《分子佐剂C3d3增强hCGβDNA和粘膜疫苗体液免疫效应的机制》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子佐剂C3d3增强hCGβDNA和粘膜疫苗体液免疫效应的机制（90页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、复旦大学博士学位论文分子佐剂C3d3增强hCGDNA和粘膜疫苗体液免疫效应的机制姓名：贺晓菊申请学位级别：博士专业：妇产科学指导教师：李大金20070416英文绍略语D A GR G ST C RM A L T G mB A L TP PD CA P CD i a c y l 9 1 y c e r 0 1R e g u l a t o r so f G p r o t e i ns i g n a l i n gTc e l lr e c e p t o rM u c o s aa s s o c i a t e dl y m p h o i dt i s s u eG u t a s s
2、o c i a t e dl y m p h o i dt i s s u eB r o n c h u s - a s s o c i a t e dl y m p h o i dt i s s u eP e y e r Sp a t c h e sD e n d r i t i cc e l la n t i g e n - p r e s e n t i n gc e l l s甘油二脂G 一蛋白信号调节子T 细胞抗原受体粘膜相关淋巴组织肠道粘膜相关淋巴组织呼吸道粘膜相关淋巴组织派伊尔氏结节树突状细胞抗原提呈细胞论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文
3、中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示r 嘲意。作者签名论文使用授权声明E 期翻7 、己V本人完全T 解复旦大学有关保留、使用学位论文的规守，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文：在解密后遵守此规定。作者签名日期：旱五二j垃一啤中文摘要分子佐剂C 3 d 3 增强h C C l jD N A 和粘膜疫苗体液免疫效应的机制中文摘要研究背景基于h C G l 3 的避孕疫苗，是目前唯
4、一完成I I 期临床试验的避孕疫苗。但尚面临许多困难，必须寻找更理想的载体、分子佐剂，合适的免疫途径，以增强它的免疫原性，提高其避孕效果。C 3 d 分子通过与B 细胞表面C D 2 1 分子的直接结合而发挥生物学作用，因此C 3 d 作为分子佐剂，为解决人群中的个体差异创造机遇，并恰好符合避孕疫苗追求体液免疫效应的目标。本实验室在以往的研究中，将C 3 d 3 与h C G p 基因融合，成功构建了h c G pD N A 疫苗p C M V 4 - h C G p C 3 d 3 ，h C G 3 粘膜疫苗L b h C G p - C 3 d 3 。并且证明分子佐剂C 3 d 3可明显增
5、强避孕疫苗的体液免疫效应及抗生育作用。但这两种疫苗作用的分子机制尚不明了，分子佐剂C 3 d 3 的作用机制尚不清楚。目的本研究用h C G l 3 D N A 疫苗和h C G B 粘膜疫苗分别经小鼠肌肉注射免疫和阴道粘膜接种，观察这两种疫苗在小鼠全身和生殖道局部的抗h C G 3 体液免疫效应，观察分子佐剂C 3 d 3 对免疫反应的作用；分析A S C 表面和组织局部的趋化因子受体和粘附分子配体受体，探讨A S C 游走以及A S C 归巢至生殖道的分子机制，以解析h C G p D N A 疫苗和粘膜疫苗的抗生育作用。分子佐剂C 3 d 3 通过上调B 细胞C X C R 4 和C D
6、 6 2 L 的表达及促进A S C 游走而增强h C G I D N A 疫苗体液免疫效应方法将h C G 3 D N A 疫苗p C M V 4 - h C G 5 C 3 d 3 、p C M V 4 - h C 哪和p C M V 4 分别肌肉注射B A L B c 小鼠。问接E L I S A 法测定抗h C G B 血清阴道灌洗液抗体效价：E L I S P O T 分析小鼠脾脏和子宫的抗体分泌细胞；R T - P C R 分析小鼠脾脏B 细胞1 7种趋化因子受体及脾脏组织中相关配体的转录；F C M 分析C X C R 4 蛋白水平；E L I S A 检测C X C L l 2
7、 的分泌；趋化试验观察C X C L l 2 对外周血B 细胞的趋化作用；迁移试验观察C X C L l 2 趋化各免疫组脾脏局部B 细胞，再E L I S P O T 检测趋化下来的A S C 数目；F C M 分析脾脏局部B 细胞粘附分子C D 6 2 L V u v L F A 的表达；免疫组化分析脾脏相关粘附分子受体M A d C A M N C A M I C A M 的表达。结果在D N A 免疫中，p C M V 4 - h C O p C 3 d 3 产生抗h C G BI g O 血清抗体明显高中文摘要于p C M V 4 - h C G p ；抗h c G pl g A 血
8、清抗体两组无明显差异；p C M V 4 h c G B C 3 d 3产生的阴道灌洗液抗h C G 3I g G n g A 抗体水平较低，与p C M V 4 一h c G B 比较无明显差异；p C M V 4 h C G B - C 3 d 3 脾脏抗h C G pI g G A S C 明显高于p C M V 4 - h C O B ，脾脏I g A A S C 与子宫I g ( 3 I g A A S C 两组间无明显差异。经D N A 免疫后，脾脏B 细胞C X C R 4 在p C M V 4 - h C G p C 3 d 3 和p C M V 4 - h C G l 3免疫
9、后明显升高，且p C M V 4 - h C G p - C 3 d 3 明显高于p C M V 4 - h C G f I ；C X C R 4 的配体C X C L l 2 在粘膜免疫后脾脏组织中亦明显升高，但p C M V 4 - h C G B C 3 d 3 与p C M V 4 - h C G 3 无明显差异。因此，C 3 d 3 能显著上调脾脏A S C 表达C X C R 4 ，但并不能明显提高脾脏局部C X C L l 2 的表达。趋化试验提示，p C M V 4 _ h C G B 和p C M V 4 - h C G 3 一C 3 d 3 脾脏组织上清均能明显趋化外周血B
10、 细胞，但两组间无明显差异，抗S D F - 1 抗体可部分阻断趋化作用。迁移试验结果显示，S D F 1 能明显趋化p C M V 4 - h C O p - C 3 d 3 和p c M V 4 一h C O f l 组脾脏局部的B 细胞，且o C M V 4 - h C G f l C 3 d 3 组趋化的B 细胞明显比p C M V 4 - h C G j 组多，加用抗C X C R 4抗体后，S D F 1 对免疫组脾脏B 细胞的趋化作用与对照组无明显差异，用被趋化的B 细胞作E L I S P O T ，p C M V 4 - h C G 3 C 3 d 3 组A S C 明显多于
11、p C M V 4 - h C G D 组，说明C 3 d 3 升调节A S C 表达C X C R 4 ，增加A S C 对C X C L l 2 的反应性，促进A S C游走。F C M 分析脾脏B 细胞粘附分子发现，在各免疫组L F A 和V L A 表达较低，且各组间无明显差异，而C D 6 2 L 在各免疫组均有表达，p C M v 4 - h C G B 3 d 3 和p C M V 4 - h C G f l 组明显高于对照组，且p C M V 4 - h C C 邛C 3 d 3 组显著高于p C M V 4 - h c G B 组。免疫组化分析脾脏相关粘附分子受体发现，M A
12、 d c M ，、r C A M ，I C A M 在各免疫组均有表达，但各组间无明显差异。结论h C G B D N A 疫苗主要在全身产生体液免疫应答。C 3 d 3 能增强系统性体液免疫效应。D N A 疫苗促进A S C 高表达c x C R 4 、C D 6 2 L ，增加对C X C L l 2 的反 应性，通过C D 6 2 眦d C J 州的相互作用，有利于A S C 游走。分子佐剂c 3 d 3 通过上调B 细胞C C R 9 和V L A 的表达及促进A S C 归巢而增强h c G 肛粘膜疫苗体液免疫效应方法将重组乳酸杆菌L b p I l a c 、L b h C G
13、B 、L b h C G p - C 3 d 3 分别经阴道接种B A L B c小鼠。间接E L I S A 法测定抗h C G p 血清阴道灌洗液抗体效价；E L I S P O T 分析小鼠脾脏和子宫的抗体分泌细胞；R T - P C R 分析子宫B 细胞1 7 种趋化因子受体及子宫组织中相关配体的转录；F C M 分析C C I L O 蛋白水平；E L I S A 检测C C L 2 5 的分泌；趋化试验观察C C L 2 5 对外周血B 细胞的趋化作用；迁移试验观察C C L 2 5 趋化各免疫组子宫局部B 细胞，再E L I S P O T 检测趋化下来的A S C 数目；F C
14、 M 分析2中文摘要子宫局部B 细胞粘附分子C D 6 2 洲L 饥F A 的表达；免疫组化分析子宫相关粘附分子受体M A d C A M V C A M I C A M 的表达。结果在粘膜免疫中，L b h C G p C 3 d 3 免疫组血清抗h C G 3I g O 抗体水平明显高于L b h C G 3 组；血清抗h C G BI g A 抗体两组无明显差异；L b h C G 3 C 3 d 3 免疫组阴道灌洗液抗h C G pI g G 及I g A 抗体比L b h C G p 明显增高。L b h C O 3 一C 3 d 3 和L b h C G 3 免疫组脾脏抗h C G
15、 l BI g G I g A A S C 无明显差异：L b h C G l 3 - C 3 d 3 免疫组子宫抗h C G pI g G 及I g A A S C 均明显高于L b h C G B 组。经粘膜免疫后，子宫局部B 细胞C C R 9 在L b h C 6 p 和L b h C G B C 3 d 3 免疫后明显升高，且L b h C G 3 - C 3 d 3 明显高于L b h C G 3 ；C C R 9 的配体C C L 2 5 在粘膜免疫后子宫组织中明显升高，但L b h C G t M 3 d 3 与L b h c G B 无明显差异。说明C 3 d 3能显著上调子
16、宫局部B 细胞表达C C R 9 ，但不能明显提高子宫局部C C L 2 5 的表达。趋化试验显示：L b h C G 1 和L b h C G l 3 - C 3 d 3 免疫组子宫组织上清均能明显趋化外周血B 细胞，但是两组间无明显差异，加用T E C K 抗体可部分阻断趋化作用。迁移试验结果显示，T E C K 能明显趋化L b h C G 3 和L b h C G 3 C 3 d 3 组子宫局部的B细胞，且L b h C G p C 3 d 3 组趋化的B 细胞明显比L b h C G p 组多，用被趋化的B 细胞作E L I S P O T ，L b h C G p C 3 d 3 组A S C 明显多于L b h C G p 组。说明C 3 d 3 升调节A S C 表达C C R 9 ，通过C C R 9 C C L 2 5 相互作用，增加A S C 归巢到
