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1、中国海洋大学实验报告 2013 年 11 月 09 日姓名姓名：郭沈杰 年级专业年级专业：2012 级生物科学 同组者同组者：蔡萍萍学号：学号：12050011012实验五实验五 醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。二、实验原理蛋白质是两性电解质。当 PHPI 时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PHPI 时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PHPI 时，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动。血清中含有白蛋白、-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及
2、形状的不同，在电场中的迁移速度不同，故可用电泳法将其分离。2、电泳注意事项：电泳时需要注意电流和电压的控制，以及电泳时间。根据图谱分析可以估算血清中蛋白质的相对含量。图谱中颜色的深浅和面积大小可以反应血清蛋白质的含量，颜色较深中国海洋大学实验报告 2013 年 11 月 09 日者含量高，面积较大者含量高。由于电离时间等因素的影响，实验存在一定的误差。3、生物化学醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的试验中，如果区带的分离效果不好，可能存在的影响因素：1.电泳时间不足2.薄膜在染色或漂洗时重叠紧密且时间很长3.薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足4.点样时薄膜上是否存在多余的水分.4、用醋酸纤维薄膜法可以将
3、血清蛋白质分为哪几个区带可分 5 条带，分别为：1球蛋白、2球蛋白、球蛋白、球蛋白、白蛋白。可能分子量越小，带电量越高，运动速度越快。而这五种蛋白的分子量不同，带电量也不同，在电泳时的速度有快有慢。八、思考题1、影响醋酸纤维薄膜电泳的因素有哪些，其是如何影响的？血清变质：条带数会有偏差。巴比妥溶液 PH 不合适：影响电泳速率。漂洗次数过多或时间过长：看不清楚条带。 点样没点好浓度不均或者条带模糊。2、实验过程中哪些操作会影响到实验条带的完整性，应该如何改正？点样没有点好，盖玻片要直直的压在薄膜上，否则血清不均匀，影响电泳条带形状；血清不宜过多，若过多则条带过宽，分离不完全；也不易过少，过少则条带分离不完全。
