《MAEG-A4与p73在乳腺癌中的表达及相互关系的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《MAEG-A4与p73在乳腺癌中的表达及相互关系的研究（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一躲绀拇擗尊一东名河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签轹倒，钧翩签毫彳年勿佣目录中文摘要”1英文摘要5研究论文M A G E A 4 与p 7 3 在乳腺癌中的表达及相互关系研究第一部分乳腺癌组织中M A G E A 4 和p 7 3 的表达及与乳腺癌临床病理学指标之间的关系前言1 0 一日U 舌l材料与方法11结果1 4附图l6附表19讨 仑2 4参考文献2 6第二部分乳腺癌细胞中M A G E A 4 对p
2、 7 3 转录活性的影响前言”3 0月U 舌”3 U材料与方法3 0结果3 5附图3 7附表- 3 9讨论4 0参考文献4 1结j 沧4 2综述4 3致谢5 0个人简历5l中文摘要M A G E - A 4 与p 7 3 在乳腺癌中的表达及相互关系研究摘要乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升，而死亡率居高不下。目前，乳腺癌的治疗仍然以手术为主，辅以放疗和化疗，但是，总的治疗效果仍不十分理想。自上世纪9 0 年代以来，随着分子生物学和肿瘤免疫学研究的不断进展，以肿瘤免疫治疗为基础的肿瘤生物治疗已经成为继手术、放疗和化疗后的第四种肿瘤治疗模式，并具有创伤小和针对性强的特点，尤其对一些
3、手术疗效不佳的肿瘤不失为一种好的选择。近年来，肿瘤相关抗原的研究已经成为肿瘤免疫治疗研究的热点。在已知的众多肿瘤相关抗原中，癌睾丸抗原( c a n c e r t e s t i sa n t i g e n ，C T A ) 因其特异的表达模式，即在各种肿瘤组织中有不同频率的表达，而在正常组织中仅在睾丸生殖细胞中表达，偶在胎盘中表达，而使之成为肿瘤免疫治疗研究的热点。其中黑色素瘤抗原基因( m e l a n o m aa n t i g e ng e n e ，M A G E ) 是首先从黑色素瘤细胞中分离出来的一大家族癌睾丸抗原，人类M A G E 家族包含四个亚家族，即M A G E
4、 A 、M A G E B 、M A G E C 和M A G E D 。其中M A G E A 家族包括1 2 个成员，分别命名为M A G E A 1 M A G E A 1 2 ，它们均定位于X q 2 8 。除了在黑色素瘤细胞中表达外，人类多种其它组织来源的肿瘤均至少表达一种M A G E A 基因。导师所在课题组一直在致力于M A G E A 家族的生物学功能及作为肿瘤特异性免疫治疗靶分子可能性的研究，前期研究结果显示，M A G E A 4表现出与该家族其它成员不同的分子生物学特性，M A G E A 4 与p 5 3 家族成员之间关系密切，可通过与p 5 3 家族成员p 5 3
5、和p 7 3 之间直接的相互作用来诱导肿瘤细胞的凋亡。本研究采用多种实验方法研究了M A G E A 4 和p 7 3 蛋白在乳腺癌组织及相应乳腺正常组织中的表达；分析了M A G E A 4 和p 7 3 的表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系及两者之间的表达相关性；研究了M A G E A 4对p 7 3 转录活性的影响，旨在为寻找乳腺癌生物治疗靶点提供实验依据。第一部分乳腺癌组织中M A G E A 4 和p 7 3 的表达及与乳腺癌临床病理学指标之间的关系中文摘要目的：通过检测肿瘤抗原M A G E A 4 和肿瘤抑制因子p 7 3 在6 0 例乳腺癌组织及相应乳腺正常组织中的表达，探
6、讨其表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系及两个分子表达之间的相关性。方法：采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶法( s t r e p t a v i d i np e r o x d a s ec o n j u g a t e dm e t h o d ，S P ) 分别检测肿瘤抗原M A G E A 4 和肿瘤抑制因子p 7 3 在6 0 例乳腺癌组织及相应乳腺正常组织中的表达，并回顾性分析上述两个指标与乳腺癌临床病理学指标之间的关系，以及两个分子表达之间的相关性。结果：1 6 0 例正常乳腺组织中均未发现M A G E A 4 蛋白的表达，6 0 例乳腺癌组织有3 8 例M A
7、G E A 4 蛋白表达阳性，阳性率为6 3 3 ，提示M A G E A 4为肿瘤特异性抗原。2 M A G E A 4 蛋白表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系M A G E A 4 免疫组织化学染色阳性产物主要定位于细胞质，部分定位于细胞核。6 0 例乳腺癌患者中，C e r b B 2 表达阴性( + + ) 的患者3 2 例，其中M A G E A 4 表达阳性的患者2 4 例，占7 5 ( 2 4 3 2 ) ，C e r b B 2 表达阳性( + + + ) 的患者2 8 例，其中M A G E A 4 表达阳性的患者1 4 例，占5 0 ( 1 4 2 8 ) ，明显低于C
8、e r b B 2 表达阴性组( X 2 = 4 0 1 9 ，P = 0 0 4 5 ) 。M A G E A 4 蛋白表达与乳腺癌患者的其它临床参数，如患者的年龄( 贮= 3 2 13 ，P = 0 2 0 1 ) 、病理类型( X 2 = 0 0 3 0 ，P = 0 8 6 2 ) 、组织学分级( x 2 = o 9 51 ，P = 0 6 2 1 ) 、临床分期( X 2 = 1 0 5 3 ，P = 0 5 9 1 ) 、肿瘤大小( X 2 ：o 0 9 6 ，P = 0 9 5 3 ) 、淋巴结转移( X 2 = 0 0 7 2 ，P - - - 0 7 8 9 ) 、E R 状
9、态( x 2 = o 7 4 5 ，P = 0 3 8 8 ) 、P R 状态( x 2 = o 2 0 5 ，P = 0 6 5 1 ) 均无显著相关性( P O 0 5 ) 。3 p 7 3 蛋白在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的表达p 7 3 免疫组织化学染色阳性产物主要定位于细胞质，部分定位于细胞核。6 0 例乳腺正常组织中，5 l 例p 7 3 蛋白表达阳性，阳性率为8 5 ；6 0例乳腺癌组织中，2 6 例p 7 3 蛋白表达阳性，阳性率4 3 3 。p 7 3 在乳腺癌组织中的表达率显著低于在正常乳腺组织( X 2 = 2 2 6 5 ，p = O o o o ) 。4 p 7
10、3 蛋白表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系6 0 例乳腺癌患者中，E R 表达阴性的患者2 3 例，其 p 7 3 表达阳性的患者6 例，占2 6 1 ( 6 2 3 ) ，E R 表达阳性的患者3 7 例，其中p 7 3 表达阳性的中文摘要患者2 0 例，占5 4 1 ( 2 0 3 7 ) ，明显高于E R 表达阴性组( 贮- - 4 5 1 8 ，P = 0 0 3 4 ) 。6 0 例乳腺癌患者中，P R 表达阴性的患者2 5 例，其q b p 7 3 表达阳性的患者7例，占2 8 ( 7 2 5 ) ，P R 表达阳性的患者3 5 例，其中p 7 3 表达阳性的患者1 9例，占5
11、4 3 ( 1 9 3 5 ) ，明显高于P R 表达阴性组( X 2 = 4 1 0 3 ，P = 0 0 4 3 ) 。p 7 3 分子表达与乳腺癌患者的其它临床参数，如患者的年龄( X 2 = O 9 4 1 ，P = 0 6 2 5 ) 、病理类型( x 2 = o 7 4 7 ，P = 0 3 8 7 ) 、组织学分级( X 2 = 2 3 9 0 ，P = 0 3 0 3 ) 、临床分期( X 2 = O 0 6 ，P = O 9 9 7 ) 、肿瘤大小( X 2 = 1 1 5 ，P = O 5 6 3 ) 、淋巴结转移( X 2 = o 2 7 1 ，P = 0 6 0 2 )
12、 、C e r b B 2 状态( X 2 = O 3 5 0 ，P = 0 5 5 4 ) 均无显著相关性( P O 0 5 ) 。5 乳腺癌组织中M A G E A 4 与p 7 3 蛋白表达之间的相关性在3 4 例p 7 3 蛋白表达阴性的乳腺癌组织中，有l7 例M A G E A 4 分子表达阳性，阳性率为5 0 ( 1 7 3 4 ) ，2 6 例p 7 3 蛋白表达阳性的乳腺癌组织中，有2 1 例M A G E A 4 蛋白表达阳性，阳性率为8 0 8 ( 2 1 2 6 ) ，明显高于p 7 3 蛋白表达阴性组，提示M A G E A 4 蛋白表达与p 7 3 蛋白表达之间存在正
13、相关。结论：1 正常乳腺组织中不表达M A G E A 4 蛋白，乳腺癌组织中M A G E A 4蛋白表达率为6 3 3 ，提示M A G E A 4 为肿瘤特异性抗原。C e r b B 2 表达阳性的乳腺癌组织中，M A G E A 4 表达阳性率明显低于C e r b B 2 表达阴性的乳腺癌患者。2 p 7 3 在乳腺癌组织中的表达阳性率显著低于正常乳腺组织。p 7 3 的表达与乳腺癌特征性的生物学指标E R 和P R 相关。3 M A G E A 4 蛋白表达与p 7 3 蛋白表达之间存在正相关关系。第二部分乳腺癌细胞中M A G E A 4 对p 7 3 转录活性的影响目的：探讨M A G E A 4 对p 7 3 转录活性的影响。方法：选用p 5 3 突变型人肺癌细胞系M C F 7 、M D A M B 2 31 ，采用细胞培养、基因转染、R T - P C R 、W e s t e r n b l o t 等方法研究M A G E A 4 对p 7 3转录活性的影响。结果：1 M A G E A 4 与p 7 3 在人乳腺癌细胞中的表达R T - P C R 和W e s t e r n - b l o t 分析结果显示，M A G E A 4 在人乳腺癌细胞中文摘要M C F
