《胃蛋白酶原操作流程1》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胃蛋白酶原操作流程1（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 JSFW-PGCZ-02 胃蛋白酶原操作流程图胃蛋白酶原操作流程图 加样加样 100ul 加加酶酶 100ul 加加底物底物 100ul 加加终止终止 50ul 洗板洗板 5 遍遍 洗板洗板 5 遍遍 60分钟分钟 30分钟分钟 15分钟分钟 终止终止立即读数立即读数 特别特别注意事项注意事项 4加加3孵孵2洗洗 PGI和和PGII项目分开做项目分开做 特别注意：严格控制好反应温度特别注意：严格控制好反应温度（3636- -3737） 如果水浴锅温浴如果水浴锅温浴，一定不要浸泡酶标板！，一定不要浸泡酶标板！ （用架子隔离（用架子隔离水水或添加湿盒或添加湿盒） 同一批试剂同一批试剂，相同批号的
2、底物液、终止液和洗液可以混用，相同批号的底物液、终止液和洗液可以混用， 其它组分不能混用其它组分不能混用。 37温育温育 37温育温育 37温育温育 JSFW-PGCZ-02 胃蛋白酶原胃蛋白酶原标准操作标准操作规范规范 1. 实验前将试剂盒及样品平衡至室温（20-25） ，时间不少于 30 分钟； 注意：冷冻保存的血清样本使用前需要在室温中完全融化并充分混合后再使用，并且要尽量避免血清反复冻融。 2. 加样：空白液、5 个校准品、质控品及待测血清标本均 100l/孔加样； 注意：试剂和待测样本加样前要混匀后再加样，加样时避免产生气泡，吸头不要接触孔壁，并注意更换吸头，不用严重溶血和大量脂血样
3、品；每块酶标板加样起始至结束时间严格控制在 10 分钟以内。 3. 孵育：37孵育 60 分钟（加盖封板膜） ； 注意：时间从微孔板放入 37温育中开始计时。 4. 洗板：洗板 5 次，洗液板后于吸水纸上扣干残余液体（如果浓缩洗液有结晶析出，稀释前可在水浴中加温助溶，混匀后使用不影响检测结果） ； 注意： 严禁使用自来水冲洗微孔板或用自来水稀释洗液； 手工洗板时，每次洗液都应加满微孔（约 350l/孔） ； 机器洗板时确保注液量不少于 300l/孔、洗板机清洁、无故障； 洗板后在干净的无纸屑吸水纸上扣干； 无论手工洗板还是机器洗板不要考虑或设臵浸泡时间。 5. 加酶：酶结合物加入量 100l/
4、孔； 注意：建议使用排枪加酶（加样时间控制在 5 分钟内） ，移液器吸头不要接触孔壁,防止交叉污染影响检测结果。 6. 孵育：37孵育 30 分钟（加盖封板膜） ； 注意：时间从微孔板放入 37温育中开始计时。 JSFW-PGCZ-02 7. 洗板：洗板 5 次，洗液板后于吸水纸上扣干残余液体； 注意：洗板过程注意事项如步骤 4。 8. 显色：底物液加入量为 100l/孔，37避光显色 15 分钟； 注意：时间从微孔板放入 37温育中开始计时； 加入底物液过程中避免加样吸头与板孔、手指或其它物品接触； 加盖封板膜避光显示，并严格控制显色时间。 9. 终止：建议用多道移液器加样，终止液加入量 5
5、0l/孔； 注意：加样时间控制在两分钟之内。 10. 测量：450nm 检测读数，确保终止后 10 分钟内进行测量读数； 注意：如果使用水浴进行温浴，检测前一定要擦干板底的水滴。 11. 数据分析（单波长 450nm 检测或者双波长 450nm、630 nm） ； 注意：试剂本底（空白液检测值） ：OD450nm0.100； 建议 PGI 使用双对数拟合方法【ln（Y：浓度）-ln（X：1000OD450）】 ； 建议 PGII 使用二项式拟合方法【浓度（Y）-OD450（X）】 ； 线性：在规定的线性范围内，曲线相关系数 r2应不低于 0.9900。 12. 其它注意事项 操作前应仔细阅读使用说明书，严格按照说明书操作程序进行； 同一批试剂相同批号底物液、 终止液和洗液可以混用， 其它组分不能混用； 微孔板开封后，剩余要 2-8 密封干燥保存，并建议在半个月之内用完； 各试剂使用前应平衡到室温并摇匀后使用，严格控制反应温度和时间； 加样操作应快速、准确、手法一致，慢吸快打，缩短加样时间； 为防止样品和试剂蒸发及避免污染，温育时将反应板覆盖一层封板膜。
