特性，作为各种试剂研究对象越来越广泛，与其它生物相比，以岷山蟾蜍作为实验动物的优越性主要表现在以下几个方面 (1)岷山蟾蜍具有水陆两栖独特的生活史周期，卵和蝌蚪在水中生活，成体在接近水的陆地上生活.(2)两栖动物具有特殊的生理学特性如皮肤呼吸，故皮肤的渗透性很强，对毒性物的累积作用很明显，所以对外界毒物的反应极为敏感，即使在极低的浓度下，也能很快表现出受害症状。(3)应激反应是生物界普遍存在的特性，对游动能力较强的无尾两栖类蟾蜍尤为明显。当
7、蟾蜍接触到低剂量有害污染物时，刺激其嗅觉、味觉和视觉等感受器官，影响呼吸或作用于中枢神经系统，从而影响蟾蜍的活动能力如摄食、逃避敌害、繁殖或其他行为，并改变其在水体中的分布.-氯代醇5(alphachlorohydrins，a-CH)，又名 3-氯-1，2-丙二醇，作为化工生产和药物合成的中广泛应用于生产和生活中，是酸水解植物蛋白加工中加热条件下常见的副产物之一，是重要的化工原料和杀菌剂。在川西高原以 -氯代醇为主要成分的灭鼠药广泛应用于各地野外灭鼠上，-氯代醇对非啮齿类动物的不良影响以及消除或减轻污染越来越多的引起人们关注，问题的关键是如何对 -氯代醇进行有效的测试。川西高原两栖动物蟾蜍是水
8、生生态系统中重要的生物类群，又是联系水生和陆生环境的代表，因此国外越来越多的学者使用其作为指示生物进行环境的监测并且取得了较好的效果，关于 -氯代醇对动物体的影响主要集中在对鼠、兔等哺乳动物的研究上，而有关 -氯代醇对岷山蟾蜍生命活动的影响国内外未见报道7。所以研究 -氯代醇对岷山蟾蜍的影响，对评价 -氯代醇用于高原湿地灭鼠的安全性有重要的科学意义。1 1 材料和方法材料和方法1.1实验材料 选用成年岷山蟾蜍40只（2009年4月上旬从川西高原捕捉的蟾蜍。）1.2实验试剂 浓度为99%的-氯代醇（由四川省林业科学院提供）、福尔马林固定液、苏木精溶液、伊红溶液、各级酒精(70%,80%,90%,
9、95%, 100%)、二甲苯、福尔马林液、冰醋酸、苏木色素、酸性品红、中性树胶、蒸馏水。1.3 实验仪器 固定用小瓶、染色缸、组织切片机及配套刀片、电热板、恒温箱、解剖剪、解剖刀、烧杯、磨砂载玻片、盖玻片、酒精灯、展片台、眼科镊、组织镊、眼科剪、普通双面刀片、染色架、切片盒、广口瓶：滴管、玻璃漏斗、毛笔、烧杯、量筒、摊片用水浴锅、生物切片石蜡、电子天平、酒精灯、打火机、标签纸、铅笔、卷筒纸、乳胶手套、口罩、医用纱布足量、Olympus 显微镜。1.4 实验方法1.4.1 动物处理：依据雄性岷山蟾蜍前肢有婚垫分辨雌雄8。将 40 只岷山蟾蜍分为 4 组，每组 10 只，雌雄各半。编号为大剂量组、
10、中剂量组、小剂量组和对照组。将大剂量组、中剂量组、小剂量组岷山蟾蜍分别放入盛有浓度为0.1%、0.01%、0.001%的 -氯代醇的水溶液中浸泡预计 20 天。对照组放入盛河水的透明玻璃缸中浸泡 20 天作对照。观察岷山蟾蜍的变化，及时捞出死亡的岷山蟾蜍放入 10%的福尔马林溶液中固定。1.4.2 切片制作，病理观察：将各个浓度不同时间死亡的岷山蟾蜍取肝脏、心肌用 10%的福尔马林固定 24h，脱水透明石蜡包埋切片，H E 染色9-10，光镜观察不同剂量肝脏、心脏器官的显微结构的变化，并用显微照相。2 实验结果实验结果21 岷山蟾蜍肝脏病理学观察211 -氯代醇小剂量组：肉眼见肝脏呈暗红色。镜
11、下见部分岷山蟾蜍肝细胞轻度空泡变性，血管有扩张淤血，色素细胞增多。见图 1图 1 小剂量组，肝细胞轻度空泡变性 HE400Figure 1 small dose group, liver cell mildly vacuoles degeneration HE4002.1.2 -氯代醇中剂量组：肉眼见肝脏轻微肿胀。镜下部分肝细胞肿胀，胞质空泡状，胞核有浓缩，坏死。并出现双核的肝细胞，静脉充血。见图 2图 2 中剂量组，肝细胞空泡变性，静脉充血 HE400Figure 2 dose group, liver cell vacuoles degeneration, intravenous yper
12、emia HE4002.1.3 -氯代醇大剂量组：肉眼见肝脏明显肿胀、灰黄色或暗红色。镜下见大部分肝细胞明显肿胀，胞核浓缩，胞质空网状，似气球样变性，部分肝细胞坏死，部分区域肝细胞索排列紊乱，失去正常的组织结构，汇管区胆管明显增生并交错相连，间质有少量纤维组织增生。胆管周围有大量炎症细胞浸润。部分岷山蟾蜍肝枯否细胞增生，核分裂像多见。见图 3图 3 大剂量组，肝细胞肿胀空泡变性明显 HE400Figure 3 large dose group, liver cell vacuoles denaturation. Swelling HE4002.1.4 对照组：眼观可见肝脏质地柔软、红润有光泽，
13、大小形态正常。镜下见肝细胞无肿胀变性，中央静脉未见扩张，汇管区胆管无增生。见图 4图 4 对照组，正常肝组织 HE400Figure 4 controls, normal liver tissue HE4002.1.5 将肝脏病变程度分为等级10：“+”：肝细胞核浓缩，核分裂增多，枯否细胞增生； “+”：肝细胞核浓缩、气球样变及嗜酸性变，中央静脉扩张，胆管轻度增生，少量炎症细胞浸润： “+”：肝细胞变性，有片状肝坏死，胆管明显增生，较多炎症细胞浸润： “+”：肝细胞变性坏死，肝索排列紊乱，胆管明显增生，有少量纤维组织增生，大量炎症细胞浸润。各组肝脏病变程度见表 1表 1 各组肝脏病变程度Tab
14、le 1 each liver lesions组别 group浓度 V/V肝脏病变程度 Liver disease 对照组 Control-小剂量组 Small doses groups0.001%+中剂量组 In groups0.01%+大剂量组 Large doses groups0.1%+注：“-”表示肝组织结构正常；2.2 岷山蟾蜍心肌病理学观察。221 -氯代醇小剂量组：肉眼见心脏呈暗红色。镜下见部分心肌细胞肿胀，肌纤维溶解，间质水肿增宽，水泡样变性，有少量红细胞渗出。见图 5图 5 小剂量组，心肌细胞肿胀，肌纤维轻度溶解 HE400。 Figure 5 small dose gro
15、up of myocardial cells, muscle swelling, mild dissolved HE400222 -氯代醇中剂量组：肉眼见心脏呈灰红色。镜下见心肌细胞进一步肿胀，肌纤维溶解明显，间质水肿增宽，可见红细胞渗出。见图 6图 6 中剂量组，肌纤维溶解明显，间质水肿增宽 HE400Figure 6 doses, muscle groups, dissolve widened edema HE400223 -氯代醇大剂量组：心肌细胞膨胀，溶解断裂，排列紊乱,间质增宽水肿，红细胞大量渗出。见图 7图 7 大剂量组，溶解断裂，红细胞大量渗出 HE400Figure 7 big
16、 dose group, dissolved erythrocyte fracture, exuded HE400。224 对照组：眼观可见心脏质地柔软、红润光泽。镜下见心肌细胞无异常。见图 8图 8 对照组，正常心肌组织 HE400Figure 8 group, the normal tissue HE4003 3 讨论讨论-氯代醇在雄性大鼠、豚鼠、羊、猪、狗等动物均表现出肝毒性13-15。关于 -氯代醇对动物体的影响主要集中在对鼠、兔等哺乳动物的研究上，而有关 -氯代醇对岷山蟾蜍的影响的病理变化国内外未见报道16-17。从本实验中可以看出 -氯代醇小、中、大剂量组均出现肉眼可见肝脏肿胀、灰黄色或暗红色。镜下见大部分肝细胞肿胀，气球样变性，部分肝细胞坏死，部分区域肝细胞索排列紊乱，失去正常的组织结构，汇管区胆管明显增生并交错相连，间质有少量纤维组织增生，胆管周围有大量炎症细胞浸润。说明
