《人花生四烯酸5脂加氧酶(alox-5)elisa试剂盒使用说明书》由会员分享,可在线阅读,更多相关《人花生四烯酸5脂加氧酶(alox-5)elisa试剂盒使用说明书(3页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、1人花生四烯酸人花生四烯酸 5 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5)(ALOX-5)elisa试剂盒试剂盒使用说明书使用说明书Elisa kit 规格:48 孔配置/96 孔配置 标准品稀释液:1.5ml1 瓶 酶标试剂:3 ml1 瓶(48)/6 ml1 瓶(96)【人花生四烯酸人花生四烯酸 5 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5)(ALOX-5)试剂盒】本试剂仅供研究使用 计算:计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准 曲线的直线回归方程式,将样品的 OD
2、值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。 试剂盒组成试剂盒组成: 封板膜:2 片(48)/2 片(96) 说明书:1 份 密封袋:1 个 标准品: 2700ng/L 0.5ml1 瓶0.5ml1 瓶 2-8保存 酶标包被板: 148 196 2-8保存 样品稀释液: 3ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8保存 显色剂 A 液: 3ml1 瓶6 ml1 瓶 2-8保存 显色剂 B 液: 3ml1 瓶6 ml1 瓶 2-8保存 终止液: 3ml1 瓶6ml1 瓶 2-8保存 浓缩洗涤液:(20ml20 倍)1 瓶 (20ml30 倍)1 瓶 2-8保存 实验原理:实验原理
3、: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人花生四烯酸人花生四烯酸 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5)水平。用纯 化的人花生四烯酸人花生四烯酸 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微 孔中依次加入花生四烯酸花生四烯酸 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5),再与 HRP 标记的花生四烯酸花生四烯酸 5 脂加氧酶脂加氧酶 (ALOX-5)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和 样品中的花生四烯酸花生四烯酸 5 脂加氧酶脂加氧酶(AL
4、OX-5)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光 度(OD 值) ,通过标准曲线计算样品中人花生四烯酸人花生四烯酸 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5)浓度。目的:目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中花生四烯酸花生四烯酸 5 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5)(ALOX-5) 的含量。 服务承诺:服务承诺: 供货期:款到发货。 工作时间内免费的技术咨询和指导 。请来电咨询请来电咨询 为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的有效性(免费代测)。 保存条件及有效期:保存条件及有效期: 试剂盒保存:2-8| 有效期:6 个月 【人花生四烯酸人花生四烯酸 5 5 脂加氧酶脂
5、加氧酶(ALOX-5)(ALOX-5)试剂盒】样本处理及要求样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集 上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次2离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细
6、胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 /分) 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞 浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存 备用。标本融化后仍然保持 2-8的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4) ,用手工或匀浆 器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(200
7、0-3000 转/分) 。仔细收集上清。分装后一份 待检测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融. 7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤操作步骤 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在第一、第二孔中分别加标 准品 100l,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50l,混匀;然后从第一孔、第 二孔中各取 100l 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50l,混匀;然后在第三孔和
8、第四孔中先各取 50l 弃掉,再各取 50l 分别加到第五、 第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第 六孔中各取 50l 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50l,混匀后从第七、第八孔中分别取 50l 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分 别加标准品稀释液 50l,混匀后从第九第十孔中各取 50l 弃掉。 (稀释后各孔加样量 都为 50l,浓度分别为 1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L) 。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、待测样
9、 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40l,然后再加待测样品 10l(样品最终稀释度为 5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻 轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。 4.配液:将 30(48T 的 20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T 的 20 倍)倍稀释后备用。5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂 50l,空白孔除外。 7.温育:操作同 3。 8.洗涤:操作同 5。 9.显色:每孔先加入显色剂 A50l,再加入显色剂 B50l
10、,轻轻震荡混匀,37避光显色 15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50l,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终 止液后 15 分钟以内进行。【人花生四烯酸人花生四烯酸 5 5 脂加氧酶脂加氧酶(ALOX-5)(ALOX-5)试剂盒】注意事项:注意事项: 1 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未3用完,板条应装入密封袋中保存。 2 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以
11、避免试验误差。一次加样时间最 好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定, 计算时请最后乘以总稀释倍数(n5) 。 5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6 底物请避光保存。 7 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 试剂盒性能:试剂盒性能: 1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。 2.批内与批见应分别小于 9%和 11% 检测范围:检测范围:0.2IU/L - 6IU/L