《大学论文 野生黑木耳多糖的提取及性质研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大学论文 野生黑木耳多糖的提取及性质研究（66页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、密级名微雇业大亏学位论文单位代码学号野生黑木耳多糖的提取及性质研究S t u d i e s0 1 2t h eE x t r a c t i o nC o n d i t i o n sa n dP r o p e r t i e so fP 0 1 y s a c c h a r j d e so fW i l dA u r i c u l a r i aa u r i c u l a r指导教师：壶塑送塾塑申请学位门类级别：盔堂亟专业名称：揎堑痘堡堂研究方所在学答辩委员会主席：二00 六年六月奁釜越! 互二摘要本学位论文在对野生黑木耳与栽培黑木耳的蛋白质、脂肪、总糖等营养成分及多糖含量进
2、行了分析比较的基础上，对野生黑木耳多糖的提取、纯化、理化性质、单糖组分等进行了研究，并就野生黑木耳多糖对实验性高脂血症小鼠的降脂作用进行了实验观察。主要试验结果如下：l 、野生黑木耳的蛋白质、脂肪、总糖、多糖含量分别比栽培黑木耳高0 7 0 、O 0 6 、1 4 0 、2 6 9 ：野生黑木耳的水分、灰分和粗纤维含量分别比栽培黑木耳低0 2 6 、O 8 5 和1 1 9 。经s A s 分析，蛋白质、脂肪、总糖和多糖含量差异不显著，水分含量差异显著，灰分含量和粗纤维含量都达到极显著差异。野生黑木耳的维生素C 、维生素B l 和维生素B 2 含量分别比栽培黑木耳高6 8 m g 0 0 0
3、9 ) 、0 1 7 m g ( 1 0 0 9 ) “和O 0 5 2 m g ( 1 0 0 9 ) 。但野生黑木耳铁、硒、钙、锌的含量分别比栽培黑木耳低0 1 3 r a g g 、0 0 0 5u g g 、1 1 8 5 9m g k g 、2 5 8m g k g ，经S A S 分析，除铁的含量差异不显著外，其余都达到显著差异。2 、采用热水浸提、醇沉法提取野生黑木耳多糖，对野生黑木耳多糖提取工艺和一般理化性质进行了研究。选择浸提固液比、温度、时间和浸提次数作为单因素进行梯度实验，确定其条件范围，再通过正交实验1 9 ( 3 4 ) 进一步确定野生黑木耳水溶性多糖最佳提取工艺条件
4、。结果表明最佳提取工艺为：固液比1 ：4 0 、浸提温度8 5 、浸提时间2 h 、反复浸提2 次。理化性质结果表明：提取的野生黑木耳多糖中含有多肽和A A ，为蛋白质复合多糖。3 、采用微波法辅助提取野生黑木耳多糖，改进了传统的浸提工艺，通过单因素和正交实验确定微波辅助提取的最佳工艺条件。结果表明：采用水作为提取剂、微波功率为5 6 0 W 、提取时间为3 5 s 、料液比为1 ：4 0 、萃取时问为3 h 浸提效果最佳，多糖提取率达9 8 5 5 。与传统的浸提法相比，时间由2 4 h 缩短为3 0 s + 3 h ，多糖产率为7 1 2 ，微波辅助提取多糖具有时间短、耗能低、提取率高等优
5、点。4 、用两种方法( 氯仿一正丁醇法和三氯乙酸- 正丁醇法) 脱除野生黑木耳粗多糖中的蛋白质，以脱蛋白率为指标，通过正交实验L 9 ( 3 4 1 确定最佳脱蛋白分离工艺，对比两种方法中最佳组合粗多糖得率的差异。结果表明：三氯乙酸正丁醇法比氧仿正丁醇法的脱蛋白效果好，最佳水平脱蛋白率为7 0 6 9 ，但样品中多糖损失较前者严重，多糖得率仅为6 7 8 7 ；氯仿正丁醇法最佳水平脱蛋白率为5 1 3 9 ，多糖得率为8 0 3 1 。活性炭脱色F 交试验结果：活性炭添加量6 ，脱色温度为4 0 。C ，脱色时间为2 0m i n 。双氧水脱色试验结果：双氧水浓度选用2 0 为好。两种方法处理
6、对脱色效果差异不显著，对多糖得率有极显著的差异。因此，选用双氧水脱色效果较好。脱色脱蛋白后的多糖，经透析法除去小南子杂质，经醇沉淀、离心、冷冻干燥得纯多糖。纯多糖经酸水解后制成多糖水解液，用纸色谱法进行单糖组分分析。结果表明：野生黑木耳多糖由半乳糖和木糖两种单糖组成，R f 值分别是：O 3 6 和0 4 4 。5 、探讨野生黑木耳多糖( w A A u ) 对小鼠诱导型高脂血症降脂作用的影响。选用雄性昆明小鼠7 0 只，经高脂饲料诱导成高脂血症模型，按体重和血清总超固醇水平均衡分为7 组，其中6 个实验组分别经胃灌注一定量的W A A U 多糖，每天一次，连续3 0 天，对照组用等剂量的蒸馏
7、水代替，观察W A A U 多糖对小鼠体重，食量的影响及每周测定血浆脂质变化。结果表明：注射量在5 以上时小鼠的血清总胆固醇( T C ) 、血清甘油三脂( T G ) 显著降低( 口 A C ，由K 值大小可知，最佳组合为A 2 8 3 C 2 ，而且从正交表提取率上也可知最佳条件第8 号实验即为A 2 8 3 C 2 ，无须验证，最佳水平就是A 2 8 3 C 2 。因此，野生黑木耳多糖的最佳浸提条件为固液比为1 ：4 0 ，温度为8 5 。C ，时间为2 h ，反复浸提2 次。4 2 2 野生黑木耳粗多糖的理化性质结果与分析4 2 2 1 物理性质结果野生黑木耳粗多糖干品呈现土黄色，无味
8、，比较容易溶于热水，但不溶于无水乙醇、苯、甲醇、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂。4 2 2 2 化学性质结果及分析有关野生黑木耳多糖所得化学性质见表9 。表9 粗多糖的化学性质T a b l e 9T h ec h e m i c a lp r o p e r t yo f c o a r s ep o l y s a c c h a r i d e s由于苯酚一硫酸试剂可与游离或多糖中的戊、己糖糖中的糖醛酸起显色反应，由表9 可知：苯酚j 硫酸反应呈阳性，发现有棕色环出现，这正式糖类化合物的特征。由于糖类化合物与浓硫酸反应会脱水生成糖醛及其衍生物，然后与蒽酮缩合变成绿色物质。由表9 可知葸酮一硫酸
9、反应呈阳性，样品中的颜色变成了绿色，证明样品是糖类化合物。具有还原性的糖可以将铜试剂还原成氧化亚铜红棕色沉淀。而多糖无还原性，但在无机酸的作用下水解，可得定量的还原性单糖，因此，可以用来判断样品是单糖还是多糖。由表9 可知：斐林试剂反应呈阴性，即无沉淀生成，但经过酸水解后出现了红棕色沉淀，这说明样品不是单糖。由表9 可知：碘一碘化钾反应呈阴性，样品溶液滴加碘碘化钾溶液后未变成兰色，因而，可以确定样品不是淀粉类物质。由于多肽和蛋白质分子中的双缩脲结构，可以和C u S O 。作用形成紫红色铜盐络合物，由表9 可知：双缩脲反应呈阳性，样品液颜色变紫，可以确定样品含多肽和蛋白质。茚三酮和存在于游离的
10、氨基酸和蛋白质分子中的反应基团能发生显色反应，。由表9 可知：茚三酮反应呈阳性，颜色变成紫色，这说明样品中含有多肽和蛋白质。4 2 3 微波辅助野生黑木耳多糖的提取工艺条件优化4 2 3 1 微波功率的选择表1 0 不同功率的微波对提取效果的影响多糖得率5 6 15 7 86 5 46 6 56 6 2R a t eo f P o l y s a c c h a r i d e s结果表明：野生黑木耳多糖的得率在微波功率5 6 0 w 时已经达到最高，当微波功率继续提高时，多糖得率又有所下降，主要是由于温度升高造成多糖损失而造成的，即初步确定最佳提取功率为5 6 0 w 。4 2 3 2 微波
11、处理时间的选择表1 1 不同处理时间对提取效果的影响T a b l e llT h ee f f e c to f d i f f e r e n tp r o c e s st i m eo ne x t r a c t i o np u r p o s e结果表明：随着处理时间的延长多糖得率有逐渐增大的趋势，但超过4 0 秒时吸光度又有所降低，由于微波加热升温极其迅速，当处理时间长时，会因部分多糖分解而造成损失，处理4 0 s 时其吸光度最大，可初步确定最佳提取时间为4 0 s 。4 2 3 3 料液比的选择表1 2 不同料液比对多糖提取效果的影响T a b l e l 2T h ee f
12、 f e c to f d i f f e r e n ts o l i dt ol i q u i do ne x t r a c t i o np u r p o s e结果表明：随着料液比的增加多糖得率逐步提高，当料液比为1 ：5 0 时其吸光度最大，浸提效果最佳，但随着料液比的提高，给浓缩增加了困难，从经济和效益角度考虑，确定最佳提取料液比为1 ：4 0 。4 2 3 4 提取时间的选择表1 3 不同的提取时间对多糖提取效果的影响T a b l e l 3 T h ee f f e c to f e x t r a c t i o n t i m e o n e x t r a c t
13、 i o n p u r p o s e由表1 3 可知，随着浸提时间的延长，多糖得率越高，但当浸提3 h 时其多糖得率占有率已达9 8 5 5 ，而且浸提时间过多会浪费时间，故可确定提取3 h 时最经济、效果最佳。4 2 3 5 正交实验( 1 ) 采用L 1 6 ( 4 5 ) 正交设计表头，对微波功率、微波处理时间、料液比、萃取时间4 因子在4 个不同水平进行优选。见表1 4 。表1 4 正交试验的因子与水平婴坐婴丝竺型! 型竺箜唑翌型罂竺竺竺_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - _ _ - - _ 。- - _ _
14、_ _ - 。_ 。_ _ _ _ 。- _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。一l2 1 0 w3 0 s1 ：2 0123 5 0 w3 5 s1 ：3 0235 6 0 w4 0 s1 ：4 0347 0 0 w4 5 s1 ：5 04( 2 ) 正交试验结果表1 5L 1 6 ( 4 5 ) 正交试验与极差分析表t I b l e l 50 r t h o g o n a le x p e r i m e n t L l 6 ( 4 3 ) a n d A n a l y t i c a lr e s u l t o f p o l a r e x l x a c t i o
15、n试验多糖得率号ABcDE ( 空列)R a t eo fN oP o l y s a c c h a r i d e s胁兰兰m 量一至帅一篙一喊一兰特| |K 32 5 3 22 4 7 22 3 8 72 5 9 9配k lk 2k 3hR2 3 6 95 9 46 0 56 3 35 9 20 4 l2 5 2 25 8 25 9 46 1 86 3 l0 4 92 4 4 26 0 96 0 85 9 76 1 10 1 42 6 3 45 5 45 6 26 5 06 5 91 0 5由极差分析结果可知：萃取时间对野生黑木耳多糖的浸提效果影响最大，其次是微波处理时间和微波功率，而料
16、液比影响较小，各因素的影响大小顺序为D B A C ，极差分析的最佳组合为A 3 8 4 C 4 D 4 。( 3 ) 方差分析表表1 6 方差分析表T a b l e l 6A n a l y s i so f v a r i a n c e来源平方和s s自由度d f均方F 值F aS o u r c eM e a nF! 旦些堡 因素A1 2 3 0 7 6 2 5 530 4 1 0 2 5 4 1 81 0 9F o0 5 ( 3 ，3 ) - 9 2 8因素B1 7 0 8 516 5 53o 5 6 9 5 0 5 5 21 5 2F oo l o ，3 ) = 2 9 4 6因素CO 1 3 5 8 1 9 2 53O 0 4 5 2 7
