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1、西南农业大学硕士学位论文烟草内生细菌种群动态及拮抗活性研究姓名：马冠华申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：肖崇刚2003.5.1奠“呐蔓，懈栩健五彝瞒爿崔嗣愧摘要究以七个田间种植的烟草品种( K 3 2 6 ，K 3 4 6 ，R G l l ，6 2 8 ，N C 8 9 ，红大云烟8 5 ) 的种子、根、茎、叶为试验材料，通过严格表面消毒处理后分离内生细菌，对7 个品种整个生育期中内生细菌的种群及其动态进行了定量和定性分析。并用获得的内生细菌对四种烟草病原真菌进行室内拮抗活性测定。结果如节j母内生细菌菌群：从七个烟草品种中共分离到B a c i l l u s ( 芽孢杆菌属) ，
2、 ，、X a n t h o m o n a s ( 黄单孢菌属) ，E r w i n i a ( 欧文氏菌属) ，A g r o b a c t e r i u m ( 土壤杆菌属) ，S e r r a t i a ( 沙雷氏菌属) ，F l a v o b a c t e r i u m ( 黄杆菌属) ，和P s e u d o m o n a s ( 假单孢菌属) 属的内生细菌，在七个品种中只有N C 8 9 品种植株中未检测到S e r r a t i a 属细菌，不过S e r r a t i a 属在其它材料中存在的时期也很短，都是只在缓茁期到旺长期出， 现。惕外，这些属在所
3、有供试材料的整个生育期中出现的时期和在生育期中存在 ( 的时间长短不完全相同。只有B a c i l l u s 和A g r o b a c t e r i u m 两个属在种子中分离到，并且在8 个供试材料整个生育期出现，表明种子中存在的内生细菌可以在整个生育期中保存下去而成为常栖菌群( r e s i d e n tf l o r a ) 。2 七个烟草品种整个生育期中内生细菌种群动态：从种子到出苗期，内生细菌数量和种类都开始增加，特别是数量上升较快。从出苗期到十字期菌量又出现大幅度下降，但略高于种子中菌量。烟株成苗以后移栽，进入缓苗期，在这一长段时期里，内生细菌数量没有出现太大变化，只
4、是移栽后菌量稍有下降。整个生育期中所检测到的菌群在缓苗期全部出现。随后，植株进入伸根期和旺长期，内生细菌在这期间迅速繁殖，数量急剧增加。到成熟期，菌量开始下降，菌群数也逐渐减少。3 烟草不同器官中内生细菌种群动态：根带菌量最多，茎次之，叶最少；所分离到的菌群也是根最多，茎次之，叶最少。茎中菌群在根中几乎都能检测到，个别菌群在叶中分离到而在根、茎中未检测到。4 不同栽培时期烟草植株中内生细菌种群动态：七个试验品种在各个栽培时期带菌量有时表现显著差异。不过对于内生细菌菌群来说，基本上没有什么明显差异，虽然N C 8 9 中没有分离到S e r r a t i a ，但整个分离过程中S e r r
5、a t i a 的分离频率都很低。勘一奠I 弗肿蔫帮q 嚏 毫西囊懵t 董啦嘲嚏5 不同土质田间烟草内生细辅种群差异：对R G l l 和K 3 2 6 两个品釉在两种鹱中游蠹生细菌调查袭鹱，秘种煅孳痰生细菌带菡羹镳砂土中高子镝粘主，蔼群粥楚镶麓多予镶殄主。壤、茎、盼魄骏，抟 巾蓥量轻菡群鏊零一致，嚣投、麓中稿菱较大。6 + 矮蕈熬令生育期痰妻穗蘸种群密发：投孛2 。O x l 0 4 一l ，O x l 0 8 c f u i g - f w ，蕊中1 9 x 1 0 3 3 O x l 0 7c f u g f w ，时中6 3 x l O 。6 8 x 1 0 6c f u g - f
6、w ，烟株种群平均值在7 6 x l 妒一1 2 x 1 0 7c f u g - f w 之间。7 。内生绷蔻接抗活性：从七个烟攀黟辨巾共分离劐8 2 9 个内生绷裁麓橡，通过平板对峙培养法筛选出对烟草灰襟菌、黑胫病菌、赤星病菌和炭瘾病菌肖较好接撬溪毪戆蘩拣分裂骞6 l ，3 8 ，2 粒弱令。势量对予每一耪瘸磊落凌鑫个撼拇、磐个对疑及搬、茎、婶均有零融毅爨静播抗藏豫存在。关键谶爝筚蠹鬟鳐蘩摊瓣动悫接抗活健 一_ 一_ _ ”_ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _2，穸y 一矗r # 一：r 种卅I 懈蕊崩僦角崔同E ，CP o p u l a t i o nd y n a m i
7、c sa n di nv i t r oa n t a g o n i s t i ca c t i o n o fe n d o p h y t i cb a c t e r i ai nt o b a c c op l a n t sC a n d i d a t e ：G u a n h u aM aS u p e r v i s o r ：A s s o e P r o f e s s o r C h o n g g a n gX i a o( C o l l e g e o f P l a n t P r o t e c t i o n ，S o u t h w e s t A g
8、r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,C h o n g q i n g4 0 0 7 1 6 , C h i n 口)A b s t r a c tE n d o p h y t i cb a c t e r i aa r eu b i q u i t o u si nm o s tp l a n ts p e c i e s ，r e s i d i n gl a t e n t l yo ra c t i v e l yc o l o n i z i n gp l a n tt i s s u e sl o c a l l ya sw e l
9、la ss y s t e m i c a l l y , a n dd on o tv i s i b l yh a r mt h e # a n t I nt h i ss t u d y , t h ep o p u l a t i o n 莲y n 鑫擞i c sa n db i o d i v e r s i t yo f 强曲两婚cb a c t e r i af r o ms e e d s , r o o t s ，s t e m sa n dl e a v e so fs e v e nt o b a c c oc u l f i v a r sw e r ee x a m
10、i n e da td i f f e r e n tp l a n td e v e l o p m e n t a ls t a g e s ，a n dt h ea n t a g o n i s t i ca c t i v i t i e so ft h ee n d o p h y t i cb a c t e r i aa g a i n s tf o u rt o b a c c of u n g a lp a t h o g e n si nv i t r ow e f ea l s oe x a m i n e d T h er e s u l t sa r ea sf o
11、 l l o w s ：1 T o t a ls e v e ng e n e r a ( B a c i l l u s , X a n t h o m o n a s , 西w 跏衄A g r o b a c t e r i u m , S e r r a t i a ,F l a v o b a c t e r i u m ，P s e u d o m o n a s ) w e r ei s o l a t e df r o m # a n t so ft h es e v e nt o b a c c oc u l t i v a r s w h i l eS e r r a t i
12、 aw a sn o td e t e c t e di np l a n t so ft h ec u i t i v a rN C 8 9 , b u ti tw a $d e t e c t e dj u s tf r o mr e c u p e r a t i n gs i a g et of l o u r i s h i n gs t a g ei na l lt h eo t h e re u l t i v a r s A m o n gt h es e v e ni s o l a t e db a c t e r i ag e n e r a , B a c i l l
13、u sa n dA g r o b a c t e r i u mw e r ed e t e c t e di ns e e d s ，a n da l s o d e t e c t e da ta l lt h ed e v e l o p m e n t a ls t a g e so f a l lc u l t i v a r s 2 T h ed y n a m i c so f e n d o p h y t i cb a c t e r i aa td i f f e r e n tg r o w t hs t a g e s ：T h ep o p u l a t i o
14、n sa n df l o r ao fe n d o p h y t i cb a c t e r i ai n c r e a s e df r o ms e e dt oe m e r g e n c es t a g e ，q u i c k l y , b u td e c r e a s e db yaw i d em a r g i nf r o me m e r g e n c es t a g et oc r o s s i n gs t a g e ，a n dt h ep o p u l a t i o nd i dn o tv a r ys i g n i f i c
15、a n t l yu n t i lr e c u p e r a t i n gs t a g e D u r i n gr e c u p e r a t i n gs t a g e ，a l lt h eS e V e ng e n e r ao fb a c t e r i a lw e r ed e t e c t e d ，a n dt h ep o p u l a t i o n si n c r e a S e ds h a r p l yf r o mt h i ss t a g e 3 T h ed y n a m i c so fe n d o p h y t i cb
16、 a c t e r i ai nt o b a c c ol O O t S , s t e m sa n dl e a v e s ：3# b _ 坤蝌t 蠢：蕾角睡嗣唧B a c t e r i ap o p u l a t i o nd e n s i t i e sw e r ee x t r e m e l yv a r i a b l ei nd i f f e r e n tt i s s u e s T h er o o t sh a dt h eg r e a t e s tp o p u l a t i o no f e n d o p h y t i cb a c t e r i a ，f o l l o w e db yi ns t e m sa n dl e a v e s t na d d i t i o n ，t h ef l o r ai ns t e m sc o u l db ea l s od e
