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1、1600 Human Oligodendrocyte Precursor Cells 人少突胶质前体细胞少突胶质前体细胞是 Raff、Miller 和 Noble 于 1993 年首次发现，并已进行了深入的研究。 在文献中，前体细胞指少突细胞型星形胶质细胞祖细胞或少突胶质细胞前体细胞。发育中 和成熟的中枢神经系统都含有少突胶质前体细胞。少突胶质细胞，中枢神经系统中的髓磷 脂组成细胞，来源于少突前体细胞。在培养中，少突前体细胞在基本的成纤维细胞生长因 子存在的情况下可产生于神经祖细胞或神经干细胞，OPC 在血小板衍生的生长因子或星形 胶质细胞产生的生长因子存在的情况下才能增殖，并分化成为成熟的少
2、突胶质细胞。正因 如此，它们为研究发育转型提供了特殊的细胞种群。细胞培养说明 注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于 37C 水浴，然后尽快移入培养物中，尽量 减少操作。启封 1.对于冰冻细胞：如果包装箱里干冰，并且你不想立即培养细胞，将冻存管立即放入液氮 中。如果包装箱中没有干冰，立即融化培养细胞2.对于增殖的细胞：用 70%的酒精喷洒培养容器(瓶，板或 slide)以消毒。将细胞放入 37 C，5%二氧化碳培养箱中平衡两小时。细胞平衡好后，更换新鲜培养基。经过以下步骤后开始培养细胞 1.用层粘连蛋白或多聚赖氨酸包被培养容器 少突胶质前体细胞接种在层粘连蛋白或多聚赖氨酸包被的培养瓶中将促进
3、细胞帖壁和神经 突生长(多聚赖氨酸包被：浓度为 2 g/ml 包被培养瓶或培养板 1 小时，然后用无菌水洗 三次)，这一点非常重要。2.培养基的准备：用 70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。 在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。用培养基冲洗每一个 小管以保证添加物全部加入基本培养基中。3.准备培养：为每一支冻存管准备一个 T-75 培养瓶。加入适量的培养基(推荐 20 ml/T-75 培养瓶)，将培养瓶放入 37C，5%二氧化碳培养箱中至少平衡 30 分钟4.融化细胞：将小瓶入入 37C 水浴中，握住并轻轻的旋转小瓶直到完全融化。将小瓶立 刻移
4、出水浴，擦干，用 70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。用 70%的酒精冲洗小 管，擦去多余的酒精。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面。5.用 1ml 移液管在小管内轻轻地重悬细胞，然后转移到平衡过的培养容器中( 一个 T-45 培 养瓶)。推荐接种密度大于 20,000 cells/cm2 注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中 DMSO 残留物对细胞的伤 害大。6.盖好盖子，轻轻地摇晃培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则打开瓶盖。将培养容 器放入培养箱中7.为了得到良好的结果，在培养开始后至少 16 个小时内不要动培养物。第二天更换培养基 以去除残留的 DMSO
5、和未贴壁的细胞，然后每隔一天进行如上操作。培养良好的细胞将呈 现正常的少突胶质前体细胞形态(单极或两极的小且圆亮的细胞体)。传代培养： 1.细胞达到 90%融合时需传代培养2.准备层粘连蛋白或多聚赖氨酸包被的培养瓶3.加热培养基，胰酶/EDTA 消化液，胰酶中和液和 DPBS(磷酸盐缓冲液)到室温。4.用 DPBS 冲洗细胞5.用 5 ml 胰酶/EDTA 消化液消化细胞(T-45 培养瓶)。直到 80%细胞呈圆形(在显微镜下观察)。 立刻加入 3ml 胰酶中和液并轻轻摇晃培养瓶。 注意：使用 ScienCell 实验室的胰酶/EDTA 消化液，会把胰酶消化对细胞的损害减少到最 低。6.收取细
6、胞并将其移入 15ml 离心管中。另外用 3ml 生长培养基冲洗培养瓶以收集残留的细 胞。在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功。剩余细胞数应小于 5%7.以 1000 转离心收取的细胞 5 分钟，然后在生长培养基中重悬细胞8.细胞计数然后将它们接种中新的，多聚赖氨酸包被过的培养瓶中，细胞密度以推荐数值 为准。注意：处理人类来源的产品存在潜在的风险。尽管每一株细胞都经检测艾滋病毒，乙肝病 毒，丙肝病毒呈阴性，检测不能达到 100%准确，因此，必须采取适当的保护措施避免无 意的暴露。操作这些产品时要带手套和安全镜。不要用嘴吸。我们推荐以下通用的程序来 处理人类来源的产品，从而以最小的预防来对抗污染。以上由北京裕恒丰科技有限公司提供http:/
