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1、野菊花中黄酮类化合物的提取方法野菊花中黄酮类化合物的提取方法 【摘要】 目的为充分利用野菊花植物资源，避免资源的浪费，探讨野菊花总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从野菊花中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.659 9 mg/ml，回收率为 101.1%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取野菊花黄酮类物质的有效途径。 【关键词】 超声波提取； 野菊花； 总黄酮； 鉴别bstract：ObjectiveTo make use of the resources of Chrysanthe
2、rmum indicum L. ,avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of Chrysanthermum indicum L. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Chrysanthermum indicum L. with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flava
3、none of Chrysanthermum indicum L.ResultsThe density of the total flavanone of Chrysanthermum indicum L. was C=0.6599 mg/ml and the rate of recovery was 101.1%. The outcome and the purity of the flavanone were all very high. ConclusionThis method is a purely physical process and has not any pollution
4、. It is an ideal way to extract the flavanone of Chrysanthermum indicum L.Key words：Ultrasonic wave treatment; Chrysanthermum indicum L.； Total flavanone； Identification野菊花 Chrysanthermum indicum L.为菊科多年生草本植物菊花脑的头状花序。每到秋季花盛开时采收，经晒干或烘干后，即可入药。野菊花晚秋初冬开花，有黄、白、紫等色，分布于田野，也有人工栽培的。民间多在秋季开花时采后凉干或晒干备用。野菊花可泡茶饮
5、用，但更多的是药用1。中医认为1，野菊花性凉，有疏风清热、解毒消肿、健脑明目等功效，可治疗风热感冒、肺炎、鼻炎、高血压病、支气管炎、咽喉肿痛、目赤模糊、淋巴腺炎、痈疖疔毒、湿疹、皮肤瘙痒、口疮、丹毒等症。现代研究证明1：野菊花是中草药中的“广谱抗生素”，对多数皮肤真菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌和流感病毒等均有较强的抑制作用。近年来又发现野菊花含有丰富的黄酮类化合物，对扩张冠状动脉有良好作用,可用于治疗冠心病、高血压病。其主要成分为黄酮类物质，具有清热解毒、降血压、抗病毒、抑制血小板凝聚等功能，野菊花提取物制成的栓剂，应用于临床对慢性盆腔炎、宫颈糜烂、慢性前列腺炎等有显著疗效2。因此，
6、对其研究也逐渐备受人们的关注。有文献报道野菊花中总黄酮的提取方法采用正交实验2、乙醇提取炮制3，4等方法，但是这些方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道57，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响6。但超声技术应用于提取野菊花中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取野菊花总黄酮及鉴别。1 仪器与试剂1.1 仪器K
7、Q5200DB 型数控超声波清洗器（超声工作频率 40 kHz，昆山市超声仪器有限公司）；UV755B 紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI 型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。1.2 试剂95%乙醇；亚硝酸钠 AR；硝酸铝 AR；氢氧化钠 AR；三氯化铝 AR；盐酸 AR；氨水 AR；乙酸镁 AR；镁粉 AR；正丁醇 AR；冰醋酸 AR；醋酸乙酯 AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；广西百色市人民菜市市售新鲜野菊花。2 方法与结果2.1 总黄酮成分提取取新鲜野菊花，烘干，粉碎。称取野菊花粉末约 6 g，加 80
8、 ml 95%乙醇，超声波提取 2.5 h，抽滤。滤渣再加 80 ml 95 %乙醇，超声波提取 2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩 25 ml 左右为止，放置 250 ml容量瓶中，用 60%乙醇稀释至刻度，得样品液。2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定野菊花中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜 pH 值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。2.3 定量实验-总黄酮的含量测定2.3.1 波长的选择取样品液适量，在 0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在 420700 nm 波长范围测定络
9、合物的吸光度，络合物于 510 nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml 于 10.00 ml 容量瓶中，分别加入 5%亚硝酸钠溶液 0.30 ml，摇匀，静置 6 min；再加 10%硝酸铝溶液 0.30 ml，摇匀，静置 6 min；再加4%氢氧化钠溶液 4.00 ml，用 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 12 min，以试剂作空白参比液，于 510 nm 处测吸光度。结果见表 1。表 1 紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度（略）根据上
10、表得回归方程：A=-0.031 10+13.52C，r=0.999 9。2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液 0.50 ml，置 10 ml 容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度 A=0.415，根据回归方程：A=-0.031 10+13.52C，计算样品中总黄酮的含量 C=0.659 9 mg/ml。 2.3.4 回收实验精密量取样品液 2.00 ml，加入标准芦丁对照品 2.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为 101.1% 。2.4 定性实验-总黄酮的鉴别2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，
11、在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏 30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加 1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液 1ml 于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1 次加入），在泡沫处呈紫红色。2.4.2 纸层析取样品溶液 10 l 点在滤纸上。用正丁醇醋酸水=415（体积比）为展开剂，上行展开 5 h，取出晾干。喷 1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫
12、外光下，可见荧光斑点。3 讨论3.1 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为 101.1%，提取效率高于传统方法，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度和产率均较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。3.2 黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等8。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其它脏器细胞的功能。 黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用914。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，野菊花分布广泛，本文实验结果表明，野菊花中含有较为丰富的黄酮。因此，野菊花具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。
