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1、实训二、葡萄糖标准曲线的绘制一、实训目的1、了解 DNS 法测定还原糖的基本原理2、通过 DNS 法测定还原糖的含量，建立吸光度与还原堂含量之间的线形关系，用于后续纤维素酶酶活性的测定3、通过定量操作，让学生形成准确称量、测定的理念。二、实训原理具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与 DNS 试剂发生显色反应。反应液颜色的强度（吸光度 OD 值）与还原糖量（此处即为葡萄糖量）成正比关系。三、实训方法1、DNS 溶液的配制称取 3，5二硝基水杨酸 3.15g(化学纯)，加水 500ml，搅拌 5s，水浴至45，然后逐步加入 100ml 氢氧化钠溶液（称取氢氧化钠 20.0g，
2、加水溶解，定容到 100ml） ，同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入过程中，溶液温度不要超过 48） 。再逐步加入四水酒石酸甲钠 91g，苯酚 2.50g 和无水亚硫酸钠 2.50g。继续 45水浴加热，同时补加水 300ml，不断搅拌，直到加入的物质全部溶解。停止加热，冷却到室温后，用水定容到 1000ml，用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放 7d 后可以使用，有效期为 6 个月。（笔者注：在处理酸、碱和配制 DNS 试剂时，请尽可能戴上保护眼镜和乳胶手套，实验应在通风橱或通风良好的房间进行。一旦皮肤或者眼睛接触了上述物质，应及时用大量的清水冲洗）2
3、、 0.1葡萄糖标准液准确称取 100mg 分析纯的葡萄糖（预先在 105干燥至恒重） ，用少量蒸馏水溶解后定容至 100ml，保存于冰箱中备用。3、葡萄糖标准曲线的绘制取 9 支具塞刻度试管，分别按表 1 顺序加入各种试剂。表 1 试剂加入顺序管号项目空白 12345678含糖量(mg)葡萄糖（ml）蒸馏水（ml）DNS 液(ml)002.030.20.21.830.40.41.630.60.61.430.80.81.231.01.01.031.21.20.831.41.40.631.61.60.43将上述各试剂依次混匀后，在沸水浴中加热 10min，然后立即用流动冷水冷却，每个试管加蒸馏水至 25ml 刻度线，充分混匀后，用空白管溶液调零点，在 UV751GD 紫外/可见分光光度计（540nm）处测吸光度。以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。四、结果记录与分析处理1、测定不同葡萄糖含量的 OD 值，建立以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标的关系式，要求用计算机作图，求出具体的线形关系式，同时相关系数 R 值不得低于 0.99752、每根试管要求测定两次，两个数据之间的绝对差值不得超过算术平均值10%。变异系数不超过 10%。3、学会分析数据，当所做线形关系不符合要求时，能作出自己的分析和判断
