《PARP抑制对小鼠结肠腺癌CT26细胞肝转移的影响及其机制探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《PARP抑制对小鼠结肠腺癌CT26细胞肝转移的影响及其机制探讨（36页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、重庆医科大学硕士学位论文PARP抑制对小鼠结肠腺癌CT26细胞肝转移的影响及其机制探讨姓名：秦艳申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：王娅兰20080501重庆医科大学硕士研究生学位论文P A R P 抑制对小鼠结肠腺癌C T 2 6 细胞肝转移的影响及其机制探讨摘要目的：探讨小鼠结肠腺癌C T 2 6 细胞P A R P 抑制后对肝转移的影响及其可能的机制。方法：以5 - A I Q 为P A R P 抑制剂。选用小鼠结肠腺癌C T 2 6 细胞肝转移动物模型，小鼠腹腔注射不同剂量5 - A I Q 。1 4 天后，观察脾脏原发肿瘤和肝脏转移肿瘤的变化。W e s t e mB
2、 l o t 检测分析P A R P 、N F r B p 6 5 、I C A M l 、P - s e l e c t i n 、1 31 一i n t e g r i n s 、M M P 一2 、M M P 一9 在各组脾脏原发瘤组织中的表达。结果：1 腹腔注射不同剂量5 - A I Q 小鼠，脾脏肿瘤体积较对照组( 未注射5 - A I Q 组) ，均有不同程度缩小，肝脏转移结节数目明显减少，与对照组比较差别有统计学意义( 尸 O 0 5 ) 。2 不同剂量5 - A I Q 处理组小鼠脾脏肿瘤组织P A R P 、N F r , B p 6 5 、I C A M 1 、P - s
3、e l e c t i n 、1 3 1 i n t e g r i n s 、M M P 一2 、M M P 一9 蛋白表达明显低于对照组小鼠脾脏肿瘤组织相应蛋白的表达，差别具统计学意义( P 0 0 5 ) 。不同剂量5 - A I Q 腹腔注射组，肝脏转移结节数及分级均较对照组减少，经统计学N e m e n y i 法和K r u k a l - w a l l i s 秩和检验方法分析，差别具有统计学意义( P 0 0 5 ) ( 见附图4 表1 ) 。9重庆医科大学硕士研究生学位论文表1 腹腔给药组和对照组脾脏肿瘤体积大小，肝脏表面转移结节数及等级比较( ；s ，n = 6 )T
4、a b 1T h es i z eo fs p l e n i cc a r c i n o m a ，n u m b e r sa n dg r a d i n go fl i v e rm e t a s t a t i cn o d u l e si nd 恤他n g r o u p 3 ( ；5 ，n 。6 )a ：P 0 0 5 ，V S5 - A I Q t r e a t e d ( 3 m g k g )3 讨论结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，晚期常常发生血道转移，也是导致病人恶病质形成和死亡的主要原因，而肝脏是最常见的转移器官。众多的研究已经表明，肿瘤细胞转移的过程大致可分为：
5、癌细胞间粘附能力下降，从原发瘤脱落，这是肿瘤转移的先决条件。脱落的癌细胞与细胞外基质通过特异受体识别结台并相互粘附。癌细胞粘附后，释放多种水解酶类，使肿瘤细胞粘附的细胞外基质降解。癌细胞以主动方式侵入循环管道，形成栓子。在特定器官的毛细血管滞留并粘着，再次穿过血管壁并定居、增殖，形成转移灶。但肿瘤转移机制，目前尚不完全清楚。探讨肿瘤转移的发生发展，对肿瘤防治具有重要临床意义。有文献报道，在缺血心肌或脑组织、急性炎症肺组织、实验性损伤的脊髓组织等炎症中P A R P 活性明显增高，其可使I C A M 1 、P s e l e c t i n 的表达升高，从而促进中性粒细胞与血管内皮细胞的粘附，
6、而P A R P 抑制剂则可抑制这一过程，减轻炎症损害【1 2 ，3 l 。我们先前的研究也观察到人大肠癌伴转移者P A R P 表达较不转移者增加，P A R P 抑制剂5 - A I Q 对结肠腺癌细胞与血管内皮细胞、细胞外基质的粘附和侵袭能力有抑制作用。但5 - A I Q 能否通过抑制P A I 冲抑制肿瘤生长转移，尚未见文献报道。另有文献报道，小鼠腹腔注射给药方式能在腹腔内产生较静脉给1 0重庆医科大学硕士研究生学位论文药方式高2 0 0 , - - - 4 0 0 倍的药物浓度，药物腹膜吸收经门静脉到肝脏，使门静脉中维持较高的药物浓度7 1 。因此，本研究则以5 - A I Q 为
7、P A R P 抑制剂，采用C T 2 6 细胞肝转移模型，予不同剂量5 - A I Q 直接腹腔注射，观察了小鼠结肠腺癌C T 2 6 细胞P A R P 抑制后在小鼠体内生长转移变化。结果显示，C T 2 6 细胞P A R P 抑制后，在小鼠体内脾脏生长受到抑制小鼠体内肝脏转移结节形成减少且分级降低( 尸 0 0 5 ) ：肝脏转移结节数及分级均较对照组减少，分别经统计学N e m e n y i 法和K r u k a l w a l l i s 秩和检验方法分析，差别具有统计学意义( _ P O 0 5 ) 。但不同剂量组之间差别无统计学意义( 胗0 0 5 ) 。提示，P A R
8、P 抑制，可抑制C T 2 6 细胞生长及肝转移，在结肠癌肝转移中其可能有着重要的作用。2 为进一步探讨5 A I Q 对小鼠结肠癌C T 2 6 细胞肝转移抑制的机制，本研究采用W e s t e r nB l o t 对小鼠脾脏原发瘤中P A R P 、N F r B 、1 3 1 i n t e g r i n s 、M M P 2 、M M P 9 、I C A M 1 、P s e l e c t i n 蛋白的表达变化进行了检测，并对各蛋白之间的相关性进行了分析。结果显示，实验组( 腹腔注射5 一A I Q3m g k g ) P A R P 、N F - r B 、1 3 1 i
9、 n t e g r i n s 、M M P 2 、M M P 9 、I C A M 1 、P s e l e c t i n 的表达均明显弱于5 - A I Q 未处理组，经K r u k a l - w a l l i s 秩和检验分析，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。S p e a r m a n 相关分析显示，P A R P 与N F r d 3 在小鼠脾脏原发瘤中表达呈正相关( P 0 0 5 ) 。N F r B 分别与相应组别的1 3 1 i n t e g r i n s 、M M P 2 、M M P 9 、I C A M l 、P s e l e c t i n
10、 的表达也呈正相关( P O 0 5 ) 。提示小鼠结肠癌C T 2 6 细胞P A R P 抑制后肝转移减少，可能与P A R P 抑制，使N F r d 3 活性降低，下调一系；t J N F r B 依赖性基因如B 1 i n t e g r i n s 、M M P 一2 、M M P 一9 、I C A M 1 、P s e l e c t i n 等的表达有关。P A R P 在结肠癌转移过程中可能具有重要作用。2 0重庆暖科丈学硬研究生学位谚文附图q 蝴附图l 小鼠结脯癌肝转移模型脾脏和肝l 嘲墨生化“：脾脏内见肿瘤嬉帑，B ：肝脏见多十肿 瘤蛄节)F i 9 1 T h ec
11、h a n g e so f s p l e e n a n d l i v e r i n l i v e r m e t a s t a s i s m o d e l o f c o l o nc a r c i n o m a i nn l o u 腓f A ：T h ep r i m a r yc a r c i n o m an o d u l e i ns p l e e nB ：T h e l i v e r m e t a s t a s i sc a r c i n o m an o d u l e 、附图3 小鼠蛄肠癌肝转移模型肝脏蛆织学主化( 肝脏组织中见低分化糠癌)
12、日B 染色F4 0 0 F 瞄T h eh i s t o l o g i c a lc h a n g eo f l i v e ri nI n o u s eC T 2 6c e l ll i n el i v e rm e t a s t a s i sm o d e l ( T h e r ei sp o o r l yd i f f e r e n t i a t e da d e n o c a r e i n o m a ) H e m a t o x y H nE o s i ns a i n i g x 4 0 02眼庆科大学碗i 研究生学位论文。糊归。 附图45 “I O
13、腹腔注射组和对照蛆小鼠脾脏和肝脏冉眼变似 ：赴理组脾脏肿瘤结节较小，B ：赴理妞肝胜转移结节较少。c ：时J ! 曼蛆脾脏肿瘤结节较走，D ：对照组肝脏转移结节较多)F i 9 5 M o r p h o l o g yo b s e r v a t i o no f p r i m a r ys p l 盹na n d l i v e r m e 诅s h s bc a r c i n o m ag h e n i n5 - A I Q - t r e a t e dg r o u pa n d n t m lg r o u p f A ：T h es i z eo f s p l e e
14、nc a r c i n o m a i ss m a l l e r i n5 - A I Q - f f e m e dg r o u p ；B ：T h en u m b e r s o f l i v e rm e t a s t 孤i sn o d u l e si s l e s s i n5 - A I Q - t r e a t e dg r o u p ；C ：T h es i z eo f s p i e e nc a r c i n o m a i s l a r g e r i nc o n t r o lg r o u p ；D ：T h en u m b e r s
15、 o f l i v e r m e t a s t a s i sn o d u l e si s m o m i ne o n u o lg r o u p l12 - a n t i P A R P ( 11 6 K D )，_ -a n t i N F Kb ( 6 5 K D )- ，a n t i B - a c t i n ( 4 3 K D l附图5 各组小鼠脾脏肿瘤中P R P ，H F K8 p 6 5 蛋白的表选( 1 ：对照蛆2 ：5 “I O 腹腔注射蛆3m g k g )F i 卫6 T h ee x p r e s s i o no f P A R P a n d
16、 N F - 心p 6 5 i i l 孓A I Q * t r e a t e do r e n t r e a t e dg r o u p sIIT h ee x p r e s s i o n so f P A R Pa n d N F K B p 6 5 讯c o f l ”o lg r o u p ；2 T h ee x p r e s s i o n s o f P A R Pa n d N F - K B D 6 5i n5 - A I Q I 啪t t dg r o u p s )12 ， J - ra n t i - M M P - 9 ( 9 2 K D )a n t i - M M P - 2 ( 7 2 K D )a n t PB - a c t i n ( 4 3 K D l附图6 各组小鼠脾脏肿瘤中姗，一2 、删P _ 9 蛋白的表达( 1
