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1、目录目录摘要.1 关键词.1 前言.2 1 材料与方法.2 1.1 试验材料.21.1.1 被检血清.21.1.2 诊断液.21.1.3 主要仪器.21.1.4 检测方法及判定标准.21.2.试验方法.31.2.1 虎红平板凝集试验. .31.2.2 虎红平板凝集抗原的制备.31.2.3 缓冲液及虎红染料的配制.31.2.4 缓冲液.31.2.5 虎红感染液.31.2.6 虎红平板凝集试验（RBPT）方法.31.3 试管凝集反应.31.3.1 待检血清的稀释.31.3.2 加抗原.3 2 结果与分析.3 3.讨论. 43.1 检测结果.43.2 应对措施.4 谢辞.5 参考文献.6 布病血清学
2、检测记录表.71布氏杆菌病血清学调查布氏杆菌病血清学调查牙生.尤努斯 摘要：摘要：布氏杆菌是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病。在家畜中,牛,羊,猪最常发生.并且可以由牛,羊和猪传染给人和其它家畜.其特征是生殖器官和胎膜发炎，引起流产，不育和各种组织的局部病灶。布氏杆菌病广泛存在于世界各地,给畜牧业和人类健康带来严重的危害。2009年4月在新疆维吾尔自治区动物疾病控制中心实习过程中对哈密市，伊吾县204份牛，羊（100份）血清用布氏杆菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验方法进行血清学检查，初筛试验虎红平板凝集12分牛血清为阳性,正式试验试管凝集方法12分牛血清为阴性。关关键键词词 ：布鲁氏菌病；虎红
3、平板凝集试验；试管凝集试验2前言布鲁氏杆菌病，起初叫法不统一，有许多的名称：有按学者名称叫的。如 布鲁氏杆菌病，斑格氏病，有按地区起名叫的，如马尔他热，地中海热，地中 海弛张热:有按临床表现命名的，如波张热，波浪热，浪热病，懒汉病；有按兽 名叫的，如羊儿病，山羊热；还有的按病原学叫的，如布氏杆菌病。实际上这 些名称都不够合适，因为本病不是地中海的地方病。大量的临床资料统计，具 有典型波浪热的患者只占20%，不仅山羊的病，绵羊同样也能患病,布鲁氏杆菌 属于革兰氏阴性菌，无芽胞，抵抗力和其他不能产生芽胞的细菌相近。1%来苏 尔或2%福尔马林或5%生石灰乳均可杀死。直射阳光0.54小时杀死。在干燥的
4、 土壤内37天死亡，在冷暗处、胎儿体内可活6个月，在粪水中的存活力很强。 布氏菌是 1886 年英国医生布鲁氏在马尔他岛死于地中海热的尸体脾脏标本 上用显微镜观察到大量的微小菌体。1887 年布鲁氏首先成功的分离到病原体的 的纯培养，命名为马尔他球菌，即羊种布氏菌，自此时带来了对该病的系统研 究。布病是有布氏杆菌属所引起的一种人蓄共患产染病，呈急性经过，易于过 渡到慢性，临床上以发热，骨关节或肌肉疼痛以及脏器的损害与经常复发为特 征。 传染源:病畜及带菌者.最危险的是受感染的妊娠母畜,它们在分娩和流产时将大 量的布鲁氏菌随着胎儿,胎水和胎衣排出.此外, 布鲁氏菌也可以通过精液,乳汁, 尿液感染
5、.人的传染源主要是患病动物,一般不由人传染给人。 传播途径：主要是消化道，如饲料和水.还可以经过皮肤感染,另外,其可通过结 膜，交媾感染，吸血昆虫也可传播本病。 易感动物：易感动物范围很广，涉及几乎所有家畜以及一些啮齿动物，但主要 是羊,牛,和猪.流产布氏杆菌的宿主主要是牛,马尔他布氏杆菌的宿主是绵羊和山 羊.猪布氏杆菌的宿主是猪,而狗布氏菌主要侵犯狗.另外,动物的易感性随性成熟 年龄接近而增高。 流行特点：在我国,人感染严重的地区是羊布氏杆菌病多发的地区.一般牧区人的 感染率要高于农区，有明显的职业特征:只要与患病动物的毛,皮,乳肉,血液等接 触频繁的人员发病率要高的多。1 材料与方法1.1
6、 试验材料1.1.1 被检血清从哈密市，伊吾县家畜中采集血清,其中牛血清 104 份,羊血清 100 份,其余 牛,羊血清各县提前采集并保存冰箱待检。1.1.2 诊断液布鲁氏菌病标准阳性血清,阴性血清,平扳凝集抗原(虎红),试管凝集抗原,购 自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。1.1.3 主要仪器平面玻璃扳,中试管,玻璃吸管,恒温培养箱。1.1.4 检测方法及判定标准:3按照中华人民共和国国家标准动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T186462002 内规定的虎红平扳凝集试验和试管凝集试验。1.2 试验方法1.2.1 虎红平板凝集试验它是一种半定量的凝集反应试验。所用抗原是用虎红（四氯四碘荧光
7、素） 色素染成的一种酸性抗原，具有克服非特异性反应，对检查小分子抗体 lgG 较 为敏感的特点。1.2.2 虎红平板凝集抗原的制备1.2.3 缓冲液及虎红染料的配制1.2.4 缓冲液称取氢氧化钠 12 克，加如含有 0.5%石炭酸的生理盐水 200 毫升，待溶解 后加入 54 毫升浓硫酸，并用 0.5%石炭酸生理盐水补足至 6，000 毫升。1.2.5 虎红染液虎红有钠盐钾盐两种，本试验以用钠盐者为佳。虎红钠盐分子式： C20H2O5I4Na2,分子量为 1017.718 染料配制：称取虎红纳盐 0.4 克，加入 38.6 毫升的灭菌蒸馏水中，充分混匀， 置 40C 冰箱保存备用。1.2.6
8、虎红平板凝集试验（RBPT）方法在清洁的玻片上加 0.03 毫升的受检血清，然后在加入标化抗原悬液 0.03 毫 升，使充分混匀，在 4 分钟内观察结果，以出现可见的凝集反应为阳性。 1.3 试管凝集反应1.3.1 待检血清的稀释一般待检血清用生理盐水稀释至 1：25，1：50，1：100，1：200，1：400 及 1：800等。 稀释方法是，第一管取 0.1 毫升血清加入 2.4 毫升生理盐水内.混匀后取 0.5 毫升加入第二管（第二管及其余下管均含 0.5 毫升生理盐水）作 1：1 稀释，以 后各管以此类推。第一管内还应取 0.5 毫升加入另一含有 0.5 毫升生理盐水的 管内作血清对照
9、。第一管内剩下 0.5 毫升为试验用，而多余的 1.0 毫升应弃去。1.3.2 加抗原 将已稀释适当浓度的试管凝集抗原，除作血清对照管外，各管均加入 0.5 毫升抗原稀释液摇匀，放在 370C 温箱中 24 小时观察结果。加入抗原血清稀释 度依次为 1：50，1：100，1：200，1：400，1：800，1：1600等。 除每份待检血清需作 1 个血清对照，以排除血清的自然凝集外，每次试验尚需 要 1 个抗原对照，以排除所用抗原的自然凝集。42 结果与分析判定凝集反应程度，主要视凝集管内上清夜透明度和参考下沉的凝集快， 而以产生 50%凝集的（+凝集程度）血清最大稀释度为受检血清的效价。在必
10、 要时应配制凝集反应程度的标准管。 人，牛，马及骆驼的待检血清的凝集价在 1：100（+）以上者为阳性， 1：50（+）为可疑；绵羊，山羊，猪及犬的待检血清，在 1：50（+）以上为 阳性，1：25（+）为可疑。对可疑反应的人或动物应在 1020 天内在重复检查， 以进一步确定诊断结果。 初步做虎红平板凝集实验12份牛血清为阳性，其余全部为阴性；试管凝 集试验12份血清全部为阴性见附录。3 讨论3.1 检测结果 本次调查是在血清学检测,细菌分离培养的基础上对哈密市，伊吾县家畜布 病进行调查和采样。其中检菌没有分离到布鲁氏菌,检测血清,平均阳性率上述各 县分别为 0.5%和 0.1%。调查证实布
11、病在哈密市，伊吾县部分地方确实存在,但 是感染程度较低。 3.2 应对措施 根据流行病学调查情况,按照动物防疫法有关规定,我们现有的布病综合 防治基础上要加强以下方面的工作。首先要家畜布病免疫率要达到 100%。加强 产地检疫、屠宰检疫、公路检疫和外地牲畜调运检疫等工作。完善免疫档案管 理制度。检测任务要及时地根据存栏数变动情况来调整和增加数量。病畜要及 时地按有关法律规定进行无害化处理,净化畜群消灭病源。5谢谢 辞辞本论文是在恩师阿哈提老师的亲切关怀和悉心指导下完成的。 完成之际，真诚地感受到指导老师给予我的帮助和心血，使我从中获益并顺利 完成论文、老师们的严肃认真的态度使我受用终生，严谨的
12、学术作风、务实的 工作 作风也使我毕业生难忘，在此表示崇高的敬意和诚恳的感谢。此外，要特别感 谢我的班主任雷程红老师和我班同学在多年之中给我的关心,帮助和支持表示深 深的谢意。 实习是把理论在劳动中得以验证与应用的过程，我在学习过程中学到的这 些都是我在真正的课堂学习中未曾学到的，我想这个实习过程对我以后的工作 都有不可估计的引导作用，我一定会更加努力学习专业技能。在此我特意向阿 哈提老师表示深深的谢意。要感谢我最敬爱的父母和家人，在这五年的学习生 涯中，他们在我身后默默的支持和关爱我，使我能够有信心的面对一切。 最后，在我的大学生活中指导教育过的老师们和帮助过我的同学们说一声： “谢谢” ，祝你们工作顺利，万事如意。祝愿所有的父母身体健康6参考文献：参考文献： 1吴家兵,叶临湘,尤尔科.ARIMA 模型在传染病发病率预测中的应用J.数理医药学杂志,2007,20(1):90-92. 2党开放,杨利彪,戴莺莺,等.新型广义径向基函数神经网络结构研究J.计算机工程与设 计,2007,28(12):2 911-
