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1、C6 大鼠神经胶质瘤模型材料：雄性近交系 C6 大鼠 50 只（56 周龄，250300g） ，C6 大鼠脑神经胶质瘤细胞；试剂：DMEM 培养液，胎牛血清（FCS） ，pH7.4 磷酸盐缓冲液(PBS)，0.25%胰蛋白酶消化液，pH7.4Tris 盐酸盐缓冲液(TBS)等；仪器：超净工作台 SA 一 IIA 型，CO2培养箱 MODEL5410，STIII型三维手动推进仪，倒置显微镜 IX70 型，培养瓶，WDT 一V 型脑立体定向仪，50ul 微量进样器，微型颅骨打孔钻；方法：1、C6 细胞体外培养及接种前准备：（1）C6 细胞的复苏：把冷冻细胞的管子迅速放入 38水浴中，并不时摇动，在
2、 1 分钟内使其完全融化，然后在无菌下取出细胞。在 1000r/min 速度下离心 10 分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度 1109/L，置 37温箱静置培养，盖好培养瓶的盖子，培养 24 小时。(2)将复苏后 C6 胶质瘤细胞，在 DMEM 完全培养基中，20%CO2、37、饱和湿度条件下培养瓶中单层培养；每日显微镜观察细胞生长情况；隔日半量更换培养液。（3）等到肿瘤细胞呈对数生长时，收集细胞。倒出瓶中培养液，先用 PBS 轻洗，然后室温下加入 2ml 0.25%胰蛋白酶消化液浸泡细胞；显微镜下观察，大部分细胞变成圆球形、胞质回缩、细胞间隙增大时，加入培养液终止消化
3、; 吸管吹打，移入离心管，1000r/min 低速离心 10 分钟，快速倾去上清，加入 5 倍以上体积的 PBS，吸管轻轻吹打均匀，1000r/min 低速离心 10 分钟，倾出上清;如此漂洗 2 次后，加入定量 PBS，吹打均匀。（3）取一滴细胞悬液滴入血球计数板的细胞计数池中，静置沉降 1分钟，低倍镜下计数四大中格中的结构完整的细胞，小细胞团计数为 1，细胞总数按以下公式计算:细胞总数=(四大中格细胞数/4)xl0000x 细胞悬液总量(ml)。（4）细胞悬液 1000r/ntin 低速离心 10 分钟，快速倾去上清，加入定量 PBS，调整细胞悬液浓度（5105/ml） ，吹打均匀细胞悬液
4、移入 2ul 无菌冻存管，放入碎冰中待种。（5）取 10ul 细胞悬液，用 PBS 选择合适倍比稀释，加入台盼蓝染液混匀，取样，计数板下观察、计数 100200 个细胞，活细胞圆形透明，死细胞蓝染，拒染活细胞95%。2、立体定向大鼠脑内接种细胞：(1)靶点坐标：大鼠右侧脑尾状核区：前囱中点前 1.0mm，矢状缝右旁开 3.0mm，硬脑膜下 5.0mm；(2)接种方法：Fischer344 大鼠经 2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(0.04g/kg)后，俯卧固定于大鼠脑立体定向仪，头部去毛，常规消毒。沿头颅正中线纵向切开头皮，暴露前囱。在靶点处用微型颅骨打孔钻钻 1 骨孔。50ul 微量进样器抽取 10ul（约 1.0x106个）细胞悬液，固定于三维手动推进仪，经骨孔垂直于颅骨外板进针 6.0mm，回退1.0mm。以 1.0ul/min 的速度推注，完毕后留针 5 分钟，使细胞充分沉淀，缓慢拔针，骨蜡封闭骨孔。生理盐水冲洗术野，缝合切口后消毒皮肤。（3）大鼠 MRI 检查：第 10、14、20 天 MRI 检查结论结论：大鼠于接种后第 10 天 MRI 增强扫描，接种部位可见肿瘤灶；第 14 天，肿瘤增大，显示清晰;第 20 天，肿瘤明显增大，占位效应明显。
