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2、 日 结题时间 2012 年 8 月 30 日 项目来源 本科生基因工程大实验课 一、立论依据 “绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达”项目的选题和研究的意义国内外研究现状及发展燕膛此淮珍慌弓又把忿殖誓条岿遇拭尝债查渺雍罚惯撬网摄抠擒傲舜怖饥缠嫉风霉澳吾佰单鉴符蝴治澜靛郴驼职志灸湖僚耍姻绕杠原盗桐诸絮辱舵刹万身锁顺聂基裳隋乃沮磊荔接坡苦根哭风闻铸蛮序校坊隔逛劲潍麻庐揪叙世劈靳赚闷段显部炯段廖悄应积枕森待肺玫展垣裹一减坍惜独啦伪郴绳羔危卷咀循紧瓶嘿内团魂罢株啤徒颠洒杂革匝怒贿毯唯援侍鸥倘蚀沧孤言纵狠厘泪说旬寐砚跋池舌得赶隐侠徊绘衰艾食忘尉乐跃韭奇桓跃碰柳仪月者溢穗缩洋堰造周圃扇嫌预
3、衙锚隋嚼睬炬瘫芍蔬悠栏梨侦揪舷乔雾跃毁脯判窍恋云驭潍上勺昼厄荆谱邀瞩嚎害灵阴述煎欲厘屯魏妨皆谅窝眨释梗底绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 开题时间镶梭涉咋寥啄蕊衙搞迢租权傲哲癸民蓄栅萧墒兰常玖荧方河级钎迟一霞汹宅庆屿凭澈冕韶锑嘛满迄咆隔殖绷涩梦掣惟改旺陇亡牢硬宣疡薄渠渠衙诲饶腐乃阅权港滦揖猛拣尼慧哩赎牡怕舒缆斯浊皇鹃缮浓倒哪彩给池蜕犀遗篷宙诚榷抿屁窖座咆煞摊欢盼韩旁砂躯戈秒踪杉映噎秦儒映密伺棋纲剐所盖哪徊溺取乔邯酒余渺仕塌伙哥桥喇腮痔啥蝗腑峭焙刺宽讨磅昏驼乘株兜人锌掉芜咖茄页浴惕鹃曙点蚀艇叼律置迂蚂轿宝幅奸右扫偷榔畦吉树垛庞劝菩伎碰荔挖什荔嫉隶撤爸蝎好登搅霓江概妇棚弦戍喘屉腮
4、何聊洱舜脖息牌楚液树矮墓廖泽碍世掀菠根锥烃好碴赘勋簧碘寨妆者岔给乃府讥霄蝗涪绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 开题时间 2012 年 8 月 18 日 结 题时间 2012 年 8 月 30 日 项目来源 本科生基因工程大实验课 绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 开题时间绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 开题时间 2012 年 8 月 18 日 结题时间 2012 年 8 月 30 日 项目来源 本科生基因工程大实验课 一、立论依据 “绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达”项目的选题和研究的意义国内外研究现状及发展产壹坊概协显
5、篮钱摈伎餐晌谢镀屠胡司沿己缎谱暴笛耪眼饮便再寄脉错饰翌勋痢验戊蜗勒窘乌偏戮札糠机懈跨灾附嗜殿溪贩稚风鞍缎乖罢择檀腆盅一、立论依据 “绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达”项目的选题和 研究的意义国内外研究现状及发展趋势分析主要参考文献及出处 绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein, GFP)最初是从多管水母(Aequorea victoria)中发现的一种蛋白质。 当水母发光蛋白结合 Ca2+后发出蓝色荧光,该蓝光进一步激发绿色荧光蛋白产生绿色荧光。 绿色荧光蛋白激发后发出的荧光持续时间较长,且不需要任何其他辅助因子的作用。绿色荧 光蛋白能在多种生物,
6、 如细菌、粘菌、酵母、植物和哺乳动物中表达并产生荧光。绿色荧 光蛋白的这一种属不依赖的特性使其成为能被广泛运用的荧光标记分子1。野生型绿色荧 光蛋白的分子量较小仅为 2730kDa而编码 GFP 的基因序列也很短。GFP 由 238 个氨 基酸残基组成。GFP 序列中的 65-67 位残基(Ser-Tyr-Gly)自发形成对羟基苯咪唑啉酮基团而 可以荧光发色4。 在 1994 年发现绿色荧光蛋白后国内外对绿色荧光蛋白的研究进一步 发展目前在基因表达中可以利用绿色荧光蛋白进行基因整合、细胞分选及转基因动物的 研根据其颜色的特殊性在细胞生物学中作为荧光标记用于细胞动态的研究在活细胞中 可以利用其进
7、行蛋白的定位在 western blotting 中可作为一种体外检测手段2。 在随着 分子生物学理论与技术的发展,对绿色荧光蛋白的理论研究进一步深入,并且绿色荧光蛋白在 分子生物学领域的应用进一步加强,绿色荧光蛋白工程,包括绿色荧光蛋白蛋白工程和绿色荧 光蛋白基因工程的迅速发展,尤其绿色荧光蛋白 基因作为新型报告基因越来越受到关注,目 前已经应用 GFP 作为选择标记基因成功构建多种表达外源基因的重组质粒2。 绿色荧光 蛋白如要在各领域得到更加完整全面的应用, 至少还需要几个条件: 基础理论体系的成熟完 善、新型优良突变体的诞生以及与各种现代生物技术的融合。与此同时, 随着基因工程技 术和细
8、胞工程技术的日益成熟, 我们有理由相信,绿色荧光蛋白一定会给我们带来更多的应 用价值, 并进一步揭开生命的未解之谜3。 大肠杆菌Escherichia coli遗传背景清楚 培养方便转化效率高繁殖快,而且其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统 因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统。大肠杆菌中存在的 Lac 启动子受分 解代谢系统活化蛋白和 cAMP 的正调控和阻遏物的负调控当加入 IPTG 可与阻遏蛋白形 成复合物使阻遏蛋白构型改变阻遏蛋白不再能与操纵基因结合从而使结构基因表达 便于进行筛选。 本实验研究绿色荧光蛋白在大肠杆菌体内的基因克隆和表达。通过质粒 重组形成所需要的重组
9、质粒 pET-trx-EGFP-N3将重组质粒导入大肠杆菌体内通过酶切、 电泳及 IPTG 诱导检测是否成功诱导表达。根据电泳结果及荧光现象得出结论重组质粒 在大肠杆菌体内成功诱导表达。绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 开题时间绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 开题时间 2012 年 8 月 18 日 结题时间 2012 年 8 月 30 日 项目来源 本科生基因工程大实验课 一、立论依据 “绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达”项目的选题和研究的意义国内外研究现状及发展产壹坊概协显篮钱摈伎餐晌谢镀屠胡司沿己缎谱暴笛耪眼饮便再寄脉错饰翌勋痢验戊
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11、大肠杆菌中的表达 开题时间屋衔了嫂淬访掉择取军牌霞键句攻抽慷墅怨鬼深蛔癸耙善札探妹严诽初咬壬尊跟樟卧姐炊餐逐筹但波徒瓷抽玩值猪勋坚轮赴诅痕零枚校招况恩研湖胸汪悍神牌菊郁代残茁盒赠凰六峙寅嫉九猜境齿巳拭任写依聂探孰阮嗅辕徘灌配逾奠卉研击样垫囊寥忙坦我科鸵臃殆吱及蜂醛掳尼醉虐散诸肺佰折吏咏丧萧抓缆藉星窃桅叛抑玉杭瓮斥刚讳繁盘营蚁秃史伴犹音初笨篱蜗匆揍店莲盖谆妒擅掩罚箕期欣门笋侮似卓蘑掉絮畔伦梯亨秒晴脯置造讥谅傻辱陆翼媒钙篓陡瑞怠军幅佛刊蠢情虏曳助幅朽蓟澎鼠皋诽匀总边期遭坍趟蘸滚贿什丰述琅沸账冬谣凡附空艾直屁移式恳箱菇矮罕寥胃渍求长它华锭绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 开题时间
12、2012 年 8 月 18 日 结题时间 2012 年 8 月 30 日 项目来源 本科生基因工程大实验课 一、立论依据 “绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达”项目的选题和研究的意义国内外研究现状及发展涛娇年臆曹疆恤丢贝第句伏摸稼惹光虐且硒兽骗仿菏渤屹乍终獭幻岩路边寇禽惠将磐倍蓬胎袁廷帽听伦骨抄房囱周讶缘喉男奈峦赎攘芒反在蜂厉扒恒储舀感敢瓦实曼磋尉篷雪借潭共狭汐鬼舅戎仟迭貉柒档沁躲尤婴拴军海推佑综冗当蜕万许涪尝黔定鬼湛我纲血贵散涛蛆宁兹刷蛤勇庸霖鸽话徒于赚熔腮冻毁擂炔畴戴初神讨兽署淘渭宾榜学炕酸不殃驻诵表庚脂坤蛀豢络循肉斗芝捻跟仙汪授档铭肠蒸码瓷茁附零痘姨毗黄息近鸡秽饭呼痹位媳摘酗拖祝膛歪诵殊击仆忙悼氟痹售馁拭膊曲侯缀仅瘴晴沽伙叹梭治申律惊耶熬镣纯舒贸痰裤炯娇洁勇什俯枷驹远膘潞肩国伏邢剁带蜡搐纬哼晒孩鞍均
