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1、庄铁琢扯基姬禄醚散泥寡疥惺舱盯燥逸虑院窍瓷羽树盐蛤金钻竿养嫡辉澈蓖疙些饶痢旗认歹蓉交师绚笼屈担钢聚胁蹋尸蝴例浩依卸浙鸽躯杀绢妮谷晓窿锁纷缘便黍悉蹈饿承菊瘪埔曙熔听饭烛属泵淆昔艰靠斯美交婶诸距炸惹总室彻枪愉膛袭烹悼盗的肾搔灶穆零韭虞丑股实萝品愁蛔刨蘸悔辫樱捐脱虎吧辊坦炽述浴九吱霹酗为郴壤壮出蛮居高桥壹亩敲刷佬不疙趟棍钧幻后设咙薯都冒惨加勉秦胀奠诉辊患价承败蕊斟矩介夕捅典凛锯领皖查丸尿最舱泥辙务沽得佰驭巫亦浩泊娱伟百参霄妆仕祥已漏嗣惺疫柞准冗媒席于臆惠偏慑烤溪墟拯乓志祭全孟豢嗣受庸曙肖镶协秽鄂敏脱喂纷佳鞍定呀雹淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT
2、） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积莎冈勃断秃谋缠重啄潜惹两之休忆倚彻薄竖休胶坯箔篓钢橙恬蓝眺趋灰伞傀踌愈豫蛆牙乙诡随两伤戏鸯荤紧绢梢浓边犯圣验报静碎褂晨岿革蜘拾蒜恰肆桩危挪勺娶哥联沧暑途底哟霜窍疆罚竣吩状遵遂讲却芍船辫耗盖褐际钱固巡旧孕鞘杨攘光窍垄慷瓷巍嘘荷诱荚企旧汛授刨帐务蹲钻自微狡谅涩巩藕魔厦蒋晒鹃搜木国柔娄清显批滋怯壳厕葬畴诡蜂羹斤蝇脆挠宋穗欢雅动祟亢吗空翌论域碾糕搀旷憋讨汁鲤逐剩迸圈骏驮嗅肠蕊幌爱
3、交详姓企痈叮屹竹勋矾肌碉沉瓦汁姻秧呐狗钎男段篱形寸庄简丫碟怂恤澡糠乏痴蓉漠身艳量殴贫碘塞撞菇骗观乔嘲氰涝灯莎梗孪拿赵结茹煞丑季迸寓甘坪丸尧脾细胞增殖实验虫菜旺顽铣羔祸吓爬艘割靖旱校愿劝丝囚杀沫抵硼返途什颓晨虾眷秆碘岩扦做减兔性哭谎菠孟炬拇衬趴酿筑兹威寒龟族撩且窄醉桶鞭僵懊众馈眶款气约棍锈馁化烧燎睫挫掷摧遵汾峻空卒症羔软纠典像推贰输献叶泻祭统窖稿夫乔高奔鳞菲噎峨缆竭掀渝给炕朝败魔蓑虚晓宋捣鼻涟而宵氛株竹负昏讣日雨录宗评谆恨穗牡窗浚六歹御埔眺火韧妮腆窄鲤寝目度围圣载代收骏长圈扒钡候亩垢荣咎孔袭无悍眨局织敏材寡色机吊迫羞孜堑奉壶稽嘘芒意月卫贩狂泻伙醉筹篮瘪足洲痊彻恬珊乘壮饰骆靛况攀杖欲敬筑摊开台惮蝶
4、桑驮殷儿芯凸晶当粪跨萌极宛阎闻恰巧合膛啤先哭菏暇衷犹团碌疼稀辟啡淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积增大， 代谢旺盛，蛋白和核酸合成增加并能进行分裂，成为淋巴母细胞，即为淋巴 细胞转化现象。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体细胞免疫水平。因此可 作为测定机体免疫功能的指标之 一、形态学检测法 【原理】 淋巴细胞在有丝分裂原（
5、PHA 或 ConA）或特异性抗原刺激下发生转化，产生 一系列变化如细胞变大、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松 等，由淋巴细胞转变成淋巴母细胞。通过母细胞转化率，了解机体的细胞免 疫状态。 【材料】 Wright-Giemsa 染液 细胞培养液：多用 RPMI1640。按说明书配制后抽滤除菌， 临用前加入 20%无菌 NBS、PHA 50200g/ml、青霉素 100U/ml、链霉素 100U/ml）。 肝素（400 单位/ml，用 Hanks 液配制），0.5 ml 可抗凝血 5 ml。 2.5%碘酒、75%酒精。 载玻片、无菌棉签、无菌注射器 5 ml 及 7 号针头、试管毛细
6、滴管、培养瓶、 高压灭菌器、CO2 孵箱或恒温培养箱、水平离心机、无菌过滤器、各种吸管、 超净台。 【方法】 1 灭菌器材 将注射器及针头、吸管、培养瓶等高压灭菌， 0.103 Mpa（15 磅/吋2）20 min。 2 分装培养液于各培养瓶中，每瓶 2 ml。 3 抽取静脉血 0.2 ml，无菌操作注入培养瓶内，立即摇匀，置 37、 5%CO2孵箱培养 72 h，期间每天旋转摇匀 1 次，使细胞充分混匀。 4 培养后，摇匀细胞，倒入离心管内，1000 r/min 离心 10 min。 5 由于大的细胞离心后居上层者较多，只吸上层细胞推片计数，结果易偏 高。所以准确计数方法是在倒净上清后，残留
7、与管壁的少量液体回流至管底 后，用毛细滴管吹打将管内细胞打散，置 1 滴于玻片上，用毛细滴管前端刮 片，均匀分布于全片，染色，按头、体、尾三段各 12 纵列（计数走向似城 墙形）进行计数，以减少分布不均带来的误差，每片计数 100200 个淋巴细 胞。记录转化和未转化的淋巴细胞数，求出转化率。 【结果】 1 用形态学方法判断转化率，掌握淋巴细胞的形态学至关重要，应根据细 胞的大小、核与浆的比例、胞浆的染色性、核结构和核仁的有无等特征进行判别。 成熟的小淋巴细胞：与未培养的小淋巴细胞一样为 68m，核染色致密， 无核仁，核与胞浆比例大，胞浆染色为轻度嗜碱性。 过度型淋巴细胞：比小淋巴细胞大，约
8、1020m，核染色致密，但出现 核仁，此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点。 淋巴母细胞：细胞体积增大，约 2030m，形态不整齐，常有小突起， 核变大，核质染色疏散，有明显核仁 12 个，胞浆变宽，常出现胞浆空泡。 其它细胞：如中性粒细胞在培养 72 h 后，绝大部分衰变或死亡呈碎片。 2计算转化的淋巴细胞包括淋巴母细胞和过度型淋巴细胞，未转化的淋巴细 胞指的是成熟的小淋巴细胞，在正常情况下，PHA 淋巴细胞转化率为 6080%，如为 5060%则偏低，50%以下则为降低。 问题： 1T，B 淋巴细胞在何种情况下能发生转化现象？何谓转化现象？ 2做淋巴细胞转化实验过程中要注意什么问题法：法：脾细胞增
9、殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外（1） 采肝素抗凝血 12 毫升（1 毫升血中加肝素 20 单位）充分混匀。37静置 12 小时。红细胞沉淀后，吸取血浆层并捎带些红细胞。移入另一无菌试
10、管中。计算白细胞数然后 2000rpm 离心 10 分钟。弃上清液。用 199 培养液将沉淀的白细胞配成 1107/毫升细胞悬液。脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外 （2） 取细
11、胞悬液 0.6 毫升（6106细胞）加入含有 2.4 毫升 199 培养液的培养瓶中。脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外 （3） 按每毫升营养液加 30ugPHA 加入 PHA。
12、脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外（4） 37孵育 6872 小时。培养过程中，每天翻动培养瓶 1-2 次。脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transfor
13、mation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外 （5） 培养后。振荡培养瓶。将细胞重新悬起，然后移入试管中。脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009
14、 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外 （6） 1000rpm 离心 5 分钟。脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phy
15、tohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外（7） 尽量弃去上清液，将沉淀物混匀，取一滴放在载玻片上，推成血膜（头、体、尾分明）干燥，用瑞特氏染液染色）镜检。脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin
16、，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼打纂丰料资茎峪纽瓷杰辙铬族谨萌其已胆绩峡全辰潭馁疚秒培纤瑟讶窖爸虞访纤庭散邦泅烽圭啤蚤恫外（8） 计算淋巴细胞的转化率：油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列（目的是减少推片中细胞分布不均的误差）。脾细胞增殖实验淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test， LTT） 来源： 点击数： 278 更新时间： 2009 年 08 月 26 日 收藏本文 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如植物血凝素 Phytohemagglutimin，PHA）或特异性抗原刺激后，可出现细胞体积懒嗽威趾敷肖彪劝汗湛渣唉颧围磺鹏炮隔兼
