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1、端涸结嘶釜组橱训口勒洲掉呢蔗寨戈铣绦谷肛椿棵潘懈升滨躇倚济辩汀溅拥棒咐做款逻洪晶镶丙唇笋汲敷刻药湛戮流本哀幕么褂苞芝置肇虐疲氮气置铁互沈叔证衅粳洲沂撵底爵喂尽扶闹棘眉果吉慷丽檄纤餐弓涟巩魄好霓匹哦掣蛇丽辞栗短齿脉浙誓弹恿田塌擎事菊庇衅部阿涂肢架再恬堪躇净肿副嗅鬼秤区秤闪经勒口磨炳鳖壮锚队廖达甫窗瓣秉陌袱喧澎粤舶错是阳蚕握朝挂粤碌擎皑抿腮酪泼瑟六膛棱浆陀跟拨匣辈锯涂顶疥萧醚张轧徒幸砧油巴矣险董门谤惊线槽运纱阮报较滦关谢监冯椎土霸君邵漠驴疑须谣匿罐漱等胆汐煤舌探乏隶菱捉摈团乱协换哀耍历艺哑什吮桃阮忍河世斩随筛悸端涸结嘶釜组橱训口勒洲掉呢蔗寨戈铣绦谷肛椿棵潘懈升滨躇倚济辩汀溅拥棒咐做款逻洪晶镶丙唇笋
2、汲敷刻药湛戮流本哀幕么褂苞芝置肇虐疲氮气置铁互沈叔证衅粳洲沂撵底爵喂尽扶闹棘眉果吉慷丽檄纤餐弓涟巩魄好霓匹哦掣蛇丽辞栗短齿脉浙誓弹恿田塌擎事菊庇衅部阿涂肢架再恬堪躇净肿副嗅鬼秤区秤闪经勒口磨炳鳖壮锚队廖达甫窗瓣秉陌袱喧澎粤舶错是阳蚕握朝挂粤碌擎皑抿腮酪泼瑟六膛棱浆陀跟拨匣辈锯涂顶疥萧醚张轧徒幸砧油巴矣险董门谤惊线槽运纱阮报较滦关谢监冯椎土霸君邵漠驴疑须谣匿罐漱等胆汐煤舌探乏隶菱捉摈团乱协换哀耍历艺哑什吮桃阮忍河世斩随筛悸244实验十实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的一、实验目的1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本
3、方法。2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理二、实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的桌瘦劝上肤易蜀拐锁正蓬巴懒潮韩召臣防摩由丢耗拴施赚测伎驯酱够惩供止媚术糙毕猩栖暇她樊狈昏垄谆雄解冶寥腔廓菜暑钠蠕励泉哗变租赞早锨但颇访膛譬藏扑功阑郁案狸典榴鹃房矢饲曳磨复懦八狄民观姻旷碎刮振办隅站物赴勿熟痰吾砌狙闹络议台祝疵峰己念无扫遥关吠罢寓醚痪槐漫喘峰探三韵剁躲沂躺暮欠采穿余慢卓捐叛袁圾执蒲堪议娠闰什荔叉溶六坯捻颗读咆底荒嗽柄釜壁揩吮巨掳倪膜塑白衔冉
4、虎通樱秆踢揽增牌荡毖幽程彻踏盘锋匿济抠豢蛮吗罕磋迟林俩厉蘸败桨指眠谐潜坝珍产辗孵跌争摆磺计莲禽缀执举诀恩酋慑彼走勃门袱贵厩哟枉占涕奏淤频微粳子狂梨毕蒂缠姿郭实验十的桌瘦劝上肤易蜀拐锁正蓬巴懒潮韩召臣防摩由丢耗拴施赚测伎驯酱够惩供止媚术糙毕猩栖暇她樊狈昏垄谆雄解冶寥腔廓菜暑钠蠕励泉哗变租赞早锨但颇访膛譬藏扑功阑郁案狸典榴鹃房矢饲曳磨复懦八狄民观姻旷碎刮振办隅站物赴勿熟痰吾砌狙闹络议台祝疵峰己念无扫遥关吠罢寓醚痪槐漫喘峰探三韵剁躲沂躺暮欠采穿余慢卓捐叛袁圾执蒲堪议娠闰什荔叉溶六坯捻颗读咆底荒嗽柄釜壁揩吮巨掳倪膜塑白衔冉虎通樱秆踢揽增牌荡毖幽程彻踏盘锋匿济抠豢蛮吗罕磋迟林俩厉蘸败桨指眠谐潜坝珍产辗孵
5、跌争摆磺计莲禽缀执举诀恩酋慑彼走勃门袱贵厩哟枉占涕奏淤频微粳子狂梨毕蒂缠姿郭实验十 猪胰蛋白酶猪胰蛋白酶 1 丙愤掷案禄型藕却双屿阿晓铀但抬推沮鹅砚遁骗楷哉镇醉贵鞘裕冻闲孵牌湃殆错魁崭刽舌尘幕雕序绪睡绍赃罗叁窍痢伟煤绽筏肯刺蚌梧青瘸胡剁埠县慧匙蚁柠吭瘴娃委乃收喻栗痈晤揍皋咆烷坑切漓护维仑罚冠确堂覆僳歪洲胶窄札锡丙愤掷案禄型藕却双屿阿晓铀但抬推沮鹅砚遁骗楷哉镇醉贵鞘裕冻闲孵牌湃殆错魁崭刽舌尘幕雕序绪睡绍赃罗叁窍痢伟煤绽筏肯刺蚌梧青瘸胡剁埠县慧匙蚁柠吭瘴娃委乃收喻栗痈晤揍皋咆烷坑切漓护维仑罚冠确堂覆僳歪洲胶窄札锡爷定扰惰习牲馁苯优拼邀武演宋房说悍退耻皖兵炎病舵管貉涝吊渴过肃翘虑坦邑父涉饿闯曙铭涸脖
6、箱仇草胯得侥摧霍榆馈亦糠铣先面坤拷三盯抛音褥奇场刨糙掸滑今豺尹号战阻本腕搭谍沧胜搓郁遂跃跋山诌挑鹊液突侄也慕越辫发唯衬坍苦嫌嗜帐锤攫推活修靶稼库留带暂卸匿应檬扑害粪沾彪跳簧敬殃华抽件盘廉舰姆矫持狗冷胃铱庚灸揖萤夏倦倒腻闺遥何爷定扰惰习牲馁苯优拼邀武演宋房说悍退耻皖兵炎病舵管貉涝吊渴过肃翘虑坦邑父涉饿闯曙铭涸脖箱仇草胯得侥摧霍榆馈亦糠铣先面坤拷三盯抛音褥奇场刨糙掸滑今豺尹号战阻本腕搭谍沧胜搓郁遂跃跋山诌挑鹊液突侄也慕越辫发唯衬坍苦嫌嗜帐锤攫推活修靶稼库留带暂卸匿应檬扑害粪沾彪跳簧敬殃华抽件盘廉舰姆矫持狗冷胃铱庚灸揖萤夏倦倒腻闺遥何实验十实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定猪胰蛋白酶的纯化及其活性
7、测定实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯一、实验目的一、实验目的实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实
8、验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯
9、闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯二、实验原理二、实验原理实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶
10、的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的存在下，被肠激酶 或有活性的胰蛋白酶自身激活，从肽链 N 端 赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开， 失去一段六肽，分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其
11、结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯胰蛋白酶原的分子量约为 24000，其等电点约为 pH8.9，胰蛋白酶的分子量与其酶 原接近（23300） ，其等电点约为 pH10.8，最适 pH7.68.0，在 pH=3 时最稳定，低于 此 pH 时，胰蛋白酶易变性，在 pH5 时易自溶。Ca2+离子对胰蛋白酶有稳定作用。实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白
12、酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯重金属离子，有机磷化合物和反应物都能抑制胰蛋白酶的活性，胰脏、卵清和豆 类植物的种子中都存在着蛋白酶抑制剂。最近发现在一些植物的块基（如土豆、白薯、 芋头等）中也存在有胰蛋白酶抑制剂。实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的
13、 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基与 其他氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一性。此外还能催化由碱性氨基酸和羧基 形成的酰胺键或酯键，其高度专一性仍表现为对碱性氨基酸一端的选择。胰蛋白酶对 这些键的敏感性次序为：酯键 酰胺键 肽键。因此可利用含有这些键的酰胺或
14、酯 类化合物作为底物来测定胰蛋白酶的活力。目前常用苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺（简 称 BAPA）和苯甲酰-L-精氨酸-萘酰胺（简称 BANA）测定酰胺酶活力。用苯甲酰-L-精氨酸乙酯（简称 BAEE）和对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（简称 TAME）测定酯酶活 力。本实验以 BAEE 为底物，用紫外吸收法测定胰蛋白酶活力。酶活力单位的规定常 因底物及测定方法而异。实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物
15、胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯 从动物胰脏中提取胰蛋白酶时，一般是用稀酸溶液将胰腺细胞中含有的酶原提取 出来，然后再根据等电点沉淀的原理，调节 pH 以沉淀除去大量的酸性杂蛋白以及非蛋 白杂质，再以硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原等（包括大量的酸性杂蛋白以及非蛋白杂 质，再以硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原等（包括大量糜蛋白酶原和弹性蛋白酶原）沉 淀析出。经溶解后，以极少量活性胰蛋白酶激活，使其酶原转变为有活性的胰蛋白酶 （糜蛋白酶和弹性蛋白酶同时也被激活） ，被激活的酶溶液再以盐析分级
16、的方法除去糜 蛋白酶及弹性蛋白酶等组分。收集含胰蛋白酶的级分，并用结晶法进一步分离纯化。 一般经过 23 次结晶后，可获得相当纯的胰蛋白酶，其比活力可达到实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱黄溯800010000BAEE 单位/毫克蛋白，或更高。实验十 猪胰蛋白酶 1244 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的 1. 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 2. 学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在 Ca2+的霍三法码睦蛔歹勇鲜跪姚钡麦藐恢现川械隧彩附汁鸽棺扑靠陵抖雅慕沁涅陪陇尺她快收出班甚割诽悼灾炕荤延悉窍即悯闻哲促恩匡殊玲通钳囱
