《MMP2，MMP9和TIMP2启动子区基因多态性与侵袭性牙周炎相关性的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《MMP2，MMP9和TIMP2启动子区基因多态性与侵袭性牙周炎相关性的研究（103页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第四军医大学博士学位论文MMP-2，MMP-9和TIMP-2启动子区基因多态性与侵袭性牙周炎相 关性的研究姓名：陈栋申请学位级别：博士专业：口腔临床医学（口腔内科学）指导教师：吴织芬20070501第四军医大学博士学位论文第四军医大学博士学位论文 缩略语缩略语 英文全称英文全称 中文全称中文全称 KD Kilodalton 千道尔顿 L-AgP localized aggressive periodontitis 局限型侵袭性牙周炎 LOD logarithm of the odds 优势对数法 MMPs matrix metalloproteinases 基质金属蛋白酶 OD optical
2、 density 光密度 OR odds ratio 比值比 PMN polymorphonuclear leukocytes 中性多形核白细胞 PPD probing pocket depth 牙周袋探诊深度 RFLP restriction fragment length polymorphism 限制性片段长度多态性 SBI sulcus bleeding index 龈沟出血指数 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 SNP single nucleotide polymorphism 单核苷酸多态性 Sp specificity protein 特异性
3、蛋白 T thymine 胸腺嘧啶 TIMPs tissue inhibitors of metalloproteinases 组织金属蛋白酶抑制剂 2 独独独独 创创创创 性性性性 声声声声 明明明明 秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者
4、签名： 日期： 保保保保 护护护护 知知知知 识识识识 产产产产 权权权权 声声声声 明明明明 本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外） ，可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。 论文作者签名： 导师签名： 日期： 第四军医大学博士学位论文第四军医大学博士学位论文 MMP-2,MMP-9 和和 TIMP-2 启动子区
5、基因多态性启动子区基因多态性 与侵袭性牙周炎相关性的研究与侵袭性牙周炎相关性的研究 博士研究生：陈 栋 导 师：吴织芬 教授 第四军医大学口腔医学院牙周黏膜病科 西安 710032 中文摘要中文摘要 牙周病是一类涉及到细菌微生物侵犯和宿主反应等因素影响的常见病之一；细菌是牙周炎的始动因素，但是细菌的作用可能会被宿主反应不同所改变。侵袭性牙周炎是常发生在全身健康的青少年和年轻成年人、以牙周支持组织快速降解破坏为特征的一类牙周炎；大量的遗传学研究认为罹患侵袭性牙周炎的个体涉及遗传易感因素。 迄今大多数遗传基因易感因素和牙周病相关性研究主要采用候选基因多态性(polymorphisms)的关联研究；
6、已有研究多关注免疫系统和炎性因子的基因，包括白介素-1(IL-1)，人类白细胞抗原（HLA） ，维生素 D 受体，Fc 受体等基因；实际上炎性因子刺激宿主细胞产生过量的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)，最终导致了牙周组织的降解和破坏。MMPs 家族是由 20 多种锌离子依赖性内切酶组成， 在胚胎发育、 炎症反应和肿瘤侵袭转移等中发挥重要作用；尤其在炎症反应中加速白细胞募集、细胞因子释放和促进基质降解改建。明胶酶是 MMPs 家族的主要成员，包括 MMP-2(明胶酶A)和 MMP-9(明胶酶 B)；它们作用底物广泛，包括 IV 型胶原、明胶、弹性蛋
7、白等。MMP-2 主要由成纤维细胞、内皮细胞和破骨细胞表达；MMP-9 主3 第四军医大学博士学位论文第四军医大学博士学位论文 要由中性粒细胞、巨噬细胞和单核细胞产生。MMPs 的表达活化受到转录调控、底物特异性、内源性抑制剂组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs)三方面的平衡调节。大量临床研究证实在牙周炎活跃期的龈沟液、 牙龈中包括 MMP-2、 MMP-9 在内的 MMPs 水平明显升高，MMPs/TIMPs 比例失衡。 近年来国内外学者发现在不同种族中 MMP-1 启动子区的单核苷酸多态性(single nucle
8、otide polymorphism， SNP)与慢性牙周炎或侵袭性牙周炎易感性有一定相关性。促使人们把目光投向非炎症系统的 MMPs 家族基因作为候选基因，探寻其基因多态性和牙周炎的关系。近来在 MMP-2 基因启动子区发现-1306bp 位点胞嘧啶替换为胸腺嘧啶（CT）形成 SNP，改变了 CCACC盒而影响转录水平； 在 MMP-9 启动子区-1562bp 位点 CT 产生的 SNP 对转录也产生显著影响，T 等位基因表达水平升高；TIMP-2 基因启动子区-418bp位点上鸟嘌呤转换为胞嘧啶(GC)，影响到 Sp1 结合位点导致 TIMP-2 基因转录水平的下调，进而可能影响到 TIM
9、P-2 和 MMP-2 之间的平衡。本课题将对 MMP-2， MMP-9 和 TIMP-2 启动子区基因多态性与侵袭性牙周炎相关性进行研究。 牙周专科电子病历是对牙周病临床病例样本进行牙周临床指标统计分析的理想工具，对牙周临床科研工作的开展起着不可替代的作用。随着牙周病学研究的快速发展和口腔数字化管理的普及，亟需牙周专科电子病历，加快国内牙周电子病历的研制开发势在必行。为此本课题开发构建了牙周专科电子病历。 本课题还利用临床搜集的 AgP 患者牙龈组织标本，应用免疫组织化学法对 MMP-9、TIMP-2 的表达进行定位及半定量分析，探讨了 MMP-9、TIMP-2在侵袭性牙周炎不同基因型牙龈组
10、织中的表达情况。 4 第四军医大学博士学位论文第四军医大学博士学位论文 第一部分 牙周电子病历的构建 本研究采用微软 IIS（Internet Information Server）的 ASP(Active Server Page)服务器脚本语言和 ACCESS 数据库， 实现了牙周临床指标数据录入统计和牙周健康状况全景形象展示，较为全面细致地反映患者牙周状况，可以满足牙周专科和本课题临床病例牙周指数统计的需要，为发展国内牙周专科电子病历做出有益探索。 第二部分 MMP-2， MMP-9 和 TIMP-2 启动子区基因多态性与侵袭性牙周炎相关性研究 研 究 样 本 为 79 名 广 泛 型 侵
11、 袭 性 牙 周 炎 (generalized aggressive periodontitis，G-AgP)患者和 128 名临床牙周健康对照者；本研究样本的检验效能为 75%，样本量大小符合检测效能的要求。Chelex-100 法从颊拭子脱落细胞中提取 DNA，采用聚合酶链反应-变性高效液相色谱法（denaturing high- performance liquid chromatography，DHPLC）和限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism ， RFLP) 法 分 别 检 测 样 本MMP-2-1306bpC/T
12、，MMP-9-1562 C/T 和 TIMP-2-418G/C 启动子区基因多态性；分析两组中基因型分布、等位基因频率，以及 MMP-2 和 TIMP-2 复合基因单体型。 结果：结果：Chelex-100 法所提取 DNA 完全可以满足本实验候选基因的 SNP检测；G-AgP 组和对照组按照年龄和性别 t 检验 p = 0.157 和 0.124，两组的性别、年龄匹配。经卡方检验两组中 MMP-2，-9，和 TIMP-2 基因型符合哈代-温伯格平衡（Hardy-Wenberg equilibrium）(2= 0.0010.83,p0.05)。卡方检验均经过耶茨校正(Yates correct
13、ion)，多重卡方检验校正 p0.017 为有显著性意义。MMP-2-1306C/T、MMP-9-1562C/T 启动子区基因多态性在 G-AgP组和对照组中最常见的基因型为 CC，而 TT 基因型少见，各基因型在两组的5 第四军医大学博士学位论文第四军医大学博士学位论文 分布没有差异(p0.05)。等位基因频率在两组中也没有显著性差异(p=0.707，0.858)。 TIMP-2 启动子区基因多态性在 G-AgP 组和对照组中基因型和等位基因频率的分布：在 G-AgP 组 GC+CC 基因型（48.1%）比对照组（32.0%）明显增多p = 0.030; OR: 1.97, 95% CI:
14、(1.11;3.50)，这种差异经过多重卡方检验校正后失去显著性意义(p0.017)；TIMP-2-418G 和-418C 等位基因频率在G-AgP 组分别为 71.5%和 28.5%，而在对照组分别为 82.4%和 17.6%，等位基因-418C 在 G-AgP 组的检出频率显著高于对照组p=0.013; OR: 1.87, 95% CI: (1.17;2.99)。MMP-2 和 TIMP-2 复合基因单体型分析以常见的 MMP-2-1306 CC+TIMP-2-418GG 基因型作参照，两组中复合基因型分布差异没有显著性意义(p0.05)， 即没有显示出 MMP-2 和 TIMP-2 复合
15、基因的叠加作用和我国汉族人群侵袭性牙周炎有相关性。 结论：结论：MMP-2-1306C/T、MMP-9-1562C/T 启动子区基因多态性可能不是我国汉族人群侵袭性牙周炎的遗传易感因素；TIMP-2-418G/C 启动子区基因多态性与我国汉族人群广泛型侵袭性牙周炎有相关性，TIMP-2-418C 等位基因可能是我国汉族人群广泛型侵袭性牙周炎的遗传易感因素。 第三部分 MMP-9, TIMP-2 在不同基因型侵袭性牙周炎患者牙龈组织中的表达 本部分对 6 例健康牙龈标本和 9 例 AgP 患者牙龈标本，应用免疫组织化学染色法，按照 MMP-9-1562bpC/T、TIMP-2-418G/C 不同
16、基因型分组，观察牙龈组织中 MMP-9、TIMP-2 的表达，目的在于分析 MMP-9、TIMP-2 在侵袭性牙周炎不同基因型的龈组织表达情况。 结果：结果：在正常牙龈标本中 MMP-9 和 TIMP-2 几乎不表达，而在侵袭性牙周炎患者的牙龈组织中 MMP-9 和 TIMP-2 表达明显。MMP-9 主要在固有层炎性细胞密集区阳性表达；TIMP-2 多在上皮层表达。在病例组，含有6 第四军医大学博士学位论文第四军医大学博士学位论文 MMP-9-1562T等位基因和不含MMP-9-1562T等位基因的牙龈组织中MMP-9表达阳性细胞数量和平均灰度值无显著差别；不含 TIMP-2-418C 等位基因的牙龈组织中 TIMP-2 表达阳性细胞平均灰度值虽然高于含有 TIMP-2-418C 等位基因的牙龈组织，但无统计学意义；两种基因型的 TIMP-2 表达阳
