《采用安捷伦三重四极杆液质联用系统对动物源性-受体激动剂》由会员分享，可在线阅读，更多相关《采用安捷伦三重四极杆液质联用系统对动物源性-受体激动剂（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、摘要本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统/6495 三重四极杆液质联用系统，建 立了同时检测动物源性食品中 18 种 -受体激动剂类兽药（包括克伦特罗、莱 克多巴胺和沙丁胺醇等）的分析方法。该方法在 0.05-10 ng/mL 浓度范围内线 性相关性良好，相关系数 R2 0.990；在添加浓度 0.05 g/kg 下，各化合物峰面 积稳定性在 0.6%-5.8% 之间；各化合物定量下限均可达到 0.05 g/kg。通过对方 法灵敏度、精密度和线性范围等方法学参数进行考察，得到所建立的方法能在 15 min 内对动物源性食品中 18 种 -受体激动剂类目标化合物完成
2、快速、高灵敏 度的检测分析，完全满足法规监测要求。前言瘦肉精主要是指肾上腺素类药物，又称 -受体激动剂 (-agonist)，用于治疗支气 管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。瘦肉精添加在饲料中可以促进动物的 快速增长、减少脂肪含量、提高瘦肉率，但其在肉制品中的残留会对消费者的 身体健康造成损害。鉴于“瘦肉精”对消费者的潜在危害性，农业部 1997 年发 文禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用，2001 年和 2002 年，农业部分别下发文 件禁止食品动物使用 -激动剂类药物作为饲料添加剂（农业部 176 号、193 号公 告、235 号公告、560 号公告、1519 号条例）1-3。近年来，在畜
3、产品中非法使用瘦肉精的食品安全事件仍然频发，如双汇瘦肉精事件、浙江毒饲料事件等等。 目前各级农产品、食品安全监管部门不断加大监督检查力度，以确保消费者的 健康与安全。采用安捷伦三重四极杆液质联用系 统对动物源性食品中 -受体激动剂 类兽药残留进行分析应用简报作者李建中，薄涛，郭启雷， 吴翠玲，安蓉，张之旭安捷伦科技（中国）有限公司食品检测和农业2在早期，-受体激动剂类兽药多采用气质联用仪来进行检 测，但采用此方法需要样品衍生后再测定，且灵敏度有限。 近 10 年来，随着液质联用系统和相关技术的发展、普及， 以及对此类禁用药物越来越苛刻的检出限要求，LC/QQQ 技术已成为动物源性食品中 -受体
4、激动剂类兽药残留的主 要检测和确证技术手段，被广泛应用于监督监管中。目前 国内检测 -受体激动剂类药物的主要参照标准包括： GB/T 22286-2008 动物源性食品中多种 -受体激动剂残留量的测 定 液相色谱串联质谱法 、 农业部 1025 号公告-18-2008 动 物源性食品中 -受体激动剂残留检测 液相色谱-串联质谱 法4-9 等。由于属于禁用药物，其检出为“零允许 量”(Zero tolerance)，考虑到 LC/QQQ 的检测灵敏度，克伦 特罗最低检出限为 0.05 g/kg，其他 -受体激动剂检出限为 0.1 g/kg。针对此类禁用药物严苛的监测需求，本文采用 Agilent
5、 1290 Infinity 液相色谱系统/6495 三重四极杆液质联用系统，建立 了同时快速检测常见的 18 种 -受体激动剂类兽药的可靠定 量方法。该方法可以满足动物肌肉、内脏和饲料等动物源 性食品中 -受体激动剂残留量的检测要求。实验部分试剂与化学品所有试剂和溶剂均为色谱纯或者分析纯级。甲醇和乙腈 购自德国默克 (MERCK)。甲酸和乙酸铵购自美国 Sigma- Aldrich 公司。-受体激动剂标准品及同位素内标购自 Dr. Ehrenstorfer（德国奥格斯堡） 。所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水。仪器配置实验采用 Agilent
6、1290 Infinity 液相色谱系统进行分离，其由 下列部件组成： Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) Agilent 1290 Infinity 标准自动进样器 (G4226A) Agilent 1290 Infinity 取样冷却器 (G1330B） Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C)采用配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源和 iFunnel 离子 传输聚焦技术的 Agilent 6495 三重四极杆液质联用系统，在 正离子模式下进行检测。采用 Agilent MassHunter 工作站软件（B.07 版本）进
7、行数据 采集和分析。标准溶液配置所有 -受体激动剂标准品用甲醇配制为浓度 1 mg/mL 的储 备液，储存在 -20 C 冰箱内（有效期 1 年左右） 。用乙腈: 水 (50:50) 混合溶剂将储备液配制为 10 g/mL 的混合标准溶 液，储存在 4 C 下（有效期 1 个月左右） 。使用时，用乙 腈:水 (10:90) 混合溶剂将 10 g/mL 混合标准溶液进行适当 逐级稀释，临用新制。样品前处理称取 2 g 左右的均质样品（精确至 0.1 g） ，依次添加 20 mL 的 0.2 mol/L 乙酸铵缓冲液和 50 L 的 10000 units/mg -葡 萄糖甙酶/芳基硫酸酯酶，混合
8、均匀后，37 C 下反应过夜 (14-16 h)，取出冷却后，5000 r/min 离心 5 min，移取上层清 液，加 0.1% 高氯酸溶液调节 pH 至 1.00.3，5000 r/min 离心 5 min，再次移取上层清液，加 10 mol/L NaOH 溶液调节 pH 至 11.0，依次加入 10 mL 饱和 NaCl 溶液和 10 mL 异丙醇: 乙酸乙酯 (6:4) 混合溶液，萃取后离心，取有机相，氮气下 吹至近干后，用 5 mL 乙酸铵缓冲液溶解，待净化。依次用甲醇、水活化 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取 (SPE)，将上述复溶样品溶液全部转移到
9、 SPE 柱上，依次用 2% 甲酸溶液和甲醇淋洗柱子除去基质，最后用 5% 氨化甲 醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干后用液相色谱起始流动相 溶解，定容至 1 mL，过滤或高速离心后待测。3液相色谱条件色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18， 3.0 x 100 mm, 2.7 m柱温：40 C进样量：2 L自动进样器温度：10 C流动相：A) 含 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸铵 的水溶液 B) 含 0.1% 甲酸的乙腈流速：0.4 mL/min梯度程序：时间 B% 0.0 5 1.0 5 6.0 25 10.0 65 11.0 98 13.0 98停止时间
10、：13.0 min后运行时间：2.0 min质谱条件离子模式：正离子干燥气温度：150 C干燥气流量：15 L/min鞘气温度：350 C鞘气流量：11 L/min雾化器压力：35 psi毛细管电压：2500 V喷嘴电压：0 V EMV：200 VMS1 和 MS2 分辨率： 单位分辨率MRM 参数：如表 1 所示表 1. 化合物 MRM 参数列表 化合物母离子 (m/z)子离子 (m/z)碎裂 电压 (V)碰撞 能量 (V)碰撞池 加速器 电压 (V)保留 时间 (min)特布他林 (Terbutaline)226.1152.13801533.410730齐帕特罗 (Zilpaterol)2
11、62.2244.13801033.4618525沙丁胺醇 (Salbutamol)240.2222.1380833.4914815D3-沙丁胺醇 (D3-Salbutamol)243.2151.23801533.49西马特罗 (Cimaterol)220.1202.1380833.6160.115西布特罗 (Cimbuterol)2341603801034.5614330菲诺特罗 (Fenoterol)304.2286.23801034.63135.215莱克多巴胺 (Ractopamine)302.2164.13801036.1712122D5-莱克多巴胺 (D5-Ractopamine)3
12、07.2167.13801336.17克伦普罗 (Clenproperol)2632453801036.2420315氯丙那林 (Clorprenaline)214.1196.1380836.2515415妥洛特罗 (Tulobuterol)228.1172380837.0615415克伦特罗 (Clenbuterol)277.12033802237.0913230D9-克伦特罗 (D9-Clenbuterol)286.1204.13801537.09溴布特罗 (Brombuterol)3673493801037.7529320班布特罗 (Bambuterol)368.2312380837.8
13、929420盐酸克伦潘特 (Clenpenterol)291273380838.0120310马布特罗 (Mabuterol)311.1293380838.123715马喷特罗 (Mapenterol)325.12373801538.64217普萘洛尔 (Propranolol)260.21833801538.64116喷布洛尔 (Penbutolol)292.2236.23801539.86201204结果与讨论如图 1 所示，采用配有 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱（薄壳 型填料，3.0 x 100 mm，2.7 um）的安捷伦三重四极杆液质联 用系统，可在 15 min
14、 内对 0.1 ng/mL 混合标准溶液中 18 种 -受体激动剂类兽药进行有效分离，且分离效果及峰形均能满足方法要求。Poroshell 120 EC-C18 色谱柱具有较高柱 效、较低柱压和较高载样量等特点，非常适合分析动物源 性样品基质中的多药物残留。流动相中添加了 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸铵，可以有效促进正模式下的离子化效率。通过 S/N 10，计算得到 18 种 -受体激动剂类兽药的定量 下限均可达到 0.05 g/kg，完全满足动物源性食品中 -受体 激动剂类兽药的限量检测要求。9.84x104 00.20.40.60.811.21.41.61.822.22.4
15、2.62.8时间 (min)1.8 2.2 2.63 3.4 3.8 4.2 4.655.4 5.8 6.2 6.6 7 7.4 7.8 8.2 8.6 9 9.4 9.810.210.6图 1. 18 种 -受体激动剂类兽药混合标准溶液 (0.1 ng/mL) 的 MRM 叠加图6495 三重四极杆液质联用系统可充分满足 -受体激动剂类 兽药残留检测的要求，如表 1 所示为各兽药的 MRM 参数列 表，其中给出了碎裂电压参考值。6495 的新型预四极杆离 子传输聚焦技术、弯曲锥形碰撞池、以及高能电子倍增管 检测器设计，可以大大提高离子的聚焦传输，产生更有效 的离子碎片和更高的离子/电子转化率
16、，从而大大提高了检 测灵敏度、稳定性及抗污染能力。采用本文所述方法在浓度范围 0.05 -10 ng/mL 内对 18 种 - 受体激动剂类兽药的线性相关性进行讨论。结果表明，所 有化合物在此浓度范围内具有良好的线性相关性，相关系 数 R2 均大于 0.990，以克伦特罗为例，如图 2 所示。x105浓度 (ng/ml)-0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 9 9.5 1010.500.20.40.60.811.21.41.61.82y = 19141.988029 * x + 31.559631 R2 = 0.99887534响应值图 2. 克伦特罗标准曲线 (0.05-10 ng/mL)在猪肝基质提取液中添加 0.05 g/kg 浓度的混合标准溶液，
