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1、实实验验报报告告课程名称：课程名称：生物化学实验（甲）生物化学实验（甲） 指导老师：指导老师： 成绩：成绩：_同组学生姓名：同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填）一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得八、讨论、心得用正交法测定几种因素对蔗糖酶活性的影响用正交法测定几种因素对蔗
2、糖酶活性的影响1、实验目的和要求：实验目的和要求：1. 初步掌握正交试验设计法的使用；初步掌握正交试验设计法的使用；2. 运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度和运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度和 pH 值这四种因素对酶活力的影响。值这四种因素对酶活力的影响。2、实验内容和原理：实验内容和原理：酶的催化作用是在一定条件下进行的，它受多种因素的影响，如酶浓度、底物浓度、温度、酶的催化作用是在一定条件下进行的，它受多种因素的影响，如酶浓度、底物浓度、温度、 pH 值、抑制剂和激活剂等都能影响酶催化的反应速度。通常在其他因素恒定的条件下，通过某值、抑制剂和激活剂等都能影响酶催化的反应速度。通常在其
3、他因素恒定的条件下，通过某一因素在一系列变化条件下的酶活性测定求得该因素的影响，这是单因素的试验方法。对于多因一因素在一系列变化条件下的酶活性测定求得该因素的影响，这是单因素的试验方法。对于多因素的试验可以通过正交试验设计法来完成。正交法是借助于正交表，简化的表格计算，正确分析素的试验可以通过正交试验设计法来完成。正交法是借助于正交表，简化的表格计算，正确分析专业：专业： 姓名：姓名： 学号：学号： 日期：日期： 地点：地点： 装 订 线结果，找到实验的最佳条件，分清因素的主次，这样就可以通过比较少的实验次数达到好的实验结果，找到实验的最佳条件，分清因素的主次，这样就可以通过比较少的实验次数达
4、到好的实验效果。效果。本实验运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度、本实验运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度、pH 值这四个因素对酶活性的影响，并求值这四个因素对酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、酶浓度、温度和得在什么样的底物浓度、酶浓度、温度和 pH 值时酶的活性最大。值时酶的活性最大。正交表正交表 Ln（ tq）L 正交表的代号正交表的代号n 处理数（试验次数）处理数（试验次数）t 水平数水平数q 因素数因素数合适的正交表，是指要考察的因素的自由度总和，应该不大于所选正交表的总自由度。合适的正交表，是指要考察的因素的自由度总和，应该不大于所选正交表的总自由度。本实验中：本实验中：试验
5、次数试验次数 n = q( t1 )+1= 4（31）+19总自由度总自由度 V 总总= n-1各列自由度各列自由度 V列列 = K（该列水平数）（该列水平数）1本实验选用四个因素，每个因素选三个水平，四个因素各占一列，那么四个因素的自由度分本实验选用四个因素，每个因素选三个水平，四个因素各占一列，那么四个因素的自由度分别为：别为：V1 = 31 = 2， V2 = 31 = 2， V3 = 31 = 2， V4 = 31 = 2。四个因素的自由度总和四个因素的自由度总和 = V1 + V2 + V3 + V4 = 8因为各因素自由度总和是因为各因素自由度总和是 8，它没有超过，它没有超过 L
6、9（34）的总自由度）的总自由度= 91 = 8。所以选择正交表。所以选择正交表L9（34）是适合的。）是适合的。正交表都应具有以下两个特性：正交表都应具有以下两个特性：（1）在每一列中，各水平出现的次数相等。即在任何一列中，数字）在每一列中，各水平出现的次数相等。即在任何一列中，数字 1 和数字和数字 2 和数字和数字 3 都出都出现三次（几个水平就均出现几次）。现三次（几个水平就均出现几次）。（2）任何两列中，横行组成的数对出现次数相等，均出现一次）任何两列中，横行组成的数对出现次数相等，均出现一次以上这些特点保证了用正交表安排的试验计划是均衡搭配的，因此分析数据比较方便，可进以上这些特点
7、保证了用正交表安排的试验计划是均衡搭配的，因此分析数据比较方便，可进行综合比较，结果比较可靠。行综合比较，结果比较可靠。3、实验材料与试剂：实验材料与试剂：1、实验材料、实验材料蔗糖酶溶液（样品蔗糖酶溶液（样品1:10 稀释）稀释）2、实验试剂、实验试剂 5%蔗糖（蔗糖（A.R.）溶液（）溶液（W/V）；）； 0.2mol/L 乙酸缓冲液，乙酸缓冲液，pH3.6、4.6、5.6； 3,5二硝基水杨酸试剂。二硝基水杨酸试剂。4、实验器材与仪器：实验器材与仪器：1. 试管及试管架；试管及试管架；2. 吸量管；吸量管；3. 恒温水浴箱恒温水浴箱 （37、50、65、100 ）；）；4可见光分光光度计
8、。可见光分光光度计。5、操作方法和实验步骤：操作方法和实验步骤：1、实验设计、实验设计（1）确定试验因素和水平）确定试验因素和水平本实验取四个因素，即底物浓度本实验取四个因素，即底物浓度S、酶浓度、酶浓度E、温度、温度、pH 值。每个因值。每个因素选三个水平，实验因素和选用水平如表素选三个水平，实验因素和选用水平如表 1。表表 1 因素、水平表因素、水平表水平水平因素因素【S】（ml）【E】（ml）温度温度（）pH10.51.0503.6 20.20.6375.6 30.80.2654.6（2）选择合适的正交表选择合适的正交表（3）在所选的正交表上进行表头设计在所选的正交表上进行表头设计表表
9、2 表头设计表头设计实验号实验号水平水平因素因素1【S】2【E】3温度温度4 pH11111 21222 31333 42123 52231 62312 73132 83213 933212、试验安排试验安排表表 3 实验安排表实验安排表试剂试剂试验号试验号2491683575%蔗糖溶液蔗糖溶液（ml）0.50.20.80.50.20.80.50.20.80.2mol/L 乙酸缓乙酸缓冲液冲液 （ml）pH5.6 1.0pH4.6 1.0pH3.6 1.0pH5.6 1.0pH4.6 1.0pH3.6 1.0pH5.6 1.0pH4.6 1.0pH3.6 1.0蒸馏水蒸馏水 （ml）0.90.
10、81.00.51.60.61.31.20.237预温预温 5min50预温预温 5min65预温预温 5min蔗糖酶溶液蔗糖酶溶液 （ml）0.61.00.21.00.20.60.20.61.0温度温度 （）37反应反应 10min50反应反应 10min65反应反应 10minDNS （ml）111111111沸水浴沸水浴 5min蒸馏水蒸馏水 （ml）555555555A520nm 另取试管一支作非酶对照：加另取试管一支作非酶对照：加 5%蔗糖溶液蔗糖溶液 0.5ml，缓冲液，缓冲液 1.9ml。先加。先加 DNS 1ml 摇匀室温放摇匀室温放置置 5 分钟后再加入蔗糖酶溶液分钟后再加入蔗
11、糖酶溶液 0.6ml 摇匀室温放置摇匀室温放置 10 分钟，分钟，1005min，再加入蒸馏水，再加入蒸馏水 5ml，混匀后在混匀后在 520nm 处测光密度值。处测光密度值。6、实验数据记录和处理：实验数据记录和处理：实验号实验号 水平水平因素因素1【S】ml2【E】ml3温度（温度（）4pH 值值实验结果实验结果A520nm11 0.51 1.01 501 3.6 21 0.52 0.62 372 5.6 31 0.53 0.23 653 4.6 42 0.21 1.02 373 4.6 52 0.22 0.63 651 3.6 62 0.23 0.21 502 5.6 73 0.81 1
12、.03 652 5.6 83 0.82 0.61 503 4.6 93 0.83 0.22 371 3.6 I（一水平实验结果总和）（一水平实验结果总和）II（二水平实验结果总和）（二水平实验结果总和）III（三水平实验结果总和）（三水平实验结果总和）I/3 II/3III/3 极差极差分析表格中的数据可知：分析表格中的数据可知：各因素对酶活力影响程度的大小为各因素对酶活力影响程度的大小为且蔗糖酶反应的最佳条件为：且蔗糖酶反应的最佳条件为：7、实验结果与分析：实验结果与分析：8、讨论、心得：讨论、心得：1、为了使得反应液的为了使得反应液的 OD 值在一个比较合适的范围内，可以先做一组预实验，预
13、实验的各个因素值在一个比较合适的范围内，可以先做一组预实验，预实验的各个因素都应该是理论上的最佳条件，测得的都应该是理论上的最佳条件，测得的 OD 值最好在值最好在 1.6 左右，假如左右，假如 OD 值过高或者过低，则调整值过高或者过低，则调整蔗糖酶溶液浓度。蔗糖酶溶液浓度。2、试剂加样应准确，各管反应时间一定要一致，加入试剂加样应准确，各管反应时间一定要一致，加入 DNS 应该摇匀，以达到完全终止酶促反应应该摇匀，以达到完全终止酶促反应的目的。的目的。3、在测定吸光值的时候，要将各样品液摇匀，并且要设置一非酶对照，而不能取蒸馏水作为对照。在测定吸光值的时候，要将各样品液摇匀，并且要设置一非酶对照，而不能取蒸馏水作为对照。4、在进行数据处理时要仔细，避免出错。在进行数据处理时要仔细，避免出错。
