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1、次最低抑菌浓度抗生素对双歧杆菌粘附的影响次最低抑菌浓度抗生素对双歧杆菌粘附的影响提要本文观察了八种杭生素在次最低抑菌浓度提要本文观察了八种杭生素在次最低抑菌浓度(Sub-MIC)(Sub-MIC)下对双歧杆菌下对双歧杆菌和体外培养肠上皮细胞间粘附的影响。结果表明，次最低抑菌浓度的抗生素均能和体外培养肠上皮细胞间粘附的影响。结果表明，次最低抑菌浓度的抗生素均能显显著地抑制双歧杆菌的粘附，青霉素和万古霉素对双吱杆菌耘附的抑制有剂贡及时著地抑制双歧杆菌的粘附，青霉素和万古霉素对双吱杆菌耘附的抑制有剂贡及时间间效应。提示杭生素抑制双吱杆菌的枯附可能是其引起肠道徽生态失衡的一条重要效应。提示杭生素抑制双
2、吱杆菌的枯附可能是其引起肠道徽生态失衡的一条重要途途径。径。关键词双吱杆菌粘附杭生素关键词双吱杆菌粘附杭生素大量的研究证实，抗生素在低于最大量的研究证实，抗生素在低于最低抑菌浓度低抑菌浓度(MIC)(MIC)时，能对细菌的形态，时，能对细菌的形态，超微结构及生长速率造成影响。体外次超微结构及生长速率造成影响。体外次最低抑菌浓度最低抑菌浓度(Sub-MIC)(Sub-MIC)的抗生素能够的抗生素能够抑制大肠杆菌，酿脓链球菌及淋球菌对抑制大肠杆菌，酿脓链球菌及淋球菌对宿主细胞的粘附，并以此作为应用小剂宿主细胞的粘附，并以此作为应用小剂量抗生素预防感染的依据量抗生素预防感染的依据， ， ”.”.由于
3、机由于机体正常菌群形成的生物屏障在抵御外来体正常菌群形成的生物屏障在抵御外来菌入侵方面起着至关重要的作用，所以菌入侵方面起着至关重要的作用，所以探讨次最低抑菌浓度对正常菌群的影探讨次最低抑菌浓度对正常菌群的影响，有着重要的意义。本文观察了八种响，有着重要的意义。本文观察了八种常用抗生素在次最低抑菌浓度下对双歧常用抗生素在次最低抑菌浓度下对双歧杆菌粘附的影响。杆菌粘附的影响。1 1 材料与方法材料与方法1.1. 1 1 细菌细菌: :双歧杆菌双歧杆菌 10271027 株为本株为本所从健康婴儿粪便分离，经多次生化鉴所从健康婴儿粪便分离，经多次生化鉴定为青春型双歧杆菌定为青春型双歧杆菌. .将细菌
4、接种于硫将细菌接种于硫乙醇酸盐液体培养基增菌，乙醇酸盐液体培养基增菌，3737厌氧培厌氧培养养 4848 小时后，用耗尽培养液上清制成菌小时后，用耗尽培养液上清制成菌悬液，调整浓度为悬液，调整浓度为 1X101X10，一，一 1 1 X X 108/ml108/ml o o1.1. 2 2 抗生素敏感实验抗生素敏感实验: :实验用氯霉实验用氯霉素、新霉素、轻氨卞青霉素、灭滴灵、青素、新霉素、轻氨卞青霉素、灭滴灵、青霉素，万古霉素，卡那霉素和庆大霉素霉素，万古霉素，卡那霉素和庆大霉素为市售。按试管稀释法进行药物敏感实为市售。按试管稀释法进行药物敏感实验验幻，求出各种抗生素的最低抑菌浓度幻，求出各
5、种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)(MIC)。1.1. 3 3 次最低抑菌浓度次最低抑菌浓度(Sub-MIC)(Sub-MIC)抗生素对细菌粘附的影响抗生素对细菌粘附的影响: :1.1. 3.3. 1 1 1/SMIC1/SMIC 抗生素对细菌的抗生素对细菌的处理处理: :双歧杆菌悬液分别加入双歧杆菌悬液分别加入 1/SMIC1/SMIC的各种抗生素，厌氧培养的各种抗生素，厌氧培养 6 6 小时后，进小时后，进行粘附试验，用抗生素稀释液作对照。行粘附试验，用抗生素稀释液作对照。1.3.21.3.2 不同浓度抗生素对细菌的不同浓度抗生素对细菌的处理处理: :双歧杆菌悬液分别加入双歧杆菌悬液分别加入
6、 1/5,1/5, 1/1/10,10, 1/20,1/20, 1/40MIC1/40MIC 的青霉素及万古霉的青霉素及万古霉素，厌氧培养素，厌氧培养 6 6 小时后，进行粘附试验，小时后，进行粘附试验，用抗生素稀释液作对照。用抗生素稀释液作对照。1.3.31.3.3 对细菌处理时间的影响对细菌处理时间的影响: :双双歧杆菌悬液加入歧杆菌悬液加入 1/SMIC1/SMIC 的青霉素及万的青霉素及万古霉素，厌氧培养古霉素，厌氧培养 1/2,1/2, 1,1, 3,3, 6 6 小时后，小时后，分别进行粘附试验，用抗生素稀释液作分别进行粘附试验，用抗生素稀释液作对照。对照。1.1. 4 4 细胞细
7、胞: :肠上皮细胞系肠上皮细胞系 LovoLovo 细细胞引自本校病理教研究室。胞引自本校病理教研究室。LovLov。细胞按。细胞按常规传代培养于含常规传代培养于含 10%10%小牛血清小牛血清 RP-RP-MIMI16401640 培养液中，细胞接种于含培养液中，细胞接种于含盖玻片的培养皿中，待在盖玻片上形成盖玻片的培养皿中，待在盖玻片上形成中国徽生态学杂志中国徽生态学杂志 19961996 年第年第 8 8 卷第卷第 5 5 期期单层细胞后，进行粘附试验。单层细胞后，进行粘附试验。1.1. 5 5 粘附试验粘附试验: :取出细胞玻片，经取出细胞玻片，经pH7.pH7. 4PBS4PBS 清
8、洗一次后，加入抗生素处清洗一次后，加入抗生素处理的细菌悬液。理的细菌悬液。3737湿盒温育湿盒温育 2 2 小时。小时。pH7.pH7. 4PBS4PBS 漂洗漂洗 6 6 次，自然千燥，甲醇固次，自然千燥，甲醇固定，革兰氏染色，高倍镜下计数定，革兰氏染色，高倍镜下计数 5050 个细个细胞粘附的细菌数，计算平均数及标准差。胞粘附的细菌数，计算平均数及标准差。2 2 结果结果八种抗生素对双歧杆菌的最低抑菌八种抗生素对双歧杆菌的最低抑菌浓度浓度(M(M IC)IC)及及 1/5MIC1/5MIC 抗生素对双歧杆抗生素对双歧杆菌和肠上皮细胞粘附抑制的结果见附菌和肠上皮细胞粘附抑制的结果见附表。可以
9、看出，次最低抑菌浓度抗生素表。可以看出，次最低抑菌浓度抗生素与双歧杆菌温育与双歧杆菌温育 6 6 小时后，均能显著地小时后，均能显著地抑制双歧杆菌对体外培养肠上皮细胞的抑制双歧杆菌对体外培养肠上皮细胞的粘附。粘附。附表附表 1/SMIC1/SMIC 杭生素对杭生素对tt歧杆菌钻附的影响歧杆菌钻附的影响变产生了对抗生素的耐药性，或使得原变产生了对抗生素的耐药性，或使得原来的耐药细菌大量增殖来的耐药细菌大量增殖. .这样造成肠道这样造成肠道菌群失调及抗生素相关性肠炎。本研究菌群失调及抗生素相关性肠炎。本研究发现八种常用抗生素在次最低抑菌浓度发现八种常用抗生素在次最低抑菌浓度下均能显著地抑制双歧杆菌
10、对肠上皮细下均能显著地抑制双歧杆菌对肠上皮细胞的粘附，因为双歧杆菌是人体肠道最胞的粘附，因为双歧杆菌是人体肠道最主要的生理性细菌，它对宿主细胞的粘主要的生理性细菌，它对宿主细胞的粘附及定植在维持肠道正常菌群的稳定与附及定植在维持肠道正常菌群的稳定与平衡中起主导作用。所以本结果说明，抗平衡中起主导作用。所以本结果说明，抗生素抑制双歧杆菌的粘附可能是其引起生素抑制双歧杆菌的粘附可能是其引起肠道微生态失衡的另外一条重要的途肠道微生态失衡的另外一条重要的途径。这在临床工作中也有实际意义，提径。这在临床工作中也有实际意义，提示即使口服小剂量抗生素，也应及时补示即使口服小剂量抗生素，也应及时补充生理性细菌
11、。充生理性细菌。抗生素抗生素 M M ICIC抓每素抓每素新林素新林素 ee，而青霉，而青霉素和四环素则均能使淋球菌和脑膜炎球素和四环素则均能使淋球菌和脑膜炎球菌的菌毛减少，粘附力降低菌的菌毛减少，粘附力降低3).3).各种抗生各种抗生素抑制双歧杆菌粘附的机理还有待研素抑制双歧杆菌粘附的机理还有待研C3JC3JC4)C4)55参考文献参考文献C6)C6)ScheldScheld WMWM，etet al.al. BacterialBacterial adhesionadhesion inin thethepathogenesispathogenesis ofof infectiveinfect
12、ive endocarditis.endocarditis. J.J.Clin.Clin. Invest.Invest. 19811981，68.68. 13811381 一一 1384.1384.TylewskaTylewska S.S. etet al.al. EffectEffect ofof subinhibitorysubinhibitory con-con-centrationscentrations ofof antibioticsantibiotics onon thethe adhesionadhesion ofofstrptococcusstrptococcus pyoge
13、nespyogenes toto pharyngealpharyngeal epithelialepithelialcells.cells. Antimicrobial.Antimicrobial. AgentsAgents andand Chemothera-Chemothera-py.py. 1981119811 2020 (5):563(5):563 一一 566566C7)C7)StepheneStephene DS.DS. etet al.al. LossLoss ofof pillpill andand decreaseddecreasedattachmentattachment
14、toto humanhuman cellscells byby NeisseriaNeisseriameningitidismeningitidis andand NeisseriaNeisseria gonorrhoeaegonorrhoeae ex-ex-posedposed toto subinhibitorysubinhibitory concentrationsconcentrations ofof an-an-tibiotidistibiotidis Infect.Infect. Immun.Immun. 1984119841 4646 (2):507(2):507一一 513.5
15、13.熊德鑫熊德鑫. .临床厌氧菌检验手册中国科学技术临床厌氧菌检验手册中国科学技术出版社出版社 19941994 北京北京 P72-87.P72-87.蔡子徽，等。对两株双歧杆菌耐药性及其影响蔡子徽，等。对两株双歧杆菌耐药性及其影响因素的研究因素的研究( (摘要摘要) )中国徽生态学杂志中国徽生态学杂志1994119941 6 6 (5):59.(5):59.凌代文，等。双歧杆菌对抗菌紊的敏感性微凌代文，等。双歧杆菌对抗菌紊的敏感性微生物学通报生物学通报 1996119961 2323 (IO(IO 27-3327-33吕虎，等吕虎，等. .抗生素对细胞粘附的影响微生态抗生素对细胞粘附的影响微生态学研究中国微生态学杂志社学研究中国微生态学杂志社 1995:1995: P45P45 - -49.49.AlkanAlkan ML&BeacheyML&Beachey EH.EH. ExcretionExcretion ofof lipotei-lipotei-choicchoic acidacid byby groupgroup A A streptococci.streptococci. J J ClinClin In-In-vestvest 1978119781 671671 一一 677.677
